薛樹(shù)媛 金 海 李長(zhǎng)青 李九月 侯先志 曹玉梅

植物多酚又叫植物單寧，廣泛存在于植物體內(nèi),尤其在熱帶和亞熱帶的一些半喬木和灌木類植物中單寧含量較高。當(dāng)家畜過(guò)量采食這些植物后，會(huì)引起不良反應(yīng)甚至中毒，如消化率下降、采食量降低、酮體品質(zhì)下降等[1－3]。近幾年來(lái)，隨著對(duì)單寧生物營(yíng)養(yǎng)學(xué)功能的研究深入，發(fā)現(xiàn)飼用植物中的單寧具有防止家畜發(fā)生鼓脹病的作用，還能提高蛋白質(zhì)的利用率等（Feng yu等，1995）[4]。因此，本文初步探討荒漠地區(qū)主要飼用灌木酚類物質(zhì)含量及動(dòng)態(tài)規(guī)律，并討論單寧對(duì)反芻家畜潛在的影響，為今后灌木資源的開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料及方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

灌木類植物樣品：大白檸條(Caragana korshinskii Kom)、沙棘(Seabuckthorn)、沙柳(Salix psammophila)、中間錦雞兒 (Caragana intermedia)、花棒(Hedysaram Svopaxium)、胡枝子(Lespedza bicolor Turcz.)、駝絨藜[Ceratoides lateens(J.F.Gmel.)]、羊柴(Hedy sarum leave mongolicum)。

牧草：紫花苜蓿（Medicage falcate L.）。

1.2 樣品的采集及處理

樣品分別采集于內(nèi)蒙古鄂爾多斯市烏審旗荒漠地區(qū)2009年5下旬、7月下旬、9月中旬。樣品帶回實(shí)驗(yàn)室后，自然陰干，粉碎后過(guò)2.0 mm的篩子。將粉碎好的植物樣品粉末裝袋、編號(hào)、保存在陰涼干燥避光處待測(cè)。

1.3 酚類物質(zhì)的測(cè)定

1.3.1 單寧提取液的制備

準(zhǔn)確稱取200 mg磨碎(粒徑為80目)試樣于25 ml的容量瓶中，加入70%的丙酮10 ml，置于室溫下水浴浸提 20 min（2×10 min，中間取出靜止 5 min）。浸提液倒入離心管中，3000 r/min離心10 min，收集上清液4℃保存，離心管中殘?jiān)謨纱斡? ml 70%丙酮溶液洗滌，依照上法再處理一次。將上清液倒入25 ml容量瓶中，用丙酮溶液定容，該溶液為提取液。

1.3.2 總多酚含量的測(cè)定

參考 Folin－Ciocalteu 試劑比色法（Makkar，1993）[5]。取5 ml提取液于100 ml容量瓶中，用蒸餾水定容至100 ml。取1 ml提取液的試液于10 ml的容量瓶中，再移入 5 ml經(jīng)稀釋過(guò)的Folin－Ciocatlue試劑，用7.5%的碳酸鈉溶液定容至刻度，搖勻，在紫外分光光度計(jì)760 nm波長(zhǎng)，用1 cm比色皿測(cè)定吸光度，空白試劑作參比，以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品。

1.3.3 簡(jiǎn)單酚含量測(cè)定

參考 Folin－Ciocalteu 試劑比色法（Makkar，1993）[5]。稱取100 mg聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)，放入小試管中，加入1.0 ml的蒸餾水，然后加入適量的提取液(0.5 ml)。蝸旋試管，在4℃下放置試管15 min,再次蝸旋。然后3000×g離心分離15 min。收集上清液倒入10 ml的容量瓶中。再加5 ml的Folin－Ciocatlue試劑，再用7.5%的碳酸鈉溶液定容至刻度。靜置0.5 h后在紫外分光光度計(jì)760 nm波長(zhǎng)，用1 cm比色皿測(cè)定吸光度，空白試劑作參比。然后用標(biāo)準(zhǔn)曲線算出簡(jiǎn)單酚含量。

