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        系統(tǒng)聚類分析在紅花質(zhì)量評價中的應(yīng)用

        2011-06-07 05:56:19超劉峰馬存德馬久太王西芳王小平
        世界中醫(yī)藥 2011年2期

        趙 超劉 峰馬存德馬久太王西芳王小平

        (1陜西步長制藥有限公司,陜西省西安市高新路50號南洋國際19層,710075;2陜西中藥學(xué)院)

        中藥研究

        系統(tǒng)聚類分析在紅花質(zhì)量評價中的應(yīng)用

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        (1陜西步長制藥有限公司,陜西省西安市高新路50號南洋國際19層,710075;2陜西中藥學(xué)院)

        聚類分析;紅花

        紅花為菊科植物紅花Carthamus tinctorius L.的干燥花。夏季花由黃變紅時采摘,陰干或曬干。本品性溫,味辛,具有活血通經(jīng)、散瘀止痛之功效,用于閉經(jīng)、痛經(jīng)、跌打損傷、瘡瘍腫痛等[1]。目前,對紅花的研究資料較多,但缺乏對其質(zhì)量的綜合評價方法。為科學(xué)評價紅花質(zhì)量及合理利用紅花資源,我們對12個產(chǎn)地的紅花進行了分析,采用2005年版藥典紅花標(biāo)準(zhǔn)中檢查、浸出物、含量測定項下的方法對12批樣品進行分析,并以它們的含量作為化學(xué)特征變量,采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件,在方法上采用歐氏距離測量,每兩樣本間用Average linkage法連結(jié)。對12批紅花樣品進行了系統(tǒng)聚類分析,為紅花質(zhì)量綜合評價方法的建立和實現(xiàn)中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化作了有意義的探索。

        1 儀器及試藥

        1.1 儀器 Agilent 1200LC型高效液相色譜儀;VWD檢測器;TG328A型電光分析天平(上海精密儀器廠);USC-302型超聲波清洗器(上海精密儀器廠);UV-2100紫外-可見分光光度計(成都科析電子商務(wù)有限公司);SX2-5-12馬弗爐;CS101-2A銀河電熱干燥箱(中國重慶銀河試驗儀器有限公司)等。

        1.2 試劑 甲醇、丙酮、鹽酸、磷酸等試劑為分析純;流動相所用甲醇、乙腈均為色譜純,水為純凈水;羥基紅花黃色素A(111637-200704)、山柰素對照品(110861-200606)均由中國藥品生物制品檢定所提供。

        1.3 樣品 所采集的樣品見表1。

        2 方法

        2.1 烘干法測水分[1]取供試品粉末3g,平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中,厚度不超過10mm,精密稱定,打開瓶蓋在105℃干燥5h,將瓶蓋蓋好,移置干燥器中,冷確30min,精密稱定,再在上述溫度干燥1h,移置干燥器中,冷確30min,精密稱定,至恒重,由減失的重量計算樣品中的含水量(%)。

        2.2 總灰分測定[1]取供試品粉末4g,精密稱定,置熾灼至恒重的坩堝中,稱定重量,緩慢熾熱,至完全碳化時,逐漸升高溫度至500℃~600℃,使完全灰化并至恒重,根據(jù)殘渣重量,計算樣品中總灰分的含量(%)。

        表1 樣品編號

        2.3 酸不溶性灰分的測定[1]取2.2項下的灰分,在坩堝中加入稀鹽酸10mL,置水浴上加熱10min,用無灰濾紙濾過,坩堝內(nèi)的殘渣用水洗于濾紙上,并洗滌至濾液不顯氯化物反用為止,濾渣連同濾紙置同一坩堝中干燥,熾灼至恒重,根據(jù)殘渣重量,計算樣品中酸不溶性灰分的含量(%)。

        2.4 吸光度[1]取本品,置硅膠干燥器中干燥14h,研細成粉,取0.25g,精密稱定,置錐形瓶中,加80%丙酮溶液50mL,連接冷凝管,置50℃水浴上溫浸90min,放冷,用3號垂熔融玻璃漏斗濾過,收集濾液于100mL量瓶中,用80%丙酮溶液25mL分次洗滌,洗液并入量瓶中,加80%丙酮溶液至刻度,搖勻,照紫外-可見分光光度法(附錄ⅤA),在518nm的波長處測定吸光度。

        2.5 浸出物測定[1]水冷浸法:取供試品粉末4g,精密稱定,置250mL錐形瓶中,精密加水100mL,密塞,冷浸,前6h時時振搖,再靜置18h,用干燥濾器迅速濾過,精密量取續(xù)濾液20mL,置干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,水浴蒸干,105℃干燥3h,置干燥器中冷卻30min,迅速精密稱重,根據(jù)殘渣重量,計算樣品中浸出物的含量(%)。

        2.6 含量測定[1]1)羥基紅花黃色素A:取供試品粉末(過3號篩)約0.4g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入25%甲醇50mL,稱定重量,超聲處理40min,放冷,再稱定重量,用25%甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液照2005年版藥典附錄ⅥD及紅花含量測定項下的相關(guān)條件進行羥基紅花黃色素A的含量測定。2)山柰素:取供試品粉末(過3號篩)約0.5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25mL,稱定重量,回流30min,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液15mL,置平底燒瓶中,加鹽酸溶液(15→37)5mL,搖勻,置水浴中加熱水解30min,冷卻后轉(zhuǎn)移至25mL的量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液照2005年版藥典附錄ⅥD及紅花含量測定項下的相關(guān)條件進行山柰素的含量測定。

        3 結(jié)果與分析

        測定結(jié)果見表2。

        表2 測定結(jié)果

        總灰分、酸不溶性灰分、吸光度、水溶性浸出物、羥基紅花黃色素A、山柰素含量可以從不同角度反映紅花的質(zhì)量,本文采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件,以上述指標(biāo)作為一般變量,綜合評判紅花樣品間差異,從而對其進行合理分類。

        本實驗用SPSS17.0統(tǒng)計軟件中的系統(tǒng)聚類分析程序?qū)?2批紅花樣品進行聚類分組。在方法上采用歐氏距離測量,每兩樣本間用Average linkage法連結(jié)。對12批紅花樣品進行聚類分組。結(jié)果見圖1。

        由圖1可見,12批紅花樣品最終可聚成2大類:其中樣品1為一類,該類樣品的總灰分、酸不溶性灰分均不符合藥典標(biāo)準(zhǔn),為不合格藥材。樣品2-12聚為一類,該類樣品各項指標(biāo)均符合藥典標(biāo)準(zhǔn),為合格藥材。聚類結(jié)果與藥典方法鑒定結(jié)果完全一致。樣品2 -12可被分為2類,說明產(chǎn)地對紅花質(zhì)量的綜合評價影響不大,而起主要作用的是產(chǎn)地環(huán)境、采收時間、儲存條件等因素,提示紅花的質(zhì)量除了與其產(chǎn)地有關(guān)外,還與產(chǎn)地環(huán)境、采收時間、儲存條件等因素有關(guān)。

        圖1 聚類結(jié)果樹狀圖

        [1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典2005年版(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005,103,附錄47-49,附錄56.

        (2010 -10 -30 收稿)

        十一五國家科技支撐計劃項目(編號:2006BAI06A07-01)

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