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        海南省漢族和黎族婦女亞甲基四氫葉酸還原酶和甲硫氨酸合成酶還原酶基因多態(tài)性分布研究

        2011-06-08 06:15:22勞海紅賀憲民
        中國計(jì)劃生育學(xué)雜志 2011年11期
        關(guān)鍵詞:還原酶黎族漢族

        勞海紅 賀憲民

        1.海南省婦幼保健院(??冢?70206);2.海南主健細(xì)胞分子遺傳醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心

        5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)和甲硫氨酸合成酶還原酶(MTRR)是葉酸代謝通路中的關(guān)鍵酶。MTHFR C677T與神經(jīng)管缺陷(NTDs)的關(guān)聯(lián)關(guān)系研究在國內(nèi)和國外開展很普遍,TT基因型是NTDs發(fā)生的遺傳危險(xiǎn)因素;MTHFR A1298C、MTRR A66G也都在國內(nèi)和國外的人群中被研究證明與NTDs的發(fā)生相關(guān)。神經(jīng)管缺陷是一類發(fā)生率高、后果嚴(yán)重的出生缺陷,是遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果,為多基因遺傳疾?。?]。本研究的目的在于比較海南省漢族和黎族婦女人群MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRR A66G多態(tài)性分布情況,獲得群體遺傳學(xué)特征,了解葉酸代謝相關(guān)基因在不同人群的分布,為不同人群預(yù)防出生缺陷制定針對性的干預(yù)措施提供科學(xué)依據(jù)。

        1 對象與方法

        1.1 研究對象

        依據(jù)知情同意,選擇在海南省各保健院進(jìn)行孕前或孕期檢查的女性作為研究對象,其中,漢族10 533人,黎族904人。

        1.2 儀器及試劑

        Centrifuge離心機(jī)(德國艾本德公司);7900HT實(shí)時熒光定量PCR儀(美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司);3730測序儀、9700 PCR擴(kuò)增儀、熒光定量緩沖液、熒光定量檢測探針、BigDye? Terminator v3.1測序試劑盒、測序緩沖液(ABI公司)和POP-7TM3730/3730xl DNA測序膠(美國生命技術(shù)公司)。檢測中對3個位點(diǎn)分別進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng),反應(yīng)所用Taqman-MGB探針信息見表1。

        表1 Taqman-MGB探針?biāo)谖恢?/p>

        1.3 研究方法

        1.3.1 樣本DNA采集 采集受檢者的口腔黏膜上皮細(xì)胞,利用柱式抽提試劑盒抽提樣本DNA。

        1.3.2 基因檢測 MTHFR 基因 C677T、A1298C和MTRR基因A66G位點(diǎn)的SNP分型采用Taqman-MGB技術(shù)。

        1.3.3 熒光定量PCR反應(yīng)條件 每個反應(yīng)體系為總體積 10μl,包含濃度為 20ng/μl的 DNA 模板1μl,2 × Taqman Universal MasterMix 5μl,20 × Taqman-MGB 探針0.5μl,去離子水3.5μl。反應(yīng)條件為95℃ 10min,隨后進(jìn)行20個循環(huán)的擴(kuò)增(92℃15s,60℃ 1min),再進(jìn)行30個循環(huán)的擴(kuò)增(89℃15s,60℃ 90s)。反應(yīng)結(jié)束后在ABI 7900型熒光定量PCR儀上讀取樣品孔中的終點(diǎn)熒光,利用分析軟件確定各個樣本的基因分型結(jié)果。

        1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

        對獲得的數(shù)據(jù)用Excel匯總分析,不同人群間基因型及等位基因頻率用χ2檢驗(yàn)分析。

        2 結(jié)果

        2.1 研究對象基因型頻數(shù)分布比較(表2)

        表2 兩民族婦女MTHFR、MTRR基因型頻數(shù)和頻率分布[例(%)]

        2.2 研究對象的等位基因頻率比較

        漢族婦女MTHFR C677T突變等位基因T 頻率高于黎族婦女,而黎族婦女MTHFR A1298C突變等位基因C、MTRR A66G突變等位基因G則高于漢族婦女(P <0.01)。見表3。