1.3.4 單寧含量的計(jì)算

單寧含量=總酚含量－簡(jiǎn)單酚含量。

1.3.5 沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別吸取 0、0.1、0.3、0.5、0.8 ml的沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)液于一系列10 ml的容量瓶中，即沒(méi)食子酸的濃度分別為:0、0.1、0.3、0.5、0.8 mg/l，根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)所確定的條件，F(xiàn)olin－Ciocaltue試劑用量為5 ml，用7.5%的碳酸鈉溶液定容，其余按實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行。沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖1。

1.3.6 縮合單寧含量的測(cè)定

參照Porter（1986）等[6]的方法。在100 mm×12 mm的玻璃試管中，加入0.50 ml用700 ml/l丙酮稀釋的單寧提取液，丙酮的量應(yīng)該足夠大以防止在試驗(yàn)中吸光度(波長(zhǎng)550 nm)超過(guò)0.6。在試管中加入3.0 ml丁醇－鹽酸試劑和0.1 ml的鐵試劑，渦旋試管。蓋上試管沸水浴60 min，冷卻后記錄550 nm的吸光度。以兒茶素為標(biāo)準(zhǔn)物，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖2。

圖1 沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 兒茶素標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel－2003及SAS軟件包進(jìn)行方差分析，多重比較用Duncan's法。以P＜0.05和P＜0.01作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 主要飼用灌木類植物總多酚含量的動(dòng)態(tài)變化(見(jiàn)表 1、圖 3)

由表1和圖3可看出，各飼用灌木類植物總多酚含量均較高,高于紫花苜蓿,且隨生長(zhǎng)期在變化。大多數(shù)灌木的總多酚含量在生長(zhǎng)期有“V”字型變化，5月和9月較高，而7月較低，但沙棘和胡枝子的總多酚含量卻在生長(zhǎng)期間逐漸上升，并且不同生長(zhǎng)期之間總多酚含量差異極顯著(P＜0.01)。羊柴、花棒、沙棘和沙柳總多酚平均含量較高，分別為101.78、101.76、98.47 g/kgDM和96.13 g/kgDM。羊柴和花棒總酚含量在各生長(zhǎng)期間變化不大，沙棘和沙柳總多酚在各生長(zhǎng)期間變化較大。幾種飼用灌木中總多酚含量最低的是駝絨藜，為76.70 g/kgDM。

表1 飼用灌木不同生長(zhǎng)期總多酚含量（g/kgDM）

圖3 飼用灌木生長(zhǎng)期總多酚含量的動(dòng)態(tài)變化

2.2 主要飼用灌木類植物單寧含量的動(dòng)態(tài)變化(見(jiàn)表2、圖4)

表2 飼用灌木不同生長(zhǎng)期單寧含量（g/kgDM）

圖4 飼用灌木生長(zhǎng)期單寧含量的動(dòng)態(tài)變化

由表2和圖4可以看出，各飼用灌木類植物單寧含量隨著生長(zhǎng)期有一定的變化，變化趨勢(shì)基本上跟總多酚含量一致，不同生長(zhǎng)期間單寧含量差異極顯著（P＜0.01）。與紫花苜蓿比較，灌木類植物單寧平均含量均高于紫花苜蓿。羊柴單寧含量最高，其平均單寧含量為86.09 g/kgDM。

2.3 主要飼用灌木類植物縮合單寧含量的動(dòng)態(tài)變化(見(jiàn)表 3、圖 5)

表3 飼用灌木不同生長(zhǎng)期縮合單寧含量（g/kgDM）

圖5 飼用灌木生長(zhǎng)期縮合單寧含量的動(dòng)態(tài)變化

從表3和圖5可看出，飼用灌木類植物所含縮合單寧含量不同?？s合單寧含量在生長(zhǎng)期間呈“V”字型變化或隨生長(zhǎng)期含量逐漸增加。并且生長(zhǎng)期間各灌木類植物縮合單寧含量之間有顯著差異。不同灌木間縮合單寧含量差異顯著。縮合單寧含量最高的是羊柴，其次是花棒，含量分別為46.66 g/kgDM和43.51 g/kgDM。幾種灌木縮合單寧平均含量均高于紫花苜蓿。

