張曉艷,郭全友,楊憲時(shí),李學(xué)英
(1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所,上海 200090;2.上海海洋大學(xué)食品學(xué)院,上海 201306)
大黃魚(yú)(Pseudosciaena crocea)屬鱸形目,石首魚(yú)科,俗稱(chēng)黃花魚(yú),又名黃魚(yú)、大鮮、大黃花,為傳統(tǒng)“四大海產(chǎn)”之一,也是我國(guó)近海主要經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)。因其肉質(zhì)細(xì)嫩鮮美、蛋白質(zhì)高、膽固醇低,治療貧血、滋補(bǔ)身體而成為海水魚(yú)類(lèi)中的極品,深受海內(nèi)外消費(fèi)者的青睞。隨著網(wǎng)箱養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展,大黃魚(yú)的產(chǎn)量逐年增加,主要分布在福建、浙江等地,產(chǎn)品以冰鮮和淡腌制品為主。新型淡腌黃魚(yú)制品正在形成水產(chǎn)品加工的產(chǎn)業(yè),它是依據(jù)柵欄效應(yīng)理論開(kāi)發(fā)的,屬于低鹽(NaCl≤6%)、低酸(pH 值>5.0)、高水分活度(Aw≥0.90)、加或不加其他防腐劑(包括煙熏),真空包裝,低溫流通的一類(lèi)輕微加工產(chǎn)品。因其含鹽量的減少,其抑菌作用減弱,往往需要通過(guò)降低水分活度、pH值、加工貯藏溫度等抑菌措施,以及控制衛(wèi)生條件減少外界的細(xì)菌污染來(lái)保證產(chǎn)品品質(zhì)和安全性。近年來(lái)國(guó)內(nèi)對(duì)該類(lèi)魚(yú)制品的加工工藝和風(fēng)味品質(zhì)進(jìn)行了研究[1-3]。
目前市場(chǎng)上的淡腌黃魚(yú)制品多沿用傳統(tǒng)的腌臘魚(yú)制作工藝,生產(chǎn)方式在很大程度上受到自然氣候條件的影響,產(chǎn)品批量小,不同廠家和批次的產(chǎn)品品質(zhì)明顯存在差異。本文通過(guò)抽取5批市場(chǎng)上具有代表性的產(chǎn)品,分析其感官、理化、細(xì)菌學(xué)品質(zhì)特性的不同,并對(duì)細(xì)菌菌相進(jìn)行定性和定量研究,探求不同柵欄因子種類(lèi)和強(qiáng)度與產(chǎn)品品質(zhì)特性的關(guān)聯(lián),以及對(duì)產(chǎn)品細(xì)菌類(lèi)型和數(shù)量的影響,為優(yōu)化加工工藝參數(shù)和靶向抑制產(chǎn)品腐敗,實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化提供依據(jù)。
隨機(jī)購(gòu)買(mǎi)5批真空包裝的淡腌黃魚(yú)制品各3袋,每袋魚(yú)體長(zhǎng)度(27±3)cm,體重(280±5)g。2 批由福建2個(gè)生產(chǎn)企業(yè)提供,3批購(gòu)買(mǎi)于上海兩個(gè)大型超市(見(jiàn)表1),運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室后按其標(biāo)稱(chēng)貯藏溫度貯藏(表1)備用。
表1 淡腌黃魚(yú)制品情況
水分活度測(cè)定儀(LabMaster-Aw,瑞士),pH測(cè)定儀(Testo-230,德國(guó)),Sensititre微生物鑒定系統(tǒng)(Trek Diagnostic System Ltd,UK)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE-5203A,中國(guó))、GPID和 GNID鑒定板(Trek Diagnostic System Ltd,UK);硝酸銀、氧化鎂、硼酸、稀鹽酸、冰乙酸、硫代硫酸鈉、氯化鈉、碘化鉀均為AR(上?;瘜W(xué)試劑公司),營(yíng)養(yǎng)瓊脂、蛋白胨為BR(上?;瘜W(xué)試劑公司)。
