王家偉，戴習林，謝 劍，臧維玲，丁福江

（1.上海海洋大學水產與生命學院，上海 201306；2.上海申漕特種水產開發(fā)公司，上海 201376）

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗于2008年3～5月在上海申漕特種水產開發(fā)公司進行。試驗用幼體為購自廈門的凡納濱對蝦無節(jié)幼體（子一代，F(xiàn)1），在長方形 51×61×38 cm3塑料箱（118L)內培養(yǎng)。試驗用水采用濃縮海水與天然河口水調配成鹽度為28.6的育苗海水，過濾、消毒后使用。

1.2 試驗餌料

試驗用餌料為牟氏角毛藻（Chaetoceros mulleri，CM）、綠色巴夫藻（Pavlova vilids，PV）、湛江叉鞭金藻（Dircaraleria galbana，DG），云微藻（Chlorophyta sp，Cs）、褶皺臂尾輪蟲（Brachionus plicatilis，BP）、蒙古裸腹溞（MM），以及購自市場的鹵蟲（Aitemia salina，AS）卵、雙色蝦片、螺旋藻粉、食母生、B.P粉（一種微囊飼料）和對蝦人工配合飼料（FD）。

單胞藻用f/2配方配制的營養(yǎng)液培養(yǎng)；采用酵母（YE）為主、單胞藻為輔，交替飼養(yǎng)BP和MM，分別在投喂幼體前8 h和12 h用單胞藻營養(yǎng)強化。

1.3 試驗設計

試驗設計6種餌料搭配，每種2個重復，每組對蝦無節(jié)幼體（N）密度為4～5萬尾/m3。以全FD為對照組，試驗用餌料種類和搭配列于表1。

表1 各試驗組餌料投喂種類和密度

1.4 試驗管理

試驗期間，連續(xù)充氣，水溫30±0.2℃，光照強度3 000～10 000 Lx。每日測定水化學指標和餌料密度，自M1開始每日換水20%，上午每個水槽隨機采樣5點估算幼體數(shù)，記錄幼體發(fā)育狀況。

1.5 脂肪酸和水質指標的測定

總脂抽提參照Folch法[7]，采用14%的三氟化硼-甲醇（v/v）進行甲脂化，儀器為Agilent-6890氣相色譜。水質測定方法：CODMn采用堿性高錳酸鉀法，NO2--N采用重氮偶氮比色法，NO3--N采用鋅鎘還原-重氮偶氮比色法[8]，pHB-4型 pH計測定pH值。

2 結果與分析

2.1 餌料脂肪酸含量與組成

2.1.1 單胞藻脂肪酸含量 單胞藻脂肪酸相對含量測定結果列于表2。由表2知，PV的n-3HUFA和∑EFA相對含量最高分別為51.7%和31.2%，CM、DG次之，Cs最低，分別僅為PV的1/6和1/2。C18∶3n-3僅在PV和CM中檢出。EPA在PV和CM中相對含量高，分別為27.9%和23.8%，Cs中未檢出。DG、PV的DHA相對含量都很高，分別為19.8%和12.6%，Cs較低為8.8%。

表2 單胞藻脂肪酸相對含量

2.1.2 營養(yǎng)強化輪蟲的脂肪酸含量與組成 營養(yǎng)強化后的BP體內脂肪酸相對含量列于表3。由表3可知，BPCs體內∑EFA、n-3HUFA的相對含量最高，分別為17.4%與26%，次之為BPCM，分別是23.3%與17%。C18∶3n-3在5種藻液強化BP體內均未檢出，DHA僅在BPDG體內未檢出，其余3種必需脂肪酸均被檢出。5種藻液強化BP體內EPA和DHA相對含量都存在較大差異，BPCs體內DHA和EPA含量最大分別為17.4%和8.6%，分別是BPDG的3倍和17倍。