3 討論

酚類化合物是一種具有多種生物學(xué)特性的復(fù)雜化學(xué)成分，其含量高低直接關(guān)系到家畜的采食量和健康水平[7]。本試驗(yàn)結(jié)果表明總多酚、單寧、簡(jiǎn)單酚和縮合單寧含量在不同生長(zhǎng)期不同灌木間差異極顯著(P＜0.01)。4種酚類物質(zhì)的含量總體表現(xiàn)為總酚＞單寧＞縮合單寧＞簡(jiǎn)單酚。這一結(jié)果與文亦芾（2009）[8]對(duì)豆科飼用灌木中酚類物質(zhì)動(dòng)態(tài)變化研究結(jié)果一致。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著生長(zhǎng)期各灌木類植物總多酚和單寧含量有“V”字型變化或由低到高的趨勢(shì)，這與王靜（2005）[9]對(duì)高寒地區(qū)植物中酚類物質(zhì)含量動(dòng)態(tài)研究的結(jié)果一致。本實(shí)驗(yàn)幾種主要飼用灌木植物中，羊柴的酚類物質(zhì)含量最高，總多酚、單寧、縮合單寧含量分別達(dá)101.78、86.09、46.66 g/kgDM。沙棘和花棒的酚類物質(zhì)含量也較高。幾種灌木總多酚平均含量均高于紫花苜蓿。

單寧含量的變化與總多酚變化趨勢(shì)相同。單寧平均含量在63.30～86.09 g/kgDM，幾種灌木植物中單寧含量最高的是羊柴，最低的是中間錦雞兒。幾種灌木單寧平均含量也均高于紫花苜蓿。

本實(shí)驗(yàn)中在不同生長(zhǎng)期各灌木縮合單寧含量各不相同，縮合單寧含量隨生長(zhǎng)期呈“V”型變化，平均含量在 25.66～46.66 g/kgDM,這與郭彥軍（2000）[10]高寒草甸灌木縮合單寧含量動(dòng)態(tài)隨生長(zhǎng)期逐漸下降的研究結(jié)果不相一致，有待于進(jìn)一步進(jìn)行研究和測(cè)定。Jacson等（1996）[11]研究表明，植物縮合單寧含量低于55 g/kgDM時(shí)，可在家畜日糧中占一定的比例。如果縮合單寧含量在100～124 g/kgDM時(shí)只能在日糧中少量添加，以稀釋縮合單寧濃度。本實(shí)驗(yàn)中幾種灌木植物縮合單寧平均含量在25.66～46.66 g/kgDM，表明如果這些灌木植物作為飼用植物，其中的酚類物質(zhì)對(duì)動(dòng)物體健康不會(huì)造成影響，所以可以開(kāi)發(fā)利用這些灌木資源作為家畜的飼料來(lái)源之一。開(kāi)發(fā)利用灌木植物資源一方面可以增加飼料來(lái)源，另一方面可以利用縮合單寧的過(guò)瘤胃保護(hù)作用，提高氮的利用率。

4 小結(jié)

①荒漠地區(qū)幾種主要灌木類植物在生長(zhǎng)期間總多酚含量和單寧含量呈“V”字型變化或隨生長(zhǎng)期而逐漸上升，而且各生長(zhǎng)期之間差異極顯著。總多酚和單寧平均含量分別為 75.76～101.78 g/kgDM和61.0～86.09 g/kgDM。在各生長(zhǎng)期間灌木類植物總多酚和單寧平均含量均高于紫花苜蓿。

②各灌木類植物縮合單寧平均含量為25.66～46.66 g/kgDM，含量最高的是羊柴，所有的灌木植物中單寧的含量會(huì)影響植物的適口性但不會(huì)對(duì)反芻家畜造成毒性反應(yīng)，可以做飼料資源加以開(kāi)發(fā)利用。隨生長(zhǎng)期各灌木類植物縮合單寧含量呈“V”字型變化，在縮合單寧含量最低的月份7月，正是植物幼嫩，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量豐富的時(shí)期，適于收割。但此期生物量相對(duì)較低，產(chǎn)草量低，牧草水分含量高不宜于物理貯存。加入生物發(fā)酵菌劑進(jìn)行生物發(fā)酵有利用于灌木植物保持水分，減少營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的流失，降低抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)的含量，有待于從菌種選擇生物學(xué)調(diào)制方面做進(jìn)一步的研究。

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