石達友，廖申權(quán)，郭銘生，劉 念，李鵬飛，郭世寧，唐兆新＊

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣東廣州510642；2.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所，廣東廣州510640）

硒對黃曲霉毒素B1中毒雛鴨血清抗氧化功能的影響

石達友1，廖申權(quán)2，郭銘生1，劉 念1，李鵬飛1，郭世寧1，唐兆新1＊

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣東廣州510642；2.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所，廣東廣州510640）

為觀察黃曲霉毒素B1（aflatoxin B1，AFB1）對試驗雛鴨血清抗氧化功能的影響及亞硒酸鈉對AFB1的頡頏效應(yīng)，選用7日齡雛鴨90只，隨機分為3組，每組30只。Ⅰ組為空白對照組，灌胃同等量二甲基亞砜；Ⅱ、Ⅲ組為試驗組。Ⅱ組、Ⅲ組每天按0.1mg/kg體重劑量灌胃AFB1，同時給Ⅲ組每天按1mg/kg劑量灌胃亞硫酸鈉，連續(xù)投藥21d。試驗期間，分別在給投藥后7、14、21d采血，檢測雛鴨血清抗氧化功能主要指標。結(jié)果顯示，Ⅱ、Ⅲ組雛鴨血清超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化物酶及谷胱甘肽還原酶活性與總抗氧化能力均顯著低于Ⅰ組（P＜0.05），而丙二醛含量顯著高于Ⅰ組（P＜0.05）；與Ⅱ組相比，經(jīng)灌胃投用亞硒酸鈉的Ⅲ組雛鴨血清抗氧化指標均得到明顯的改善（P＜0.05）。結(jié)果表明，黃曲霉毒素B1可導(dǎo)致雛鴨血清抗氧化功能發(fā)生顯著的變化，而硒能明顯改善其引起的氧化損傷。

黃曲霉毒素B1；抗氧化功能；雛鴨；亞硒酸鈉

＊通訊作者

黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織（WHO）癌癥研究機構(gòu)劃定為Ⅰ類致癌物，是一種毒性極強的劇毒物質(zhì)，其中以黃曲霉毒素B1（aflatoxin B1，AFB1）的毒性最強，長期攝入含有此類毒素的飼料可使動物發(fā)生肝癌等病變。研究結(jié)果表明，黃曲霉毒素B1對肝等主要臟器損傷的原因之一與AFB1造成機體自由基代謝發(fā)生變化有密切的關(guān)系。自由基與許多疾病的發(fā)生和發(fā)展聯(lián)系密切，主要病理機制是通過生物膜中的多價不飽和脂肪酸的過氧化反應(yīng)，導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化物增多，引起細胞損傷，致使細胞代謝功能障礙，并最終引起器官功能發(fā)生改變［1］。本試驗旨在研究雛鴨灌胃一定劑量黃曲霉毒素B1后，對血清總抗氧化能力（total－antioxidant capacity，T－AOC）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、過氧化氫酶（satalase，CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH－Px）、谷胱甘肽還原酶（glutathione reductase，GR）、丙二醛（malondialdehytra，MDA）等抗氧化指標的影響，以及亞硒酸鈉對黃曲霉毒素B1中毒的頡頏效應(yīng)，為硒在獸醫(yī)臨床上防治畜禽黃曲霉毒素B1中毒提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗用動物 1日齡三水白鴨商品代肉用雛鴨飼養(yǎng)至7日齡。

1.1.2 主要試劑與藥品 二甲基亞砜、黃曲霉毒素B1均為美國Sigma公司產(chǎn)品；無水亞硒酸鈉（Na2SeO3）由廣州華農(nóng)大實驗獸藥有限公司提供；T－AOC、SOD、CAT、GSH－Px、GR、MDA 檢測試劑盒為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 試驗用動物的分組處理 將飼養(yǎng)至7日齡的健康雛鴨，隨機選90只分為3組（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組），每組30只，公母各半。Ⅰ組為空白對照組，同等劑量二甲基亞砜灌胃；Ⅱ、Ⅲ組為試驗組，每天以0.1 mg/kg黃曲霉毒素B1灌胃1次，連續(xù)投藥21d，試驗期間給Ⅲ組雛鴨每天以1mg/kg亞硒酸鈉（Na2SeO3）灌胃1次。黃曲霉毒素B1以二甲基亞砜溶解，亞硒酸鈉以水溶解，試驗期共21d。

1.2.2 血樣采集 試驗雛鴨投藥后第7、14、21天分別從各實驗組中隨機取5只雛鴨，用戊巴比妥麻醉，心臟采血分離血清待測。

1.2.3 檢測方法 SOD活性采用黃嘌呤氧化酶法；T－AOC活性采用FRAP法；CAT活性采用紫外分光光度法；GSH－PX活性和GR活性采用DTNB法；MDA含量采用硫代巴比妥酸比色法。嚴格按檢測試劑盒說明的操作步驟進行。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理，數(shù)據(jù)以平均值±標準誤（±SE）表示，應(yīng)用Ducans新復(fù)極差檢驗法（DMRT法）比較各組間差異性。

