潘志勇

根據(jù)我國(guó)《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》的要求對(duì)輸血史或妊娠史的患者進(jìn)行不規(guī)則抗體篩選，該項(xiàng)陽(yáng)性的患者一旦輸入具有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞，抗原、抗體就會(huì)發(fā)生免疫性結(jié)合，在補(bǔ)體的參與下，輸入的紅細(xì)胞發(fā)生溶解，即發(fā)生急性溶血性輸血反應(yīng)或者發(fā)生遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)。急性溶血性輸血反應(yīng)患者出現(xiàn)發(fā)熱、貧血、黃疸和血紅蛋白尿，嚴(yán)重時(shí)甚至危及其生命。因此，在輸血中要警惕這種輸血反應(yīng)發(fā)生的可能性。當(dāng)不規(guī)則抗體篩選陽(yáng)性時(shí)，必須進(jìn)一步作抗體鑒定，確定其特異性后，再輸入無(wú)相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞或交叉配血相合的紅細(xì)胞，才能達(dá)到安全輸血的目的。因此，進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查非常重要。本文對(duì)我院2010年到2011年的配血標(biāo)本進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查和抗體鑒定，現(xiàn)將鑒定結(jié)果報(bào)道如下:

1 材料與方法

1.1 材料 檢測(cè)標(biāo)本均為對(duì)2010年到2011年本院住院患者需要輸血的患者血標(biāo)本。微柱凝膠卡由Diana公司提供;篩選細(xì)胞、譜細(xì)胞、紅細(xì)胞血型定型免疫試劑由上海生物醫(yī)藥制品有限公司提供;單克隆血型抗體試劑均為國(guó)外原裝進(jìn)口。

1.2 儀器 血清學(xué)專用離心機(jī)(KA-2200)，普通離心機(jī)80-2(上海手術(shù)器械廠)，HZS-M水浴振蕩儀(哈爾濱東聯(lián)電子技術(shù)有限公司)，水浴恒溫箱(上海醫(yī)用恒溫設(shè)備廠)，OLMPUS顯微鏡(日本)及Diana微柱凝膠專用設(shè)備。

1.3 微柱凝集法，向標(biāo)示好Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的3個(gè)微柱反應(yīng)池中加40 μl備檢血清，再加10 μl 5%相應(yīng)篩檢紅細(xì)胞;每孔加1滴BLISS液，置37℃孵育10 min;取出置專用水平離心機(jī)離心5 min，觀察結(jié)果:紅細(xì)胞全部沉于微柱底部者為陰性，聚于微柱上面者為陽(yáng)性(將陽(yáng)性血清再用間接抗球蛋白試驗(yàn)確證)。如抗體篩選陽(yáng)性需進(jìn)一步進(jìn)行抗體鑒定，操作方法與上相同。自身抗體陽(yáng)性的標(biāo)本采用微柱凝膠自身抗體分型卡進(jìn)行抗體分型，操作方法同上。

1.4 抗球蛋白試驗(yàn)(試管法)取5支標(biāo)識(shí)好Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照的試管，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ管加5%相應(yīng)篩檢紅細(xì)胞2滴和被檢血清2滴，陽(yáng)性對(duì)照管加5%Rh(D)陽(yáng)性紅細(xì)胞和IgG抗-D血清各2滴，陰性對(duì)照管加5%Rh(D)陽(yáng)性紅細(xì)胞和AB型血清各2滴;各管37℃孵育1 h后用生理鹽水洗滌3次，再加抗球蛋白試劑2滴，2000r/min離心1 min，觀察結(jié)果:當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照管和被檢管出現(xiàn)凝集，而陰性對(duì)照管不凝集時(shí)，即為陽(yáng)性，說(shuō)明血清中有不規(guī)則抗體存在。需進(jìn)一步進(jìn)行抗體鑒定，操作方法與上相同。

2 結(jié)果

不規(guī)則抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。從表1中可見(jiàn)，不規(guī)則抗體陽(yáng)性32例，其中同種抗體18例(56.25%)，自身抗體14例(43.75%)，同種抗體中以Rh血型系統(tǒng)最為常見(jiàn)，伴混合抗體的比率為30%(3/10);抗體類型多為IgG型抗體，與IgM型的比率為12∶7。自身抗體中冷自身抗體4例，抗體類型為IgM型;溫自身抗體10例，單純抗IgG抗體陽(yáng)性2例，抗IgG、C3 d抗體同時(shí)陽(yáng)性8例，抗體類型均為IgG型。對(duì)有同種抗體的患者輸入無(wú)相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞后，患者未發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)。有自身抗體的患者按自身溶血性貧血的輸血原則輸注洗滌紅細(xì)胞，首次不超過(guò)1 U單位，采用少量多次緩慢輸入后，患者貧血癥狀緩解。