        表3 兩民族婦女MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRR A66G等位基因頻率和頻率分布[例(%)]

        3 討論

        一些研究報(bào)道,不同種族人群MTHFR基因熱敏性多態(tài)性基因型分布存在差異,如國內(nèi)裴麗君等[2]報(bào)道的中國漢蒙兩族存在民族差異,但未見有關(guān)黎族的研究報(bào)道。賀憲民等[3]報(bào)道:MTHFR C677T位點(diǎn)純合突變基因型TT的頻率北方顯著高于南方(P<0.01);南方的四川省和海南省間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.02)。MTHFR A1298C基因北方純合突變基因型CC的頻率顯著低于南方(P<0.01),南方的四川省和海南省間無差異。MTRR A66G基因型的構(gòu)成在北方和南方間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;純合突變基因型GG的構(gòu)成在北方和南方間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

        本研究比較了海南省漢族和黎族婦女的MTHFR C677T位點(diǎn)純合突變基因 TT、MTHFR A1298C純合突變基因CC和MTRR A66G純合突變基因GG的頻率后發(fā)現(xiàn),海南漢族婦女MTHFR C677T純合突變基因TT頻率明顯高于海南黎族婦女,而海南黎族婦女MTHFR A1298C純合突變基因CC和MTRR A66G純合突變基因型GG頻率顯著高于海南漢族婦女。海南漢族婦女MTHFR C677T突變等位基因T頻率顯著高于海南黎族婦女,而海南黎族婦女MTHFR A1298C突變等位基因C、MTRR A66G突變等位基因G則顯著高于海南漢族婦女。

        目前認(rèn)為,MTHFR和MTRR是葉酸代謝過程的關(guān)鍵酶,如果這些酶活性或濃度下降均可使同型半胱氨酸的甲基化發(fā)生障礙,導(dǎo)致同型半胱氨酸水平升高,是心血管系統(tǒng)疾病和子代發(fā)生NTDs的重要危險(xiǎn)因素。國外研究表明,攜帶MTHFR突變基因型的個體發(fā)生冠心病的危險(xiǎn)性增加,父母攜帶突變基因型增加子代 NTDs發(fā)生的危險(xiǎn)性[4,5]。國內(nèi)李智文等[6]報(bào)道,攜帶MTHFR突變基因型的個體發(fā)生冠心病以及子代發(fā)生NTDs的危險(xiǎn)性顯著上升;特別是攜帶純合突變基因型的個體,其冠心病發(fā)生的危險(xiǎn)性是野生型的2.35倍;父母攜帶純合突變基因型,子代NTDs的危險(xiǎn)性增加3.13倍。

        本研究顯示,海南省漢族和黎族婦女MTHFR和MTRR基因多態(tài)性分布存在顯著差異。這種差異要求在制定相關(guān)人群健康干預(yù)方案時不能使用統(tǒng)一模式、執(zhí)行統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),而應(yīng)是因人而異,制定有針對性的干預(yù)措施。

        1 朱軍,王和.增補(bǔ)小劑量葉酸預(yù)防神經(jīng)管缺陷[M].成都:成都時代出版社,2008:1-4.

        2 裴麗君,朱慧萍,沈婉英,等.中國漢蒙兩族人群MTHFR基因熱敏感性多態(tài)性分布的比較[J].遺傳,2000,22(6):371.

        3 賀憲民,張群,楊琦,等.亞甲基四氫葉酸還原酶和甲硫氨酸合成酶還原酶基因多態(tài)性研究[J].中國計(jì)劃生育學(xué)雜志,2010,18(1):15-16.

        4 Pan XR,Li GW,Hu YH,et al.Effects of diet and exercise in preventing NIDDM in people with impaired glucose tolerance:the Da Qing IGT and Diabetes Study [J].Diabetes Care,1997,20(4):537-544.

        5 UK Prospective Diabetes Study Group.Effect of intensive bloodglucose control with metformin on complications in overweight patients with type 2 diabetes[J].Lancet,1998,352(9139):854-856.

        6 李智文,張暉,王麗娜.中國人5,10亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與冠心病、神經(jīng)管畸形易感性關(guān)系的Meta分析[J].中國慢性病預(yù)防與控制,2004,12(4):165.

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