2 結(jié)果

2.1 黃曲霉毒素B1對雛鴨血清T－AOC的影響

結(jié)果見表1，由表1可以看出，Ⅱ、Ⅲ組雛鴨血清T－AOC顯著低于Ⅰ組（P＜0.05）；Ⅱ組雛鴨血清T－AOC顯著低于Ⅲ組（P＜0.05）。

表1 各組雛鴨血清T－AOC變化（U/mL）Table 1 Changes of serum T－AOC in each group of ducklings

2.2 黃曲霉毒素B1對雛鴨血清SOD活性的影響

結(jié)果見表2，由表2可以看出，Ⅱ、Ⅲ組雛鴨血清SOD活性顯著低于Ⅰ組（P＜0.05）；Ⅱ組雛鴨血清SOD活性顯著低于Ⅲ組（P＜0.05）。

表2 各組雛鴨血清SOD活性變化（U/mL）Table 2 Changes of serum SOD activity in each group of ducklings

2.3 黃曲霉毒素B1對雛鴨血清CAT活性的影響

結(jié)果見表3，由表3可以看出，Ⅱ、Ⅲ組雛鴨血清CAT活性顯著低于第Ⅰ組（P＜0.05）；Ⅱ組雛鴨血清CAT活性明顯低于Ⅲ組，并在雛鴨投藥14d后開始呈顯著性差異（P＜0.05）。

2.4 黃曲霉毒素B1對雛鴨血清GSH－Px活性的影響

結(jié)果見表4，由表4可以看出，Ⅱ、Ⅲ組雛鴨血清GSH－Px活性顯著低于Ⅰ組（P＜0.05）；Ⅱ組雛鴨血清GSH－Px活性顯著低于Ⅲ組（P＜0.05）。

表3 各組雛鴨血清CAT活性變化（U/mL）Table 3 Changes of serum CAT activity in each group of ducklings

表4 各組雛鴨血清GSH－Px活性變化（U/mL）Table 4 Changes of serum GSH－Px activity in each group of ducklings

2.5 黃曲霉毒素B1對雛鴨血清GR活性的影響

結(jié)果見表5，由表5可以看出，Ⅱ、Ⅲ組雛鴨血清GR活性顯著低于Ⅰ組（P＜0.05）；Ⅱ組雛鴨血清GR活性明顯低于Ⅲ組，并在雛鴨投藥14d后開始呈顯著性差異（P＜0.05）（表5）。

表5 各組雛鴨血清GR活性變化（U/mL）Table 5 Changes of serum GR activity in each group of ducklings

2.6 黃曲霉毒素B1對雛鴨血清MDA含量的影響

結(jié)果見表6，由表6可以看出，Ⅱ、Ⅲ組雛鴨血清MDA含量顯著高于Ⅰ組（P＜0.05）；Ⅱ組雛鴨血清MDA含量顯著高于Ⅲ組（P＜0.05）。

表6 各組雛鴨血清MDA含量變化（nmol/mL）Table6 Changes of serum MDA content in each group of ducklings

3 討論

自由基在化學(xué)上也稱"游離基"，是指能獨立存在，具有未配對電子的分子、原子、原子團、離子和功能基。正常生理狀態(tài)下，機體內(nèi)自由基不斷地產(chǎn)生，也不斷地被自由基清除系統(tǒng)清除，維持著動態(tài)平衡。但如果機體處于病理條件下，自由基的產(chǎn)生超出了自由基清除體系的能力時，就會造成自由基蓄積，給機體帶來損傷。自由基通過與細胞和亞細胞器膜磷脂中多不飽和脂肪酸（PUFA）經(jīng)鏈式或支鏈式反應(yīng)生成一系列脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，引起細胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞，其反應(yīng)終產(chǎn)物MDA可與類脂、蛋白質(zhì)形成交聯(lián)物［2］。因此，測定 MDA含量及抗氧化系統(tǒng)功能可評估機體組織脂質(zhì)過氧化損傷程度和氧自由基的生成情況［3－4］。史瑩華等［5］等用含黃曲霉毒素0.1 mg/kg的日糧長期飼喂豬，結(jié)果顯示，黃曲霉毒素使豬血清SOD、CAT、GSH－Px及 GR的活性均顯著降低，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的含量均顯著增加。為減輕黃曲霉毒素對機體臟器自由基代謝系統(tǒng)的損傷，有關(guān)硒作為一種有效的抗氧化劑研究報道較多。硒存在于體內(nèi)各種組織和體液內(nèi)，它具有保護機體肝臟等重要臟器免受損傷的功能，因此硒也稱為抗肝壞死保護因子，是阻止肝壞死的因素之一［6］。作為一種抗氧化劑，硒本身也可以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)生的氧自由基離子等，保護細胞膜及細胞器膜免受氧自由基的干擾和損害［7］。劉家國等［8］研究表明，富硒麥芽較亞硒酸鈉能更顯著地提升黃曲霉毒素B1中毒大鼠全血、肝等組織中GSH－Px活性，提高SOD水平。本試驗結(jié)果顯示，黃曲霉毒素B1導(dǎo)致雛鴨血清 T－AOC、SOD、CAT、GSH－Px和 GR活性顯著降低，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量顯著增高，表明黃曲霉毒素B1中毒后雛鴨血清抗氧化功能顯著降低，自由基生成增多，導(dǎo)致機體血液及臟器脂質(zhì)過氧化損傷。在給雛鴨灌胃投用亞硒酸鈉后，其血清各項抗氧化指標均得到明顯的改善，表明亞硒酸鈉具有明顯改善AFB1中毒雛鴨血清抗氧化功能受損的功效。

