逄世峰， 鄭培和， 許世泉， 孫成賀， 王英平

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，吉林吉林 132109)

北五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz)Baill的干燥成熟果實(shí)，具有收斂固澀，益氣生津，補(bǔ)腎寧心之功效［1］。中藥化學(xué)成分是其藥效發(fā)揮的物質(zhì)基礎(chǔ)，聯(lián)苯環(huán)辛烯型木脂素是五味子中主要生理活性成分［2］，其中包括五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素和五味子乙素等［3］。中藥飲片是在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，對(duì)“中藥材”進(jìn)行特殊加工炮制的制成品，以醋五味子、酒五味子、

蜜五味子為臨床常用［4］。炮制對(duì)飲片理化性質(zhì)的影響是必然存在的，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)炮制前后五味子中木脂素類成分及其溶出率進(jìn)行了研究，并以五味子種子進(jìn)行同步比較，試圖從化學(xué)成分角度探討北五味子不同炮制品木脂素類成分的變化與藥效發(fā)揮之間的關(guān)系，為中藥炮制現(xiàn)代化奠定一定理論基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀;超聲波清洗器(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司);電子分析天平(梅特勒TOLEDO型)。

1.2 對(duì)照品 五味子醇甲、五味子醇乙對(duì)照品購自四川維克奇生物科技有限公司，五味子甲素(批號(hào):0764-200107)、五味子乙素(批號(hào):110765-200205)對(duì)照品購于中國藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用。

1.3 試劑 甲醇為色譜純，水為超純水;其他試劑均為分析純。

1.4 藥材 北五味子:購自吉林省通化縣，經(jīng)中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所特作園藝研究室艾軍研究員鑒定為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz)Baill的干燥成熟果實(shí)。

2 方法

2.1 五味子炮制品的制備［5］

2.1.1 生五味子 取原藥材，除去雜質(zhì)及果柄，洗凈，干燥，均勻分成4等份，裝入自封袋保存，以防吸潮影響試驗(yàn)結(jié)果。取出其中1份，另外3份用于五味子炮制品制備。

2.1.2 醋五味子 取凈五味子，用米醋拌勻，置保鮮盒內(nèi)，密閉，隔水加熱至黑色，取出干燥，稱重。醋的用量為每100 g藥材加20 g米醋。

2.1.3 酒五味子 取凈五味子，用黃酒拌勻，置適宜的容器內(nèi)，密閉，隔水加熱至表面呈紫黑色或黑褐色，取出干燥，稱重。黃酒的用量為每100 g藥材加20 g黃酒。

2.1.4 蜜炒五味子 取煉蜜加適量開水稀釋后，加入凈五味子中，拌勻，潤透，置炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒至不黏手為度，取出放涼。每100 g五味子，用煉蜜10 g。

2.1.5 生五味子種子 取原藥材種子，除去雜質(zhì)，干燥，均勻分成4等份，裝入自封袋保存，以防吸潮影響試驗(yàn)結(jié)果。取出其中1份，另外3份用于五味子種子炮制品制備。

2.1.6 醋五味子種子 取五味子種子，用米醋拌勻，置保鮮盒內(nèi)，密閉，隔水加熱1.5 h，取出干燥，稱重。醋的用量為每100 g藥材加20 g米醋。

2.1.7 酒五味子種子 取五味子種子，加入黃酒，拌勻，置適宜的容器內(nèi)，密閉，隔水加熱1.5 h，取出干燥，稱重。黃酒的用量為每100 g藥材加20 g黃酒。

2.1.8 蜜炒五味子種子 取煉蜜加適量開水稀釋后，加入凈五味子種子中，拌勻，潤透，置炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒至不黏手為度，取出放涼。每100 g五味子種子，用煉蜜10 g。

2.2 供試品溶液制備 取生品及各炮制品若干，粉碎，過10目篩，精密稱取樣品粉末1 g，置于50 mL量瓶中，加甲醇40 mL，靜止過夜，超聲提取20 min 2次，定容至刻度，搖勻，0.45 μm濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.3 色譜條件 色譜柱:hypersil ODS2色譜柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流動(dòng)相:(A)乙腈-(B)水;檢測(cè)波長:225 nm;流速:1 mL/min，柱溫:25℃;進(jìn)樣量:20 μL。

表1 梯度洗脫條件Table 1 Gradient elution conditions

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取1.0 mg五味子醇甲、醇乙、甲素、乙素對(duì)照品，用甲醇定容至10 mL量瓶中。進(jìn)樣 2.5、5、7.5、10、15、20 μL，以對(duì)照品進(jìn)樣量 (Y，μg)為縱坐標(biāo)，相應(yīng)的色譜峰面積(X)為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得五味子木脂素醇甲、醇乙、甲素、乙素的回歸方程分別為:Y=0.004 374X+0.037 075，r:1;Y=0.004 755X－ 0.053 86，r:0.999 9;Y=0.003 922X+0.024 132，r:0.999 9;Y=0.004 725X+0.028 153，r:1。