分別檢測(cè)5批樣品的感官變化、水分含量、鹽分含量、水分活度(Water Activity,Aw)、pH 值、揮發(fā)性鹽基氮(Total Volatile Basic Nitrogen,TVBN)、過(guò)氧化值(Peroxide Values,POV)、菌落總數(shù)(Total Viable Count,TVC)、大腸菌群(Coliform bacteria)。每批樣品做3個(gè)平行,取平均值。
1.4.1 感官質(zhì)量評(píng)價(jià) 由6名經(jīng)過(guò)訓(xùn)練的評(píng)價(jià)員組成感官評(píng)價(jià)小組,人員基本固定。在進(jìn)行正式評(píng)定前,小組成員經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的訓(xùn)練,熟練掌握評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)。主要評(píng)價(jià)樣品的外觀、色澤、氣味、風(fēng)味和口感。感官評(píng)價(jià)時(shí)在恒溫、恒濕、光線穩(wěn)定的獨(dú)立空間進(jìn)行。對(duì)加熱后的魚(yú)進(jìn)行感官評(píng)價(jià)時(shí),將剖切后剩余的半條魚(yú)放入微波爐中用600 W功率微波5 min后立刻進(jìn)行感官評(píng)價(jià)。采用2點(diǎn)連續(xù)標(biāo)度法?!?”表示可以作為良好商品,“0”表示作為商品不良或不可以食用。
1.4.2 樣品處理 分別從5批樣品魚(yú)中各取整個(gè)半條魚(yú)肉和魚(yú)皮,使用組織搗碎機(jī)打碎。
1.4.3 水分含量的測(cè)定 參照GB 5009.3—2010食品中水分的測(cè)定方法,采用直接干燥法測(cè)定。
1.4.4 pH值的測(cè)定 稱(chēng)取10.00 g切碎樣,加蒸餾水90 mL,浸泡30 min,過(guò)濾后取濾液,用便捷式pH測(cè)定儀(PHS-3D型,上海精密科學(xué)儀器有限公司)測(cè)定。
1.4.5 水分活度的測(cè)定 使用Nonasina水分活度儀(LabMaster-Aw,瑞士)測(cè)定,操作方法參照使用手冊(cè),測(cè)定水分活度[4]。
1.4.6 NaCl的測(cè)定 參照SC/T 3011—2001水產(chǎn)品中鹽分的測(cè)定方法,采用直接滴定法測(cè)定。
1.4.7 TVBN的測(cè)定 稱(chēng)取約10.00 g打碎魚(yú)肉于錐形瓶中,加入90 mL無(wú)氨蒸餾水浸泡,用玻璃棒攪勻并進(jìn)行封口,振搖,浸漬30 min后過(guò)濾,濾液按半微量定氮法進(jìn)行,每個(gè)樣品至少做2個(gè)平行??蓞⒄誗C/T3032—2007水產(chǎn)品中揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定。
1.4.8 POV的測(cè)定 稱(chēng)取樣品魚(yú)肉200~300 g,加入適量石油醚浸泡,使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(約50℃)提取油脂。根據(jù)估計(jì)的過(guò)氧化值,稱(chēng)取適量的油脂于碘量瓶中,加入 50 mL 乙酸-異辛烷混合液(3∶2),震蕩至樣品溶解。加入lmL飽和碘化鉀溶液,振勻后置暗處反應(yīng)2~3 min,取出加30 mL去離子水,用0.01 N標(biāo)準(zhǔn)硫代硫酸鈉滴定,至黃色幾乎消失。添加0.5 mL淀粉指示劑,滴定至藍(lán)色消失為止。POV值計(jì)算參照文獻(xiàn)[5]。
1.5.1 菌落總數(shù)的測(cè)定 稱(chēng)取約25.00 g打碎魚(yú)肉,加入225 mL 0.1%蛋白胨無(wú)菌生理鹽水,高速振蕩后,以10倍稀釋將魚(yú)肉漿稀釋后,取數(shù)個(gè)濃度合適的稀釋液0.1 mL,涂布于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面。每個(gè)樣品至少取3個(gè)稀釋液,每個(gè)稀釋液涂布2個(gè)平皿,25℃培養(yǎng)48 h。
