何欣蓉，王 瓊，朱治鍵

(川北醫(yī)學(xué)院病理教研室，四川 南充 637000)

口腔鱗癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)是頭頸部最常見的惡性腫瘤之一，近年來發(fā)病率呈上升趨勢，已證實其發(fā)生發(fā)展與多個基因的異常表達(dá)有關(guān)。分化相關(guān)基因NDRG1(N-myc downstream regulated gene-1，N-myc 下游調(diào)節(jié)基因-1)是1992 年Stantont 等［1］和Charron 等［2］在N-myc 敲除的小鼠胚胎組織中發(fā)現(xiàn)的，因受N-myc 的抑制而得名。NDRG1 定位于人染色體8q24.3，長約60kb，其mRNA 長3kb，編碼一個相對分子量為43 kDa 的蛋白質(zhì)。NDGR1 mRNA 在人體組織中廣泛存在，包括消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)和泌尿系統(tǒng)，但不同系統(tǒng)之間的轉(zhuǎn)錄水平有很大差異。NDRG1 蛋白大都在上皮組織表達(dá)［3］。NDRG1 在腫瘤組織中的作用有很大爭議。在有些腫瘤中表現(xiàn)為促進作用［4，5］，而有些腫瘤中又表現(xiàn)為抑制作用［6］。NDRG1 在口腔鱗癌中的表達(dá)情況未見報道，因此，我們通過免疫組化方法研究NDRG1蛋白在口腔鱗癌中的表達(dá)，初步探討NDRG1 與口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材 料

選擇2007 年1 月－2010 年12 月期間川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科口腔鱗癌患者手術(shù)切除標(biāo)本65例，所有病例術(shù)前均未經(jīng)放療、化療。其中男性39例、女性26 例，男女比例為1.5 ∶1，年齡區(qū)間為(43 －70)歲，平均52 歲，＜60 歲28 例，≥60 歲37例，所有病例均證實為鱗狀細(xì)胞癌，其中高分化30例，中分化26 例，低分化9 例。根據(jù)國際TNM 分期，Ⅰ－Ⅱ期42 例、Ⅲ－Ⅳ期23 例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移43 例。收集20 例正?？谇火つそM織作為對照。

1.2 方 法

1.2.1 試劑:羊抗人多克隆NDRG1 抗體(N-19:sc-19464)，規(guī)格1.0ml，工作濃度1 ∶100，購于美國SANTA CRUZ 公司。SP 免疫組化染色試劑盒，二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸(Diaminobenzidine，DAB)均購于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.2.2 免疫組化染色方法:將原病理常規(guī)石蠟包埋的蠟塊作4μm 切片，每例作連續(xù)切片2 張，分別作HE 染色、NDRG1 免疫組織化學(xué)SP 法染色。各組織切片常規(guī)脫蠟及水化后，依次按說明書完成免疫組化染色各步驟。所有切片均在同一實驗室，由同一技術(shù)人員使用同一批號試劑完成免疫組織化學(xué)染色。用已知陽性對照片作陽性對照，用PBS 代替一抗作陰性對照。

1.2.3 結(jié)果判定:NDRG1 在胞膜或胞質(zhì)中表達(dá)，每張切片檢測20 個高倍視野，按切片中顯色細(xì)胞的比例判定，免疫組化染色陽性細(xì)胞數(shù)＞10%，即記為陽性，否則為陰性。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)處理:應(yīng)用SPSS11.5 軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，采用χ2檢驗分析口腔鱗癌組織與正常口腔黏膜組織中NDRG1 的表達(dá)，及口腔鱗癌組織中NDRG1 蛋白表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系，以p ＜0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 NDRG1 在口腔鱗癌組織與正常口腔黏膜組織中的表達(dá)

免疫組化SP 法顯示NDRG1 蛋白的陽性信號主要表達(dá)在細(xì)胞漿內(nèi)，部分在細(xì)胞膜上，為黃-棕褐色顆粒。20 例正常口腔黏膜組織中只有5 例NDRG1 蛋白陽性表達(dá)(圖1)，陽性表達(dá)率為25%(5/20)，65 例口腔鱗癌組織中48 例NDRG1 蛋白表達(dá)陽性(圖2)，陽性表達(dá)率為72.3% (48/65)，NDRG1 蛋白在口腔鱗癌組織中的表達(dá)與正?？谇火つそM織中的表達(dá)差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(p ＜0.01)。

2.2 NDRG1 表達(dá)與口腔鱗癌臨床病理特征的關(guān)系

從表1 中可以看出，NDRG1 蛋白的表達(dá)與口腔鱗癌發(fā)生部位、性別、年齡均無相關(guān)性(p ＞0.05);而與口腔鱗癌分化程度、浸潤深度、分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況均具相關(guān)性(p ＜0.05)，NDRG1 蛋白在分化低、浸潤深、分期高及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的口腔鱗癌中表達(dá)高。

表1 NDRG1 的表達(dá)與口腔鱗癌患者臨床病理特征的關(guān)系

3 討 論

NDRG1 定位于人染色體8q24.3，長約60kb，其mRNA 長3kb，編碼一個相對分子量為43 kDa 的蛋白質(zhì)。NDGR1 mRNA 在人體組織中廣泛存在。NDRG1 蛋白大都在上皮組織表達(dá)。現(xiàn)有文獻已經(jīng)證實NDRG1 與細(xì)胞分化、器官成熟、組織缺氧、雌激素作用、抑癌基因p53 和PTEN 等有關(guān)［7－9］，并能被多種分化調(diào)節(jié)劑誘導(dǎo)表達(dá)［10］。目前對NDGR1 基因的功能認(rèn)識還不完全清楚，其在腫瘤組織中的表達(dá)也存在很大爭議。在報道的文獻中，關(guān)于NDGR1與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后都有很多的研究。目前較多文獻報道，NDRG1 在很多腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)，表現(xiàn)為促進作用，Wang 等［4］在結(jié)直腸腫瘤中發(fā)現(xiàn)，NDRG1 在結(jié)直腸腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中可能起促進作用。而也有文獻報道，NDRG1 在腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)，表現(xiàn)為抑制作用，Maruyama Y 等［5］發(fā)現(xiàn)NDRG1 蛋白高表達(dá)的NDRG1 cDNA 轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞株侵襲能力顯著減少，表明NDRG1可能是一個腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因。

本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測了65 例口腔鱗癌組織和20 例正?？谇火つそM織中NDRG1蛋白表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)NDRG1 蛋白在口腔鱗癌組織中高表達(dá)(陽性率為72.3%)，而正?？谇火つそM織中低表達(dá)(陽性率為25%)，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(p ＜0.01)。同時，我們通過對65 例口腔鱗癌組織臨床病理特征與NDRG1 蛋白表達(dá)的相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn)，NDRG1 基因的表達(dá)與癌組織分化程度、腫瘤浸潤深度、臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。分化程度低、浸潤深、分期高及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，NDRG1 蛋白表達(dá)高，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(p ＜0.05)，而與患者的發(fā)病部位、年齡、性別無明顯關(guān)系。這說明NDRG1 蛋白的表達(dá)可能參與了口腔鱗癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移，但作用機制不清，還有待我們進一步去研究。同時，研究如何抑制NDRG1 基因表達(dá)及抑制其表達(dá)產(chǎn)物的功能有可能成為將來治療腫瘤的新方法。

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