表1 不規(guī)則抗體鑒定結(jié)果

3 討論

不規(guī)則抗體的篩查已廣泛應(yīng)用于輸血反應(yīng)的診斷與預(yù)防，特別是對(duì)有妊娠史和輸血史的患者。雖然不規(guī)則抗體在正常人群中檢出率僅為0.3% ～2%［1］，但它是引起遲發(fā)性免疫反應(yīng)的主要原因。由于Rh血型系統(tǒng)抗原性較強(qiáng)，產(chǎn)生免疫性抗體的頻率較高，據(jù)報(bào)道每輸一個(gè)單位血使受血者致敏的風(fēng)險(xiǎn)為1%～1.6%，多次輸血產(chǎn)生同種抗體的幾率為15%～20%，對(duì)于連續(xù)輸血患者，3 d篩檢1次，或5～6 d篩檢1次［2，3］，以防止開(kāi)始效價(jià)很低不易檢出，但經(jīng)過(guò)輸血刺激，回憶性抗體效價(jià)迅速升高而引起溶血反應(yīng)。因此，輸血前進(jìn)行常規(guī)抗體篩選，以發(fā)現(xiàn)有臨床意義的不規(guī)則抗體，對(duì)臨床輸血安全具有重要的意義。

不規(guī)則抗體是指抗-A、抗-B以外的血型抗體，主要經(jīng)輸血或妊娠等免疫刺激產(chǎn)生，常分為自身抗體和同種抗體，同種抗體一般具有特異性，自身抗體是非特異性的。不規(guī)則抗體類型有IgM，也有IgG型。近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的微柱凝膠技術(shù)對(duì)這兩種類型的抗體都有很好的檢測(cè)效果，這種技術(shù)在國(guó)外輸血界已成為常規(guī)檢測(cè)方法［4，5］，我們?cè)谳斞皯?yīng)用凝膠柱技術(shù)對(duì)患者標(biāo)本進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，與手工抗球蛋白法檢測(cè)的結(jié)果完全一致，可以準(zhǔn)確地檢出患者體內(nèi)的不規(guī)則抗體。本次調(diào)查結(jié)果顯示輸血前患者血清中的同種抗體的主要是Rh系統(tǒng)抗體，而臨床上發(fā)生遲發(fā)性溶血反應(yīng)的也絕大部分是由Rh血型抗體引起的，其中以抗-E最多，也有報(bào)道抗-D大于抗-E［6］。臺(tái)灣的調(diào)查資料認(rèn)為抗-D抗體在臺(tái)灣人中較為罕見(jiàn)，僅為1/235000，這與本次調(diào)查結(jié)果也不一致，可能與調(diào)查對(duì)象的選擇有關(guān)。理論上的解釋為D的抗原性強(qiáng)于E，但是黃種人D陰性頻率約3/1000，而E抗原陰性率為61%，因此，我們認(rèn)為抗-D產(chǎn)生頻率應(yīng)小于抗-E。MNSs系統(tǒng)抗體一般為冷反應(yīng)性抗體，有學(xué)者認(rèn)為其是無(wú)臨床意義的抗體，但若在37℃有反應(yīng)性時(shí)，還會(huì)引起臨床急性輸血反應(yīng)，應(yīng)引起臨床的足夠重視。

對(duì)于同種抗體的輸血治療，原則上是然后根據(jù)抗體性質(zhì)提前尋找相合的血液或采用其他方式輸血。在篩出不規(guī)則抗體后及時(shí)與血站聯(lián)系，以提前準(zhǔn)備相合血液，或采取自身輸血，為患者提前儲(chǔ)血。對(duì)含有自身抗體的自身溶貧患者，抗體篩選也可以出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，但患者自身紅細(xì)胞也有凝集，應(yīng)該進(jìn)行自身抗體分型，選擇與受血者Rh系統(tǒng)血型完全一致者進(jìn)行輸血。IgM型抗體一般在37℃有活性，一般在體內(nèi)不能引起溶血反應(yīng)，但患者處于低溫麻醉狀態(tài)下手術(shù)時(shí)應(yīng)注意，因?yàn)榇祟惪贵w可激活補(bǔ)體途徑導(dǎo)致溶血反應(yīng)。因此輸血時(shí)也要注意加溫輸注。

因此，對(duì)于需要輸血的患者進(jìn)行抗體篩選，可以及早發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體，從而提前準(zhǔn)備相合的血液，以保證體內(nèi)有不規(guī)則抗體的患者及時(shí)用血，避免由血型不合引起的輸血反應(yīng)。

［1］肖星莆.輸血技術(shù)手冊(cè).四川科學(xué)技術(shù)出版社，1992:95.

［2］胡永紅，李勇.抗體檢測(cè)和鑒定.見(jiàn):李勇，楊貴貞主編.人類紅細(xì)胞血型學(xué)實(shí)用理論與實(shí)驗(yàn)技術(shù).中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社，1999:139-157.

［3］孔令宜.紅細(xì)胞檢查.見(jiàn):孔令宜，馬三科，馬長(zhǎng)仁，等編著.成份輸血與臨床應(yīng)用.遼寧科技出版社，1994:369-429.

［4］Cate JC，Reilly N.Evaluation and implementation of the gel test for indirect antiglobulintesting in a community hospital laboratory.ArchPathol Lab Med，1999，123(8):693.

［5］Langston MM，Procter JL，Cipolin KM，et al.Evaluation of the gel system for ABO grouping and D typing.Transfusion，1999，39(3):300.

［6］張麗，矯淑珍，劉杰，等.抗-D、抗-C、抗-E引起溶血性輸血反應(yīng). 中國(guó)輸血雜志，1999，12(3):182-183.