1.5.2 大腸菌群的測(cè)定 參照GB/T 4789.3—2008食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)測(cè)定。
挑選菌落數(shù)合適(30~300)的平板,對(duì)整個(gè)平板或一定區(qū)域內(nèi)所有菌落(通常30~100個(gè)菌落),依據(jù)菌落形態(tài)、顯微鏡鏡下形態(tài)、革蘭氏染色、運(yùn)動(dòng)性、氧化酶、過(guò)氧化氫酶反應(yīng)(3%H2O2)等特征進(jìn)行細(xì)菌分組,每組挑取所有菌落或若干菌落(至少2~3個(gè)菌落),分離純化 25℃培養(yǎng)24~48 h;參照《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》[6]、海產(chǎn)魚(yú)類(lèi)細(xì)菌鑒定圖[7]等,并使用Sensititre微生物鑒定系統(tǒng)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行鑒定。若同組出現(xiàn)相異鑒定結(jié)果,則對(duì)本組再次進(jìn)行分組、分離、鑒定。
由表2可見(jiàn),所有樣品感官均可接受,基本符合低鹽(NaCl含量≤6%)、高pH值(pH 值>5.0)、高Aw(>0.90)的要求,但不同企業(yè)產(chǎn)品指標(biāo)存在一定差異。樣品3和5口味稍咸,鹽分含量均>3%,因?yàn)轸~(yú)肉中的NaCl含量在腌制階段由于食鹽滲透而顯著增加,干燥階段由于水分蒸發(fā)而進(jìn)一步增加。在產(chǎn)品加工過(guò)程中樣品1和2干燥的時(shí)間很短,故它們的水分含量、Aw值均高于樣品3、4和5,且鹽分含量相對(duì)較低的。樣品3、4和5因干燥時(shí)間較長(zhǎng),質(zhì)感變硬,其水分含量基本<50%,相應(yīng)的Aw也較低,鹽分含量卻偏高的,說(shuō)明這三者具有一定的相關(guān)性,即水分活度值與水分含量呈正相關(guān),而與鹽分含量呈負(fù)相關(guān)。樣品4的水分含量、Aw、pH等值均處于中間,且鹽分含量也較高,綜合抑菌效果比較明顯。樣品3的pH值偏高,是因?yàn)樵萧~(yú)因腐敗而變質(zhì)導(dǎo)致pH值升高,其余4批樣品pH值均處于正常范圍,并且具有一定抑菌效應(yīng)。
表2 淡腌黃魚(yú)感官及理化品質(zhì)
實(shí)驗(yàn)表明產(chǎn)品可貯藏性和衛(wèi)生安全性主要建立于有效降低Aw基礎(chǔ)上,同時(shí)調(diào)節(jié)pH值、真空包裝,添加黃酒和天然香辛料等亦起到抑菌作用。
表3顯示,5種樣品的TVC均值為(5.26±0.58)lgCFU/g,TVBN 均值為 (20.03±5.62)mg/100g,POV均為(2.37±0.37)meq/kg,大腸菌群均低于 30 MPN/100g。其中樣品3的TVC、TVBN及POV的值均比其他樣的要大,是因?yàn)樵萧~(yú)有一定程度的腐敗現(xiàn)象,故再經(jīng)過(guò)加工、干燥制成成品后各指標(biāo)值偏高。表明原料、工藝參數(shù)及保藏溫度等柵欄因子都對(duì)產(chǎn)品品質(zhì)有一定影響。樣品3、4和5的TVBN值相對(duì)于樣品1和2較高,表明雖然其抑菌柵欄強(qiáng)度較高,但是鹽漬、干燥等過(guò)程溫度高,容易發(fā)生肌肉自溶和脂肪分解,導(dǎo)致產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)和風(fēng)味下降。
表3 淡腌黃魚(yú)微生物品質(zhì)特征
另一方面,魚(yú)肉中含有大量的脂肪,魚(yú)香味是干制過(guò)程中脂肪由于分解作用形成的[8-10],同時(shí)可能伴隨有氧化產(chǎn)生的不良?xì)馕?。因此,TVBN值和POV值的不同明顯與鹽分含量、貯藏溫度、貯藏時(shí)間,以及各因素之間的相互作用有關(guān),與感官評(píng)價(jià)的結(jié)果一致。綜上所述,有必要建立低溫高效的加工貯藏方法,合理控制加工過(guò)程溫度和時(shí)間,同時(shí)準(zhǔn)確控制鹽分含量、水分含量、水分活度、pH值等抑菌因子強(qiáng)度,利于改善產(chǎn)品的風(fēng)味品質(zhì)和安全保藏性,實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化和保證穩(wěn)定產(chǎn)質(zhì)量。