供給情況：氮肥方面，尿素企業(yè)復產停產交替，總體以復產增產居多，企業(yè)整體開工率小幅上升至54%。磷肥方面，個別前期短期檢修的企業(yè)陸續(xù)復產，二銨企業(yè)整體開工率升至66%。鉀肥方面，鹽湖基準產品60%粉晶到站價2200-2250元/噸，每日發(fā)運量200-300車；港口鉀供應持續(xù)緊俏；邊貿鉀供應仍偏緊。復合肥方面，經銷商拿貨緩慢，部分企業(yè)因庫存較多降低產量，各地環(huán)保壓力不減，企業(yè)整體開工率下降至40%。

表3 單胞藻營養(yǎng)強化輪蟲的肪酸相對含量

2.1.3 營養(yǎng)強化后蒙古裸腹溞的脂肪酸含量 單胞藻營養(yǎng)強化的MM的脂肪酸相對含量測定結果列于表4。由表4可見，MMDG和MMPV體內∑EFA的相對含量最高，分別為44.3%和42.4%，約為MMYE的2倍，而MMCs和MMMA體內∑EFA相對含量低于MMYE。MMPV體內EPA的相對含量最高為13.5%，是MMMA的4倍，MMDG雖未檢到EPA，但DHA含量最高，為31.6%，分別是MMPV、MMCM、MMYE的 1.5、2、4 倍，而 MMCs和 MMMA未檢出。所有組MM體內未檢出C18∶3n-3，∑n-3HUFA含量呈現(xiàn)與∑EFA一樣的規(guī)律。

表4 單胞藻營養(yǎng)強化蒙古裸腹溞脂肪酸相對含量

2.2 凡納濱對蝦幼體培育效果

凡納濱對蝦仔蝦和幼體各階段存活率及發(fā)育情況分別列于表5和圖1、圖2。表5表明，N變態(tài)為Z1階段（N→Z1），投喂Cs和混合藻的幼體存活率r最低，分別只有78.4%和65.8%，其它組r均在80%以上。Z1→Z2，CM、DG、CMF、PV 組是高 r組，Cs組最低為45.6%。

表5 凡納濱對蝦幼體、仔蝦發(fā)育狀況與存活率

由圖 1可知，Z2→Z3，F(xiàn)D 組 r最高，達到94.6%，CM與CMF組次之，且三者間無明顯差異，Cs、DG和PV組r最低，分別只有75.0%、71.2%和64.8%，且相互間無差異。Z3→M1，CM組r最高為93.4%，顯著高于PV、CMF組的80.8%與78.1%，DG組最低為48.3%。

M1→P，幼體變態(tài)情況分別是r為90%組（CMF、PV 組）、80%組 （DG、CM 組）、70%組（MA、Cs、FD組）。P階段，F(xiàn)D組r最低為49.8%，其余組均在90%以上。

由表5可發(fā)現(xiàn)，各實驗組N變態(tài)為Z2與M變態(tài)為P速度一致，PV和Cs組Z2，2 d才發(fā)育至Z3，其余組僅1 d；CM組、CMF組與FD組Z3，3 d內全部變態(tài)為M1，而PV藻組和Cs組需5 d。

由圖2可知，出苗率最高發(fā)生在CM藻與CMF組，PV組次之為26.2%，Cs與FD組最低，低于10%。

圖1 凡納濱對蝦幼體各階段的存活率

圖2 凡納濱對蝦幼體各階段的存活率

3 討 論

3.1 輪蟲和蒙古裸腹溞的營養(yǎng)強化效果

BP和MM是人工育苗中的重要生物餌料，但是酵母培養(yǎng)的BP和MM體內EPA和DHA含量很低，有資料報道酵母輪蟲n-3HUFA、EPA和DHA的相對含量分別只有0.9%、0.7%和0.2%[4]。除MMDG 的 EPA 未檢出外，MMCM、MMPV、MMCs體內∑EFA、n-3HUFA、EPA和 DHA含量都高于MMYE，營養(yǎng)強化的MM和相對應的藻類體內脂肪酸的組成和相對含量趨于一致，此與何志輝等[11]的研究結果一致，表明蒙古裸腹溞的生化組成明顯受食物條件的控制。

