劉吉純 張艷菊

我國是乙型肝炎病毒高流行地區(qū)，在乙型肝炎的診斷中，習(xí)慣用以HBeAg是否陽性來判斷乙型肝炎患者體內(nèi)乙型肝炎病毒[1]，但由于HBeAg變異株的出現(xiàn)，僅僅依靠檢測乙肝五項(xiàng)標(biāo)志物中的HbeAg來判斷HBV)的復(fù)制及傳染性的強(qiáng)弱顯然是不可靠的，HBV-DNA是被認(rèn)為診斷乙肝病毒是否復(fù)制和有無傳染性的“金標(biāo)準(zhǔn)”[2]，HBV前S1抗原(Pre-S1)也是近年來公認(rèn)的HBV感染、復(fù)制和乙肝患者診斷、治療和預(yù)后的一個重要標(biāo)志[3]，為此，本文觀察分析了慢性乙型患者的e抗原、前S1抗原與HBV-DNA含量在反映乙肝病毒復(fù)制方面的相關(guān)性及臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 598份血清標(biāo)本均來自我院內(nèi)科門診和病房e抗原為陰性的慢性乙型肝炎患者，其中男328例，年齡28～71歲，平均年齡(52.5±10.2)歲;女270例，年齡26～77歲，平均年齡(56.5±12.5)歲。所選患者均有肝病史5年以上，符合慢性肝病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 儀器與試劑 乙肝五項(xiàng)檢測試劑盒有上?？迫A生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，Pre-S1Ag試劑盒由上海阿爾法生物技術(shù)有限公司提供，兩種試劑酶標(biāo)儀器均為芬蘭Multiskan MK3酶標(biāo)檢測儀;HBV-DNA檢測儀器為SLAN熒光定量PCR儀，試驗(yàn)盒由上海申友生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供。所用試劑盒均通過衛(wèi)生部批檢，并貼有防偽標(biāo)簽，均在有效期內(nèi)，加樣所用移液器均為上海求精生化試劑儀器有限公司生產(chǎn)，均經(jīng)過市計(jì)量局校正。

1.3 方法

1.3.1 檢測方法 早晨抽取患者空腹靜脈血3～5 ml加入無抗凝劑的干燥試管或含促凝分離膠真空管，放置37℃水浴箱，待凝固后離心分離血清，1～2 h內(nèi)開始檢測。血清乙肝五項(xiàng)和前S1抗原檢測應(yīng)用ELISA方法，HBV-DNA采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法定量檢測，上述檢測均嚴(yán)格按照試劑盒和儀器操作說明書進(jìn)行加樣、洗板以及比色，乙肝五項(xiàng)和前S1抗原按酶標(biāo)儀結(jié)果判讀陰陽性，HBV-DNA以大于106copies/ml為陽性。

1.3.2 分組分析 按照乙肝五項(xiàng)常見模式分組，將e抗原為陰性的慢性乙型肝炎患者分為3組:小三陽組248例(“HB-sAg+，抗-HBe+，抗-HBc+”)，1、4 陽性組(HBsAg+、抗-HBe+組)220例;1、5陽性組(HBsAg+、抗-HBc+組)130例，將以上3組血清Pre-S1、HBV-DNA陽性率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并比較分析。

1.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對檢測結(jié)果進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

598例e抗原為陰性的慢性乙型肝炎患者中，小三陽組Pre-S1Ag陽性率為77.1%(191/248)，HBV DNA平均含量為5.26±1.32(×106copies/ml)、陽性率為70.7%(175/248)，均分別高于1、4陽性組和1、5陽性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，1、4陽性組和1、5陽性組的 Pre-S1Ag陽性率、HBV DNA平均含量以及陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，結(jié)果見表1。

