鄭 琰 王 芳 談 靜 曾 倩

1.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科，四川成都 610072；2.四川省中醫(yī)藥科學(xué)院藥學(xué)研究所，四川成都 610041；3.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院婦科，四川成都 610072

調(diào)肝止痛膠囊是由白芍、枳殼、乳香和沒(méi)藥等8味藥組成的中藥復(fù)方制劑，具有養(yǎng)血益肝、行氣活血、祛瘀止痛的功效，在臨床上用于治療肝郁血瘀型痛經(jīng)。方中枳殼、乳香和沒(méi)藥等3味藥材含揮發(fā)油，且揮發(fā)油為本方的活性成分，具有鎮(zhèn)痛作用。為減少揮發(fā)油在制劑和貯存中的揮發(fā)，提高藥物穩(wěn)定性，方便臨床藥物的使用，減少每日服藥劑量，本研究對(duì)枳殼、乳香和沒(méi)藥提取揮發(fā)油，并用β-環(huán)糊精包合，以揮發(fā)油的包合率和收得率為考察指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)，對(duì)包合工藝條件進(jìn)行了優(yōu)選，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

JB-3型定時(shí)控溫磁力攪拌器（上海雷磁新涇儀器有限公司）；JA2003電子天平（上海精密儀器有限公司）； DG/20-002臺(tái)式干燥箱；β-環(huán)糊精（天津市博迪化工有限公司）；枳殼、乳香和沒(méi)藥購(gòu)于四川新荷花中藥飲片有限公司，經(jīng)檢驗(yàn)符合2010版《中國(guó)藥典》一部規(guī)定；無(wú)水乙醇為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油的提取

枳殼、乳香和沒(méi)藥揮發(fā)油的提取采用單因素考察，以揮發(fā)油提取率為指標(biāo)，考察浸泡、加水量、提取時(shí)間對(duì)提取效果的影響。按照《中國(guó)藥典》規(guī)定的揮發(fā)油測(cè)定法甲法[1]進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果及生產(chǎn)實(shí)際，確定揮發(fā)油提取工藝的最佳方案為：加10倍量水，不浸泡，提取6 h。在此條件下，揮發(fā)油提取率為1.79%。

2.2 包合物的制備方法

采用飽和水溶液法包合：精密稱取定量的β-環(huán)糊精，置具塞的錐形瓶中，加入適量蒸餾水，水浴加熱使溶解，放冷至規(guī)定溫度，于磁力加熱攪拌器上恒溫?cái)嚢?。用移液管量取揮發(fā)油1 mL，按1︰2比例用無(wú)水乙醇溶解稀釋，將揮發(fā)油稀釋液逐滴加入β-環(huán)糊精溶液中，加塞，恒溫?cái)嚢柚烈?guī)定時(shí)間，放冷，置冰箱中冷藏24 h，抽濾，用少量純化水洗滌容器，抽干，以少量無(wú)水乙醇洗滌濾渣，在40℃下低溫烘干，即得疏松白色包合物粉末。

2.3 包合物中實(shí)際含油量的測(cè)定

將制得的包合物置500 mL圓底燒瓶中，加蒸餾水200 mL，連接揮發(fā)油測(cè)定器，照《中國(guó)藥典》揮發(fā)油測(cè)定法甲法[1]操作，讀取揮發(fā)油量，計(jì)算包合物實(shí)際含油量。

2.4 揮發(fā)油空白回收率測(cè)定

精密量取揮發(fā)油1 mL，置500 mL圓底燒瓶中，加蒸餾水200 mL，水蒸氣蒸餾后測(cè)定揮發(fā)油量，計(jì)算空白回收率，揮發(fā)油空白回收率=收集揮發(fā)油量/加入揮發(fā)油量×100%。試驗(yàn)回收的揮發(fā)油量為0.95 mL，則空白回收率為95.0%。

2.5 揮發(fā)油包合率和包合物收得率的計(jì)算

精密稱定1 mL揮發(fā)油重為0.951 g，揮發(fā)油包合率=包合物實(shí)際含油量/（揮發(fā)油投入量×空白回收率）×100% ；包合物收得率=包合物實(shí)際重量/（β-環(huán)糊精投入量+揮發(fā)油投入量）×100%