2.5 樣品含量測(cè)定 分別精密吸取供試品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，得相應(yīng)色譜峰面積，代入回歸方程，計(jì)算相應(yīng)木脂素含量。

2.6 炮制對(duì)五味子木脂素溶出率的影響［6］取各炮制方法制備五味子及生品12.5 g，加水250 mL，浸泡1 h，煎煮保持微沸1 h，取出殘?jiān)?0℃烘干，稱重。按照上述方法測(cè)定殘?jiān)形逦蹲哟技?、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素含量?/p>

3 結(jié)果與討論

4種木脂素對(duì)照品、北五味子果和種子生品及其炮制品的HPLC譜圖見圖1，主要木脂素類成分的含量和溶出率測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 不同炮制品木脂素類成分含量及溶出率Table 2 The contents and solubility of lignan compounds in different processed products

圖1 北五味子不同炮制品高效液相色譜圖1.五味子醇甲 2.五味子醇乙 3.五味子甲素 4.五味子乙素Fig.1 The HPLC chromatograms of different processed products of Schisandra chinensis1.schizandrin 2.schisandrol B 3.deoxyschizandrin 4.γ-schizandrin

北五味子經(jīng)不同方法炮制后，并沒有新成分產(chǎn)生，只是木脂素類成分含量和溶出率有不同程度的變化:

各五味子種子炮制品木脂素類成分含量及溶出率均較生品中低。由此推論五味子在炮制過程中木質(zhì)素類成分有小量蒸出，后在蒸制水中檢測(cè)到相應(yīng)木質(zhì)素類成分證明這一點(diǎn);此外，炮制不利于五味子種子中木脂素類成分溶出，與前人推測(cè)“五味子經(jīng)炮制后種皮變脆或破裂，易于五味子木脂素溶出”［7］不相一致。

蜜五味子和酒五味子木脂素類成分及溶出率有不同程度的提高，可能由于輔料的加入破壞了五味子果中易升華或易揮發(fā)成分組成，從而減少了木質(zhì)素蒸出動(dòng)力，也可能五味子果中某類成分或其他木質(zhì)素類成分在蜜和酒的作用下向試驗(yàn)測(cè)定木脂素轉(zhuǎn)化，其變化機(jī)制來源于加熱過程中輔料與果肉的作用，使傳統(tǒng)炮制理論“入補(bǔ)藥熟用”有了一定科學(xué)依據(jù)。

在醋五味子中，除五味子乙素含量稍有增加，其他木脂素類成分含量及溶出率均有減小，而不同炮制品中以醋五味子的抗脂質(zhì)過氧化及提高免疫作用最為明顯［8］，可能其功效體現(xiàn)在本試驗(yàn)未測(cè)定木脂素類成分的變化［9］。

4 結(jié)論

中藥的化學(xué)成分是其發(fā)揮藥效作用的基礎(chǔ)，經(jīng)過炮制，由于受到加熱及輔料處理，使中藥的化學(xué)成分發(fā)生一系列變化，有的可能是量變，也可能是質(zhì)變，本研究中雖未發(fā)現(xiàn)新成分生成，但酒五味子、蜜五味子木脂素類成分含量及溶出率的增加，可能是炮制后五味子滋補(bǔ)作用增強(qiáng)的原因之一，為傳統(tǒng)中藥炮制理論提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

［1］中國藥典［S］.一部.2005:105.

［2］陳業(yè)高.三種五味子科植物化學(xué)成分的研究［D］.中國科學(xué)院仁海藥物研究所，1988:5.

［3］鄧寒霜，李筱玲，王新軍，等.南五味子炮制標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.甘肅科學(xué)學(xué)報(bào)，2008，20(1):65-68.

［4］張 虹，王春秋.五味子的炮制源流及演變［J］.河南中醫(yī)，2002，22(5):86.

［5］葉定江，張世臣.中藥炮制學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1999:528.

［6］李英華.生脈飲中5-HMF來源機(jī)制及炮制對(duì)五味子中化學(xué)成分影響的研究［D］.杭州:浙江大學(xué)，2006:107-108.

［7］葛會(huì)奇.五味子炮制工藝規(guī)范化及原理研究［D］.沈陽:遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，2007:91.

［8］陸兔林，殷放宙，何箐旋，等.炮制對(duì)五味子藥理作用的影響［J］.中藥材，2005，28(10):933-935.

［9］彭修娟，楊新杰，馮改莉.五味子炮制研究進(jìn)展［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2009，5(5):127.