李玉中

（1.衡陽(yáng)師范學(xué)院生命科學(xué)系，湖南 衡陽(yáng) 421008；2.貴州大學(xué)農(nóng)學(xué)院植保系植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550025）

香菇（Lentinus edodes）屬擔(dān)子菌綱傘菌科真菌。它是世界上著名的食用菌之一，含有多種有效藥用組份，其所含的香菇多糖（Lentinan）是一種宿主免疫增強(qiáng)劑（Host defense potentiator，HDP），具有抗病毒、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫和刺激干擾素形成等功能[1]。因此，國(guó)內(nèi)外在香菇藥用方面的研究頗多，其免疫藥理作用、提取分離純化步驟及其純度、含量測(cè)定、結(jié)構(gòu)鑒定分析方法及其生物學(xué)功能等都有較多的報(bào)道[2-9]。

但香菇在農(nóng)業(yè)病害防治方面的研究較少。陳順等[10]用香菇多糖防治馬鈴薯上病毒引起的退化病，取得了一定的增產(chǎn)效果，并對(duì)馬鈴薯花葉病毒具有一定的抑控作用。喻大昭等[11]應(yīng)用香菇的水提取物進(jìn)行大田防治煙草花葉病毒，結(jié)果顯示具有一定的防治效果。張建平等[12]研究表明，香菇對(duì)松材線蟲(chóng)具有一定的抑殺作用。但對(duì)于植物根結(jié)線蟲(chóng)病害的防效如何，尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，本文在這一方面進(jìn)行了探索性的研究。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株 蘇香，生產(chǎn)中的一個(gè)栽培品種，保存于貴州大學(xué)植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

1.1.2 供試線蟲(chóng)及病土 Panagrellus redivivus；番茄根結(jié)線蟲(chóng)的病土，采于貴州大學(xué)農(nóng)學(xué)院園藝菜園感染根結(jié)線蟲(chóng)病的番茄病田，篩除病土中的病根，將病土充分混勻。

1.1.3 供試作物 番茄品種：精選毛粉802（西安禾嘉種苗有限公司制種），購(gòu)于貴陽(yáng)市花溪區(qū)種子經(jīng)銷部。

1.1.4 培養(yǎng)基 供試培養(yǎng)基為 WA，CMA，OWA，PDA，CPDA，PPDA。培養(yǎng)基的配制參考向紅瓊和馮志新[13]的方法。

1.2 方法

1.2.1 菌株擴(kuò)大培養(yǎng) 菌株擴(kuò)大培養(yǎng)的配料按照房啟珍的方法[14]配制，將配制好的配料裝入高18 cm、直徑8 cm的食用菌菌種培養(yǎng)瓶中，用牛皮紙雙層封口，于121℃以上濕熱滅菌2 h，待冷卻后，接入活化的香菇菌絲塊，（25±1）℃培養(yǎng)一個(gè)月，菌絲長(zhǎng)滿瓶子，供試驗(yàn)使用。

1.2.2 番茄培育 番茄苗的培育按照王玉堂的方法[15]。育苗土取于林地表層腐殖質(zhì)豐富的土壤，經(jīng)121℃濕熱滅菌2 h，冷卻后用于育苗。

1.2.3 菌落形態(tài)觀察 香菇菌絲經(jīng)PDA平板活化后，用內(nèi)徑6 mm的滅菌打孔器在菌落邊緣打取菌圓片，置于 PDA 平板的中央，（25±1）℃培養(yǎng) 7 d，14 d在鏡下觀察菌絲形態(tài)。

1.2.4 不同培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長(zhǎng)及線蟲(chóng)作用的影響接種香菇菌絲于 WA、OWA、CMA、PDA、PPDA 和CPDA平板培養(yǎng)基上，（25±1）℃培養(yǎng)。接菌后的第8 d測(cè)量菌落的直徑，每種處理3個(gè)重復(fù)。待長(zhǎng)至第8 d，向每皿內(nèi)加2 000條/mL的P.redivivus液0.5 mL。加線蟲(chóng)液后，24 h、48 h和72 h觀察，記錄死亡線蟲(chóng)數(shù)。并以未接菌的相應(yīng)培養(yǎng)基平板作對(duì)照，根據(jù)式（1）計(jì)算線蟲(chóng)的相對(duì)死亡率。