2.6 包合工藝條件篩選

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)及文獻(xiàn)資料[2-3]，揮發(fā)油包合主要受β-環(huán)糊精與揮發(fā)油的比例、包合溫度、包合時(shí)間3個(gè)因素的影響，故將其作為考察因素。以揮發(fā)油包合率、包合物收得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，權(quán)重系數(shù)分別定為0.7和0.3，采用正交表L9（34）設(shè)計(jì)試驗(yàn)，計(jì)算揮發(fā)油包合物包合率、收得率，并進(jìn)行綜合評(píng)分（綜合評(píng)分=0.7×包合率/最大包合率+0.3×收得率/最大收得率），確定最佳包合工藝。其因素水平安排見(jiàn)表1。試驗(yàn)方案及實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 因素水平

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

2.7 包合工藝條件的確定

根據(jù)上述正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行方差綜合分析，結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果分析：由直觀分析可知，影響包合工藝的因素順序?yàn)椋害?環(huán)糊精∶油比例＞包合溫度＞包合時(shí)間，β-環(huán)糊精︰油比例對(duì)包合工藝影響最大。經(jīng)方差分析，β-環(huán)糊精︰油比例對(duì)包合工藝有顯著影響，包合溫度和包合時(shí)間對(duì)包合工藝無(wú)顯著性影響，可見(jiàn)最佳包合工藝為：A3B3C2，即β-環(huán)糊精︰油比例10︰1，包合溫度60℃，包合時(shí)間2 h。

表3 方差分析結(jié)果

2.8 驗(yàn)證試驗(yàn)

按照所選最佳包合工藝，即β-環(huán)糊精︰油為10︰1，包合溫度60℃，包合時(shí)間2 h，每次取揮發(fā)油1 mL，平行驗(yàn)證3批。結(jié)果3批工藝的包合率分別為97.68%、98.48%、95.96%，平均值為97.37%，RSD=1.32%；收得率分別為71.57%、74.50%、71.36%，平均值為72.48%，RSD=2.42%，可見(jiàn)該包合工藝穩(wěn)定可行。

3 討論

乳香、沒(méi)藥的成分主要為揮發(fā)油、樹(shù)脂和樹(shù)膠，具有活血，行氣，止痛的功效，在成方制劑中大多以藥粉直接入藥。文獻(xiàn)報(bào)道乳香沒(méi)藥為主要肝毒性藥材，乳香沒(méi)藥不同部位中，揮發(fā)油毒性最低，且其揮發(fā)油具有鎮(zhèn)痛作用[4-5]，用揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物替代生藥粉入藥，既能保證療效又可降低毒性、減少臨床日服藥劑量，具有較好的應(yīng)用前景。本研究采用雙指標(biāo)對(duì)揮發(fā)油的包合工藝進(jìn)行評(píng)價(jià)，考慮到揮發(fā)油的包合率是衡量包合效果的重要指標(biāo)，收得率次之，故進(jìn)行正交試驗(yàn)綜合評(píng)價(jià)時(shí)，包合率和收得率的綜合評(píng)分權(quán)重系數(shù)分別定為0.7和0.3。優(yōu)選包合工藝為：β-環(huán)糊精︰揮發(fā)油比例為10︰1，包合溫度60℃，包合時(shí)間2 h。該條件下?lián)]發(fā)油包合率和收得率穩(wěn)定且高。調(diào)肝止痛膠囊為固體制劑，將揮發(fā)油制成β-環(huán)糊精包合物，使其粉末化后，再與浸膏粉及輔料成型，可減少揮發(fā)油在貯存過(guò)程中的氧化、變質(zhì)及揮發(fā)，掩蓋刺激性氣味，提高藥物的穩(wěn)定性；該法操作簡(jiǎn)單，設(shè)備要求不高，結(jié)果可靠，便于工業(yè)化生產(chǎn)。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄63.

[2] 于維萍，辛義周.乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油β-CD包合物的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)藥房，2007，18（18）：1379-1380.

[3] 盧鵬偉，牛艷陽(yáng)，李更生.制乳香、制沒(méi)藥揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合工藝的研究[J].河南大學(xué)學(xué)報(bào) （醫(yī)學(xué)版），2008，27（2）：34-35.

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[5] 談?dòng)ⅲ祧?，周昆，?乳香沒(méi)藥及其提取物給藥12周對(duì)大鼠肝毒性研究 [J].中國(guó)藥物警戒，2010，7（4）：193-195.