辛繼躍 朱樣根 危雪暉 黃志元

（江西珍視明藥業(yè)有限公司，江西 撫州 344000）

馬來酸噻嗎洛爾是一種非選擇性β腎上腺能受體阻斷藥，無明顯的內(nèi)源性擬交感活性和局麻作用，對心肌無直接抑制作用。其滴眼液對高眼壓患者和正常人均有降低眼內(nèi)壓作用。其處方中所含的羥苯乙酯為抑菌劑，其用量過大會對眼組織產(chǎn)生較大的刺激，因此，我們?yōu)檫M(jìn)一步控制本品的質(zhì)量，建立了抑菌劑羥苯乙酯高效液相色譜法（High-performance Liquid Chromatography，HPLC）含量測定方法。通過方法學(xué)研究，結(jié)果該方法簡便、靈敏、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于本品羥苯乙酯的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀，安捷倫科技有限公司；ESJ180-4型電子分析天平，龍騰電子科技有限公司；7530G紫外可見分光光度計，上海分析儀器有限公司；迪馬 C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱。

1.2 試劑

乙腈(上海陸都化學(xué)試劑廠，色譜純，批號：20081118)；水為二級反滲透水再經(jīng)多效蒸餾水機(jī)蒸餾制得；羥苯乙酯對照品（批號：100847-200501）由中國藥品生物制品檢定所提供；馬來酸噻嗎洛爾滴眼液（批號為：070103，080501，080502，080503）由江西珍視明藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；陰性溶液由江西珍視明藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及測定方法

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈∶水（40∶60）為流動相；流速為1 mL/min；檢測波長為254 nm；進(jìn)樣量為 20 μL。

取羥苯乙酯對照品適量，精密稱定，用水稀釋成每毫升含羥苯乙酯12 μg的溶液作為對照品溶液；精密量取樣品溶液1 mL，置25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；分別吸取對照品溶液和供試品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算，即得。

2.2 方法學(xué)研究

2.2.1流動相的選擇參照文獻(xiàn)[1]用流動相組成為乙腈∶水（25∶75），結(jié)果羥苯乙酯的保留時間較長(48 min左右)不利于含量測定。調(diào)整流動相的比例為乙腈∶水（40∶60），結(jié)果羥苯乙酯的保留時間為12 min左右，色譜峰分離理想，峰形良好，可滿足本品羥苯乙酯含量測定的需要。

2.2.2測定波長的選擇取羥苯乙酯適量，精密稱定，加乙醇定量稀釋成每1 mL含羥苯乙酯5 μg的溶液，在220～400 nm范圍內(nèi)掃描，該樣品在257.4 nm波長處有最大吸收；另取羥苯乙酯適量，精密稱定，加水定量稀釋成每1 mL含羥苯乙酯6 μg的溶液，在220～400 nm范圍內(nèi)掃描，該樣品分別在255.2、255.8、256.4 nm波長處有最大吸收。而文獻(xiàn)[2]選擇254 nm作為測定波長，綜合考慮系統(tǒng)誤差原因，確定254 nm波長作為檢測波長。

2.2.3處方成分的干擾考察

①按處方量配制除羥苯乙酯外的溶液作為陰性溶液。

②取羥苯乙酯對照品適量，精密稱定，用水稀釋成每毫升含對羥基苯甲酸乙酯12 μg的溶液作為對照品溶液。

③精密量取陰性溶液1 mL，置25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為空白供試品溶液。

?、?、③項(xiàng)下兩種溶液分別取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果表明陰性溶液對羥苯乙酯含量測定無干擾，見圖1～3。

圖1 陰性溶液HPLC色譜圖

2.2.4線性試驗(yàn)精密稱取羥苯乙酯對照品30.48 mg，加適量水加熱溶解后，冷卻，移至100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液；取該儲備液，分別稀釋成3.048、6.096、12.192、18.288、24.384 μg/mL 的溶液，取 20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線行回歸得回歸方程為：Y=125.417 3X－23.462 2，r=0.999 9，結(jié)果表明該法線性關(guān)系良好。結(jié)果見表1。

圖2 羥苯乙酯對照溶液HPLC色譜圖

圖3 馬來酸噻嗎洛爾滴眼液中羥苯乙酯對照溶液HPLC色譜圖

表1 線性試驗(yàn)結(jié)果

2.2.5精密度試驗(yàn)精密吸取按2.1測定法項(xiàng)下配制的對照品溶液20 μL注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5針，測定其峰面積，結(jié)果見表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果（RSD=0.74%）