表1 慢性乙肝Pre-S1陽性率、HBV-DNA平均含量、陽性率的比較

3 討論

乙型肝炎病毒(HBV)附著于肝細(xì)胞上，最重要的介導(dǎo)部位是前S1蛋白的氨基酸(AA)21-47片段，變異的病毒只要在這一區(qū)段完好就有傳染性，因此，前S1蛋白(抗原)在病毒侵入肝細(xì)胞過程中起重要作用，近年來越來越多的研究[4～5]表明，前S1抗原作為HBV血清學(xué)新的標(biāo)志物能夠充分反應(yīng)機(jī)體的體液免疫狀況，對乙肝病毒感染的早期診斷和判斷預(yù)后顯現(xiàn)出了較高的臨床應(yīng)用價值，HBV-DNA檢測是判斷病毒復(fù)制活躍和具有傳染性的直接可靠依據(jù)，能夠直接檢測患者血清中病毒的拷貝數(shù)量，從而反映患者機(jī)體內(nèi)病毒血癥的水平。本文檢測結(jié)果和分組統(tǒng)計(jì)顯示，無論是小三陽組還是其他兩組，Pre-S1Ag的陽性率和HBV DNA陽性率有很好的正相關(guān)性，也進(jìn)一步表明Pre-S1Ag是判斷病毒復(fù)制活躍和具有傳染性的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

乙肝五項(xiàng)指標(biāo)做為乙肝病毒血清標(biāo)志物在臨床應(yīng)用已經(jīng)有二十多年，其臨床意義已經(jīng)被人們所熟悉，臨床上判斷HBV的復(fù)制和傳染性過去常常以HBeAg作為一個重要指標(biāo)，HBeAg陽性被認(rèn)為乙肝病毒在機(jī)體內(nèi)有較強(qiáng)的復(fù)制和傳染性，而乙肝患者HBeAg轉(zhuǎn)陰提示傳染性降低，但隨著Pre-S1Ag和HBV DNA在臨床的應(yīng)用，人們發(fā)現(xiàn)HBeAg陰性患者也并不表示乙肝病毒在機(jī)體被清除，仍有病毒復(fù)制[6]，本文通過對598例e抗原為陰性的慢性乙型肝炎患者進(jìn)Pre-S1Ag和HBV DNA的檢測，結(jié)果顯示仍有一定的陽性率，特別是小三陽患者Pre-S1Ag和HBV DNA陽性率都達(dá)到了70%以上，表明這部分患者機(jī)體內(nèi)仍有病毒復(fù)制，其HBeAg陰性可能是由于HBV變異造成，HBV常見的變異是前核心區(qū)和核心啟動子區(qū)的變異，即前核心區(qū)G 1896 A突變使前核心區(qū)出現(xiàn)終止密碼，導(dǎo)致E抗原不能合成，核心啟動子區(qū)A 1762 T+G 1764 A突變造成信號RNA轉(zhuǎn)錄降低，導(dǎo)致HBeAg不能分泌，在患者血清中檢測不到HbeAg。

本文結(jié)果還顯示598例患者中，小三陽組Pre-S1Ag陽性率、HBV DNA平均含量和陽性率，均分別高于1、4陽性組和1、5 陽性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)，1、4 陽性組和 1、5陽性組的Pre-S1Ag陽性率、HBV DNA平均含量以及陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，產(chǎn)生上述原因我們認(rèn)為，小三陽是傳染性最強(qiáng)的大三陽(HbeAg陽性)的過渡期，其HbeAg轉(zhuǎn)陰并非表示乙肝病毒在機(jī)體被清除，可能是由于HBV變異造成，而1、4陽性組和1、5陽性組的Pre-S1Ag陽性率、HBV DNA平均含量以及陽性率比較接近，且明顯低于小三陽組，可能是HbeAg被機(jī)體清除的幾率大于小三陽患者，病情趨于好轉(zhuǎn)，盡管如此本文結(jié)果還是顯示這兩組仍然有50%以上Pre-S1Ag和HBV DNA陽性率，總之，本文研究表明了部分HBeAg轉(zhuǎn)陰的慢性乙型肝炎患者仍存在病毒高復(fù)制，而PreS1則可避免這種因HBeAg變異而產(chǎn)生的陰性誤導(dǎo)[7]，且有文獻(xiàn)報(bào)道[8]這些患者發(fā)生肝硬化和肝癌可能性大，因此，對于e抗原為陰性的慢性乙型肝炎患者進(jìn)行聯(lián)合乙肝標(biāo)志物以及前S1抗原和PCR檢測HBVDNA臨床意義重大。

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