依據(jù)菌落形態(tài)學(xué)、革蘭氏染色、運(yùn)動(dòng)性和生理生化等對(duì)將5種樣品中分離出的293株細(xì)菌進(jìn)行初步歸類(lèi),分為2種類(lèi)型5組。第1、4和5組是革蘭氏陰性,第2和3組是革蘭氏陽(yáng)性。第1和4組氧化酶成陰性,其余組為陽(yáng)性。5組樣品過(guò)氧化氫酶均為陽(yáng)性。顯微鏡油鏡觀察發(fā)現(xiàn)第1、4和5組呈桿狀,第2、3組呈球狀。第4組運(yùn)動(dòng)性陽(yáng)性,其余各組均為陰性。通過(guò)形態(tài)觀察、生理生化實(shí)驗(yàn),采用Sensititre熒光微生物鑒定儀,結(jié)合《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》判斷產(chǎn)品的菌落組成,如表4。
原料魚(yú)初始細(xì)菌菌群類(lèi)型和數(shù)量,以及柵欄因子種類(lèi)和強(qiáng)度的差異導(dǎo)致了產(chǎn)品細(xì)菌數(shù)量和類(lèi)型分布的不同。對(duì)5種樣品保藏初期獲得的293株細(xì)菌進(jìn)行分析,對(duì)每一種菌純培養(yǎng)后,進(jìn)行鑒定。主要存在三種菌落,分別為Proteus vulgaris、Pasteurella pneumotropica 和 Proteus penneri。
淡腌黃魚(yú)制品菌相組成較單一,與新鮮大黃魚(yú)的菌相組成比較有很大的不同[11],這是因?yàn)楫a(chǎn)品經(jīng)過(guò)鹽腌和干燥后大部分細(xì)菌得到有效抑制,以及采用真空包裝而使一些好氧菌不能存活。但在不同樣品中,三種菌所占的比例不同。表5為樣品2在25℃下保藏后期各菌的比例。
表4 分離菌株主要形態(tài)及部分生理生化特性
表5 淡腌黃魚(yú)的菌相組成
淡腌黃魚(yú)制品是通過(guò)設(shè)置水分活度、鹽分、水分含量及pH值等柵欄因子,抑制產(chǎn)品腐敗變質(zhì)和細(xì)菌生長(zhǎng),從而達(dá)到延長(zhǎng)產(chǎn)品貨架期的目的。試驗(yàn)結(jié)果表明,市場(chǎng)上真空包裝淡腌黃魚(yú)制品柵欄因子種類(lèi)和強(qiáng)度存在一定差異。水分含量平均為(55.39±9.28)%,Aw 平均為 0.94±0.03,pH 平均為6.70±0.29,鹽分含量平均為(2.89±0.19)%。產(chǎn)品品質(zhì)和細(xì)菌類(lèi)型以及數(shù)量與柵欄因子種類(lèi)和強(qiáng)度存在相關(guān)性,5批樣品感官評(píng)價(jià)均可接受,揮發(fā)性鹽基氮均值為(20.03±5.62)mg/100g,過(guò)氧化值均值為(2.37±0.37)meq/kg,細(xì)菌總數(shù)均值為(5.26±0.58)lgCFU/g,大腸菌群均低于30 MPN/100g。淡腌黃魚(yú)制品菌相較單一,其中革蘭氏陰性菌的比例較高。主要存在三種菌落,分別為普通變形桿菌Proteus vulgaris、侵肺巴斯德菌Pasteurella pneumotropica和彭氏變形桿菌Proteus penneri。因此,為了更好提高傳統(tǒng)腌制食品的品質(zhì)和安全,滿足人們對(duì)這類(lèi)產(chǎn)品安全、營(yíng)養(yǎng)、風(fēng)味和方便等要求,生產(chǎn)企業(yè)還有待進(jìn)一步優(yōu)化加工工藝,以規(guī)范原料、加工、貯藏和流通銷(xiāo)售等環(huán)節(jié)。
[1] 譚汝成.腌臘魚(yú)制品生產(chǎn)工藝優(yōu)化及其對(duì)風(fēng)味影響的研究[D].武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2004:5-7.