2.2.6重復(fù)性試驗(yàn)取070103批樣品，按供試品制備方法制備5份供試品，依法測定，計算羥苯乙酯的含量，結(jié)果見表3。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果（RSD=0.36%）

2.2.7耐用性試驗(yàn)

2.2.7.1 調(diào)柱溫 分別將柱溫調(diào)至20、25、30℃，然后分別測定070103批馬來酸噻嗎洛爾滴眼液中羥苯乙酯含量，結(jié)果見表4。

表4 不同柱溫條件下羥苯乙酯含量測定結(jié)果（RSD=0.32%）

2.2.7.2 調(diào)流速 分別將流動相流速調(diào)為0.8、1.0、1.2mL/min，然后分別測定070103批馬來酸噻嗎洛爾滴眼液中羥苯乙酯含量，結(jié)果見表5。

表5 不同流速條件下羥苯乙酯含量測定結(jié)果（RSD=0.06%）

2.2.7.3 調(diào)流動相比例 分別將流動相比例調(diào)為乙腈∶水 =35∶65、乙腈:水 =40∶60、乙腈∶水 =45∶55，然后分別測定070103批馬來酸噻嗎洛爾滴眼液中羥苯乙酯含量，結(jié)果見表6。

表6 不同流動相比例條件下羥苯乙酯含量測定結(jié)果（RSD=0.21%）

綜上所述，耐用性試驗(yàn)結(jié)果表明，在流動相比例小幅改變、柱溫及流速等有所改變的情況下，羥苯乙酯色譜峰僅是出峰時間略有差異，所測得的含量無明顯差異，即色譜條件的改變并不影響馬來酸噻嗎洛爾滴眼液中羥苯乙酯含量測定。

2.2.8待測溶液穩(wěn)定性取供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、24 h 吸取 20 μL，連續(xù)進(jìn)樣 6 次，檢測其峰面積。結(jié)果表明，供試品在24小時內(nèi)穩(wěn)定。

結(jié)果見表7。

表7 待測溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.2.9回收率試驗(yàn)取處方量原輔料，加水制成處方濃度的不含羥苯乙酯的空白溶液，按80%、100%、120%比例分別加入羥苯乙酯對照，加入稀釋成約9.69、12.01、14.47μg/mL的溶液各3份，精密吸取20 μL進(jìn)樣，計算回收率?；厥章试囼?yàn)表明，本法回收率良好。結(jié)果見表8。

表8 回收率試驗(yàn)結(jié)果

綜上所述，方法學(xué)研究試驗(yàn)結(jié)果表明，該法可以準(zhǔn)確測定馬來酸噻嗎洛爾滴眼液中羥苯乙酯含量。

2.3 樣品含量測定

測定常溫留樣36個月三批樣品（批號：080501，080502，080503）羥苯乙酯含量，結(jié)果見表 9。

表9 常溫留樣羥苯乙酯含量測定結(jié)果

3 討論

滴眼劑的處方工藝設(shè)計要求考慮無菌度的保持。一般滴眼劑常為多劑量給藥形式，在使用過程中無法始終保持無菌，抑菌劑的加入是必要和重要的。《中國醫(yī)院制劑規(guī)范》[4]指出羥苯乙酯的抑菌濃度為0.02%～0.08%，即每1 000 mL中溶入0.2 g羥苯乙酯可達(dá)到抑菌效果。表2可見，所測樣品的羥苯乙酯含量均在有效抑菌濃度范圍內(nèi)。本公司所研制及生產(chǎn)的馬來酸噻嗎洛爾滴眼液中羥苯乙酯處方量為0.3 g(即含0.03%)，根據(jù)研究結(jié)果將馬來酸噻嗎洛爾滴眼液中羥苯乙酯含量范圍定為：0.024%～0.036%，能夠控制本品質(zhì)量。

由于羥苯乙酯在水中幾乎不溶，因此，在配制羥苯乙酯對照品溶液時，用適量熱水溶解并冷卻后再稀釋至規(guī)定濃度較好。

[1]朱全剛，胡晉紅，孫華君，等.3種內(nèi)服液體制劑中羥苯甲酯和羥苯乙酯的含量測定[J].中國藥房，2002，13(9)：553-554.

[2]吳淑婷.羥苯乙酯滴眼液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究及其穩(wěn)定性考察[J].首都醫(yī)藥，1998，5(7)：15.

[3]潘學(xué)田.中國醫(yī)院制劑規(guī)范[M].第2版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1995：26.

[4]國家藥典委員會.中國藥典2005年版(二部)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：42.