［1］ 唐兆新，高 洪，馬吉飛，等.山羊內(nèi)毒素休克時山莨菪堿對腎臟自由基代謝的影響［J］.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，1998，21（1）：91－95.

［2］ Farber J L，Kyle M E，Coleman J B.Mechanisms of cell injury by activated oxygen species［J］.Lab Invest，1990，62（6）：670－679.

［3］ 王友令，唐兆新.氨基胍對內(nèi)毒素血癥肉雞肝自由基損傷的影響［J］.中國獸醫(yī)科學(xué)，2007，37（7）：610－613.

［4］ 唐兆新，李培英，王炫英，等.山羊內(nèi)毒素休克誘發(fā)脂質(zhì)過氧化作用及山莨菪堿對其影響的研究［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報，1998，29（2）：179－185.

［5］ 史瑩華，許梓榮，王成章.黃曲霉毒素對豬生長性能及免疫和抗氧化指標的影響［J］.中國獸醫(yī)學(xué)報，2007，27（5）：733－736.

［6］ 張革紅，張成琰，趙和平.亞硒酸鈉對非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝臟抗氧化能力的影響［J］.中國藥物與臨床，2009，9（8）：707－708.

［7］ 劉永旺，劉海艦，王寶琴，等.富硒麥芽對鏈尿佐菌素誘發(fā)糖尿病大鼠糖脂代謝的影響［J］.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2004，27（3）：81－84.

［8］ 劉家國，趙 圣，劉海艦，等.富硒麥芽對黃曲霉毒素B1致肝腫瘤大鼠抗氧化作用及γ－GT酶活性的影響［J］.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2005，28（1）：85－89.

Effects of Selenium on Serum Antioxidant Function in Poisoning Ducklings Induced by Aflatoxin B1

SHI Da－you1，LIAO Shen－quan2，GUO Ming－sheng1，LIU Nian1，LI Peng－fei1，GUO Shi－ning1，TANG Zhao－xin1

（1.CollegeofVeterinaryMedicine，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou，Guangdong，510642，China；
2.InstituteofVeterinaryMedicine，GuangdongAcademyofAgriculturalSciences，Guangzhou，Guangdong，510640，China）

In order to observe the influences of aflatoxin B1（AFB1）on serum antioxidant function in ducklings and study the antagonistic effect of sodium selenite on AFB1，seven day－old ducklings were used as experimental animals.All animals were divided into three groups（30animals each）.The ducklings in groupⅠwas only administrated in the same volume of DMSO with the other group as control.The ducklings in groupⅡand groupⅢ were administrated intragastrically in AFB1at a dose 0.1mg/kg body weight respectively.The ducklings in groupⅢ was administrated in sodium selenite at a dose 1mg/kg.All treatments were given once daily during 7－28day－old.The antioxidant function indicators were detected in ducklings serum on 7th，14th，21th day after treatment.The results showed that the activity of superoxide dismutase，satalase，glutathione peroxidase，glutathione reductase and total－antioxidant capacity significantly decreased in duckling's seral of groupⅡ，Ⅲcompared with groupⅠ（P＜0.05），and the level of malondialdehytra significantly increased（P＜0.05）.It showed a significant improvements in seral antioxidant function in ducklings of sodium selenite treated groupⅢcompared with groupⅡ（P＜0.05）.The results revealed that sodium selenite could ameliorate the duckling's seral antioxidant function change induced by aflatoxin B1.

aflatoxin B1；antioxidant function；duckling；sodium selenite

S859.8

A

1007－5038（2011）10－0032－04

2011－04－07

廣東省農(nóng)業(yè)攻關(guān)項目（2008B20700004）

石達友（1977－），男，四川成都人，講師，博士，主要從事中獸醫(yī)醫(yī)藥教學(xué)、科研工作。