1.2.5 培養(yǎng)料和香菇菌絲對(duì)番茄生長(zhǎng)及根結(jié)線蟲(chóng)的影響 取口徑為17～18 cm，高16～17 cm的塑料花盆，每盆裝2 250 g滅菌土作為空白對(duì)照CK，以每盆裝2 000 g滅菌土加250 g不接菌培養(yǎng)料為CK1，以每盆裝2 000 g病土加250 g不接菌培養(yǎng)料為CK2，以每盆裝2 000 g滅菌土加250 g接菌培養(yǎng)料為CK3，以每盆裝2 000 g病土加250 g接菌培養(yǎng)料為L(zhǎng)n，分別于施菌20 d后移栽培育15 d高度一致的番茄苗，每盆1株。以盆裝2 250 g病土作對(duì)照。每處理重復(fù)4次。

移栽6周后，測(cè)量番茄的株高和莖粗（莖粗的測(cè)定的位置為距地表0.5 cm番茄莖的橫截面的直徑；測(cè)量方法：測(cè)量橫截面的兩個(gè)互相垂直直徑，取兩個(gè)值的均值）。并叩盆去土沖洗根，稱量番茄植株的地上重（距地表0.5 cm以上的植株鮮重）和地下重（距地表0.5 cm以下的植株鮮重）。然后，記錄番茄根結(jié)數(shù)量，根據(jù)馮志新等[13]的9級(jí)標(biāo)準(zhǔn)給各個(gè)處理定級(jí)，并計(jì)算根結(jié)指數(shù)和根結(jié)抑制率。計(jì)算公式見(jiàn)式（2）、式（3）。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌落形態(tài)觀察

PDA上培養(yǎng)的香菇菌株，菌絲生長(zhǎng)茂密，有鎖狀聯(lián)合，可以產(chǎn)生晶體（圖1），晶體多為規(guī)則的正多面體，也有不規(guī)則的晶體，一般菌絲越老，產(chǎn)生的晶體越多。菌落上晶體的分布不均勻，有些區(qū)域可以產(chǎn)生明顯多于其他區(qū)域的晶體。在其菌絲上，沒(méi)有觀察到類似側(cè)耳的毒素球。

圖1 菌絲平板上的晶體

2.2 不同培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長(zhǎng)及線蟲(chóng)作用的影響

蘇香菌絲在 WA、OWA、CMA、PDA、PPDA 和CPDA平板上均可生長(zhǎng)，但生長(zhǎng)的速度和疏密程度都因培養(yǎng)基不同而異。PDA平板上的蘇香菌落生長(zhǎng)速度最快，明顯快于其他處理；WA平板上的生長(zhǎng)速度最慢，而OWA、CMA、PPDA和CPDA的生長(zhǎng)速度無(wú)顯著差異。從生長(zhǎng)疏密的程度來(lái)看，PPDA上生長(zhǎng)的菌落最為茂盛，菌絲細(xì)密；其次為CPDA和PDA上生長(zhǎng)的菌絲較茂盛；OWA和CMA的菌絲較差，菌落的中心明顯差于菌落四周；WA上的菌絲生長(zhǎng)最差（表1）。

菌絲對(duì)線蟲(chóng)作用效果的測(cè)定結(jié)果顯示：不同平板上的蘇香菌絲對(duì)線蟲(chóng)的作用有一定的區(qū)別，但殺蟲(chóng)效果都不好。WA平板上生長(zhǎng)的菌絲效果最差，72 h線蟲(chóng)相對(duì)死亡率僅有10.0%；PPDA上的殺線蟲(chóng)效果最好，72 h線蟲(chóng)相對(duì)死亡率為39.4%（表1）。從殺線蟲(chóng)的方式看，老而稠密的菌絲可以纏繞并分解線蟲(chóng)，且死亡的線蟲(chóng)可被香菇菌絲作為食源，生長(zhǎng)出更茂盛的菌絲（圖2）。