[2] 章銀良.基于響應(yīng)面分析法優(yōu)化腌魚(yú)工藝研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(7):3234-3236.
[3] 王哲恩,許 鐘,郭全友,等.軟包裝即食醉魚(yú)制品細(xì)菌學(xué)品質(zhì)安全分析[J].海洋漁業(yè),2007,29(4):349-354.
[4] LabMaster—Aw and LabPartner—Aw operating instructions[Z].www.novasian.com.
[5] GB/T 5538—2005動(dòng)植物油脂過(guò)氧化值測(cè)定[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2005.
[6] 東秀珠,蔡妙英.常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)[M].北京:科學(xué)出版社,2001.
[7] 須山三千三,鴻巢章二.水麈食品學(xué)[M].柬京:恒星社厚生圈,1987.111-118.
[8] Lisbeth T H,Tom G,Huss H H.Effects of salt and storage temperature o n chemical,microbiological and sensory changes in cold—smoked salmon[J].Food Research International,1995,28(2):123-130.
[9] 葉 青,涂宗財(cái),劉戎梅,等.酒糟魚(yú)工業(yè)化生產(chǎn)技術(shù)[J].食品機(jī)械,2001,(3):25-27.
[10] 王 儲(chǔ),駱肇蕘,張鐘興,等.淡腌鮐魚(yú)在不同貯藏條件下的質(zhì)量變化[J].上海水產(chǎn)大學(xué)學(xué)報(bào),1993,2(1):17-23.
[11] 郭全友,楊憲時(shí),許 鐘,等.冷藏養(yǎng)殖大黃魚(yú)細(xì)菌相組成和優(yōu)勢(shì)腐敗菌鑒定[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),2006,30(6):824-928.
[12] 別春彥,楊憲時(shí),許 鐘.淡腌黃魚(yú)在不同溫度下貯藏的微生物及品質(zhì)變化[J].南方水產(chǎn),2005,(4):60-63.
[13] 郭全友,許 鐘,楊憲時(shí).真空包裝淡腌青魚(yú)品質(zhì)和細(xì)菌類(lèi)型及數(shù)量[J].海洋漁業(yè),2008,(5):170-175.
[14] Waldemar D,Katarzyna C,Anna G,et a1.Micro-flora of low salt Herring I.The effect of sort of packaging on micro—flora of Herring A LA MATIAS[J].EJPAU— Food Science and Technobgy,2001,4(2):1-9.
[15] Magntsson H,Traustadottir K.The microbial flora of vacuum packed smoked herring fillets[J].Journal of food technology,1982,(17):605-702.
[16] Herbert R A,Hendrie M S,Gibson D M,et a1.Bacteria active in the spoilage of certain seafoods[J].J App1 Bacteria1.1971,(34):41-50.
[17] Reddi P K,Constantinides S M,Dymsza H A.Catheptic activity of fish muscle[J].Food Sci.1972,(37):643-648.
[18] 王 慥,陳舜勝,張鐘興,等.淡腌鮐魚(yú)在不同貯藏條件下的質(zhì)量變化[J].上海水產(chǎn)大學(xué)學(xué)報(bào),1993,2(1):17-22.