同時試驗所用4種藻類除BPDG的EPA含量沒有提高外，BPCM、BPPV、BPCs體內 n-3HUFA、EPA 和DHA含量都明顯高于BPYE；Cs中n-3HUFA、EPA含量最低，但BPCs中n-3HUFA、EPA含量最高，PV體內n-3HUFA、EPA含量最高，但其BPPV體內n-3HUFA、EPA含量卻較低，營養(yǎng)強化的BP和相對應的藻類體內脂肪酸的組成和相對含量并不趨于一致，與陳煒[12]的研究結果相似，表明輪蟲的脂肪酸組成明顯受餌料影響，但又不完全取決于餌料。因此，采用合適的單胞藻強化BP和MM，可顯著提高它們體內的HUFA，而且MM受食物的影響要大于褶皺臂尾輪蟲，生產過程中，可選擇HUFA含量高的單胞藻強化MM，而對于BP并非如此。

3.2 HUFA對凡納濱對蝦幼體存活率的影響

蝦蟹類中，機體吸收的部分n-3HUFA尤其是EPA和DHA能用于合成磷脂，構成磷脂雙層膜，磷脂能促進膽固醇 (合成蛻皮激素的前體物質)的吸收和利用，n-3HUFA間接影響了蝦蟹類幼體的蛻皮與提高幼體變態(tài)和存活率[13]。但大部分海水蝦蟹類卻不能合成EPA和DHA，只能從食物中獲得[14]。Z1→Z2，r最低組是n-3HUFA含量最低的Cs組，甚至低于FD組；BPDG體內n-3HUFA含量最低，尤其是EPA含量僅占總脂含量的0.5%，對應的Z2→M階段，投喂BPDG組r最低，幼體發(fā)育速度較慢。可見餌料中n-3HUFA的含量顯著影響幼體發(fā)育，BPCs、BPDG不能完全滿足幼體發(fā)育的需要。

比較藻類脂肪酸含量發(fā)現(xiàn)，CM含有全部的對蝦5種必需不飽和脂肪酸，而其它藻類體內最多檢到4種，這可能是CM組和CMF組的各階段幼體與仔蝦r高，變態(tài)速率快的原因之一。梁華芳等[15]也發(fā)現(xiàn)CM投喂凡納濱對蝦效果要好于PV、球等鞭金藻、中肋骨條藻。

對于Cs組，又發(fā)現(xiàn)即使在Z2→M階段投喂HUFA最高的BPCs，幼體的存活率仍較低，且Z2、Z3生長緩慢，2 d才全部變態(tài)為Z3，5 d全部變態(tài)為M1。此可能是Z1階段幼體餌料HUFA含量低，進而影響Z2→M階段幼體發(fā)育，這與Legger等[16]發(fā)現(xiàn)藍對蝦早期幼體攝取的HUFA對后期幼體的營養(yǎng)狀況有明顯影響的結論一致。

3.3 餌料搭配對凡納濱對蝦幼體發(fā)育的影響

BPMA與MMMA體內HUFA均最低，且均不含DHA，MA組的Z1→M的幼體變態(tài)率均較低，Z3發(fā)育緩慢，并沒有體現(xiàn)出MA營養(yǎng)互補，增加強化效果，促進幼體發(fā)育的優(yōu)勢。這可能由于幾種藻混合使用產生“毒性”作用，曹淑莉等[17]也作了類似的報道。

有資料表明鹵蟲HUFA含量低，本次試驗的仔蝦培育階段，AS與CM或強化MM搭配飼養(yǎng)的仔蝦r是AS搭配FD的2倍，這表明AS與CM或強化MM都能形成營養(yǎng)互補，提高仔蝦存活率。

投喂合適的單胞藻、BP、MM等活餌料的蝦苗出苗率優(yōu)于FD組，分析兩者育苗效果不同的原因，首先是活餌料均勻散布于水體中，對蝦幼體可一直攝取，而配合飼料易沉底，過量投喂也難以提高攝食率；其次是配合飼料易敗壞水質，試驗中投喂過FD的CMF組與FD組水體中弧菌含量和CODMn 分別為 440、400、5.54、5.90 mg/L，明顯高于未投FD組，而活餌料不僅對水質污染小，單胞藻還可凈化水體，做動物性活餌料的營養(yǎng)強化飼料。