表1 不同培養(yǎng)基上蘇香的生長(zhǎng)情況和對(duì)P.redivivus作用的效果

圖2 菌絲降解線蟲(chóng)

2.3 香菇菌絲對(duì)番茄生長(zhǎng)及根結(jié)線蟲(chóng)的影響

香菇菌絲對(duì)番茄生長(zhǎng)的試驗(yàn)結(jié)果表明，施有接菌配料的CK3處理組與CK滅菌土處理組相比，除地下重之外，其余各項(xiàng)指標(biāo)都明顯高于CK1，而施有未接菌培養(yǎng)料的CK1和CK2處理組的番茄生長(zhǎng)較差。

由此可知，接菌配料對(duì)番茄的地上部分生長(zhǎng)具有一定促進(jìn)作用，而施有未接菌配料的處理組對(duì)番茄的生長(zhǎng)具有明顯的抑制效果。香菇菌絲可以促進(jìn)植物的生長(zhǎng)的原因可能是香菇菌絲對(duì)配料的分解，為番茄的生長(zhǎng)提供更豐富的營(yíng)養(yǎng)，有利于植物的吸收；而未接種香菇菌絲的培養(yǎng)料主要成分為纖維素，尚未降解，不能被植物直接吸收利用，在土壤中影響根的延伸，阻礙了番茄的生長(zhǎng)。

香菇菌絲對(duì)番茄上根結(jié)線蟲(chóng)病防效的試驗(yàn)結(jié)果表明：施加不接菌培養(yǎng)料的處理組根結(jié)線蟲(chóng)指數(shù)為68.75，施加接菌培養(yǎng)料的為56.25。接菌培養(yǎng)料對(duì)根結(jié)的抑制率為18.18%（表2），說(shuō)明香菇菌絲對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)侵染番茄有一定的抑制作用，但效果不佳。

表2 香菇菌絲對(duì)番茄生長(zhǎng)及根結(jié)線蟲(chóng)的影響

3 結(jié)論與討論

香菇菌絲在各種培養(yǎng)基平板上均能產(chǎn)生晶體，該晶體可能是香菇菌絲產(chǎn)生的多糖，但沒(méi)有觀察到類似粗皮側(cè)耳的毒素球結(jié)構(gòu)。該菌產(chǎn)生的晶體物質(zhì)與殺線蟲(chóng)能力是否相關(guān)，尚需要進(jìn)一步的試驗(yàn)。香菇菌絲可以降解線蟲(chóng)，且較老菌絲降解能力強(qiáng)，并以之為食源，從線蟲(chóng)體上長(zhǎng)出更多的菌絲，說(shuō)明香菇菌絲可以取食線蟲(chóng)，但其作用效果較差。向紅瓊和馮志新[13]對(duì)粗皮側(cè)耳的研究表明，粗皮側(cè)耳和線蟲(chóng)接觸48 h，線蟲(chóng)死亡率在90%以上，而本試驗(yàn)中香菇菌絲處理P.redivivus 48 h的相對(duì)死亡率僅為19.8%。因此，該菌專門用于線蟲(chóng)生物防治的可能性較小。

香菇菌絲的盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明，香菇菌絲對(duì)植物根結(jié)線蟲(chóng)病害的防治有一定的效果，帶有香菇菌絲的配料具有促進(jìn)植物地上生長(zhǎng)的能力。在當(dāng)今綠色食品流行的趨勢(shì)下，有機(jī)肥料的施用量越來(lái)越多，在使用有機(jī)肥的時(shí)候，將香菇栽培廢料配合施入田間，既可促進(jìn)植物的增產(chǎn)，又可避免以往香菇栽培廢料長(zhǎng)期堆積給環(huán)境帶來(lái)的污染問(wèn)題。因此，本研究結(jié)果為香菇栽培廢料的利用提供了新的途徑。

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