綜上所述，CM或Cs可用來強化BP，CM或PV可用來強化MM，CM、PV和DG可作為凡納濱對蝦Z1的開口餌料，后階段幼體培育階段可用來調節(jié)水質，并作輔助餌料，但不宜采用兩種或兩種以上的MA強化或投喂?？捎脧娀疊P培育凡納濱對蝦Z2→M，可交替使用強化蒙古裸腹溞與鹵蟲無節(jié)幼體培育仔蝦。在生產中可采用BPCM或BPCs、AS、MMPV的餌料搭配培育凡納濱對蝦蝦苗。

[1] 朱麗巖，鄭家聲，王梅林.不同餌料及添加劑對中國對蝦幼體的影響[J].海洋科學，2000，24（11）：41-44.

[2] 張 煜，臧維玲，劉永士，等.淡水養(yǎng)殖凡納濱對蝦的瞬時耗氧速率與體長、溶氧水平關系研究[J].湖南農業(yè)科學，2010，（5）：136-139.

[3] 藍漢冰，曹俊明，許丹丹，等.飼料中添加核苷酸粗提物對凡納濱對蝦生長性能的影響[J].廣東農業(yè)科學，2009，（10）：143-145.

[4] 陳 煒，王 鑫，童圣英.海洋酵母培養(yǎng)褶皺臂尾輪蟲的脂肪酸組成研究[J].水產科學，2001，20（3）：3-6.

[5] 童圣英，林成輝，王雪濤.蒙古裸腹溞營養(yǎng)成分分析與評價[J].大連水產學院學報，1988，（Z1）：29-33.

[6] 曾慶華，周洪琪，黃旭雄，等.我國六個產地鹵蟲初孵無節(jié)幼體的營養(yǎng)價值[J].上海水產大學學報，2001，10（3）：213-217.

[7] Folch J M L，Sloane G H S.A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues[J].J Bio Chem，1957，226：497-509.

[8] 國家質量監(jiān)督局.海水分析[S]//海洋監(jiān)測規(guī)范.北京：中國標準出版社，1998.142-142，150-162.

[9] 李荷芳，周漢秋.海洋微藻脂肪酸組成的比較研究[J].海洋與湖沼，1999，34（1）：31-40.

[10] 季文娟，徐學良.中國對蝦（Penaeus orientalis Kishinouye）的幾種必需脂肪酸營養(yǎng)價值的比較研究 [J].中國水產科學，1994，（1）：1-9.

[11] 何志輝，秦建光，閻立光，等.一種鹽水裸腹溞的生物學和培養(yǎng)的研究[C].全國魚蝦飼料學術討論會文集，1988.188-192.

[12] 陳 煒，李曉東，王增立，等.雞糞漿及5種微藻對輪蟲脂肪酸組成的影響[J].水產科學，2006，25（3）：113-116.

[13] 陳立僑，江洪波，周忠良，等.ψ-3HUFA對中華絨螯蟹幼體存活率及體脂肪酸組成的影響[J].水產學報，2000，24（5）：448-452.

[14] 成永旭，嚴生良，王 武，等.飼料中磷脂和多不飽和脂肪酸對中華絨螯蟹大眼幼體育成仔蟹的存活率和生長的影響 [J].水產學報，1998，22（1）：9-15.

[15] 梁華芳，龍建藝，林小彬，等.5種單胞藻培育南美白對蝦溞狀幼體的餌料效果[J].海洋科學，2001，25（7）：9-10.

[16] Leger P,Beiber G F,Soregloos P.International study on ArtemiaⅩⅩⅩⅢ.Promising results in larval rearing of Penaeus stylirostris using a prepared diet as algal substitute and for Artemia enrichment[J].J World Aquac Soc,1985,16：354-367.

[17] 曹淑莉，向葆卿，房 慧，等.幾種海洋微藻喂養(yǎng)中國對蝦溞狀幼體餌料效果的試驗研究[J].海洋通報，1990，9（3）：56-62.