單會嬌， 張建逵， 許 亮， 韓榮春， 徐保利， 王 冰

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧大連 116600)

龍葵是茄科植物龍葵Solanum nigrumL.的干燥地上部分，曾被1977年版《中國藥典》收載。龍葵性寒、味苦、微甘、有小毒，有清熱解毒、消腫散結(jié)、消炎利尿等功效［1］。龍葵不僅在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)上有著廣泛應(yīng)用，在現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)上也有很多新用途［2-5］。龍葵具有很好的抗腫瘤活性，其中的藥理活性物質(zhì)是甾體生物堿類成分，主要包括澳洲茄堿(solasonine)、澳洲茄邊堿(solamargine)等，研究表明澳洲茄堿在體外抗腫瘤實驗中表現(xiàn)出很好的抗腫瘤活性［6］。但目前對于澳洲茄堿含量測定方面的文獻較少［7-8］。本實驗旨在對來自10個省市、24個產(chǎn)地不同生境、生長周期的龍葵中的澳洲茄堿進行分析，以便更好的控制龍葵藥材的來源及最佳采收期，為龍葵藥材的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 材料與試藥

1.1 儀器

Agilent1100高效液相色譜儀(美國Agilent公司)，包括四元泵，柱溫箱，紫外檢測器及chem station色譜工作站，KQ3200B型超聲波清洗儀(昆山超聲儀器有限公司)，Sartorrius BP211D型電子分析天平。

1.2 材料

龍葵采自10個省市、24個產(chǎn)地，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物教研室王冰教授鑒定為茄科茄屬龍葵Solanum nigrumL.。粉碎，過60目篩，具體見表1。

表1龍葵藥材來源一覽表

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent TC-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm);流動相:乙腈(A)，0.5%磷酸溶液(B)，梯度洗脫條件為:0～7 min，A:22%，B:78%;7～20 min;A:22% ～25%，B:78% ～75%;體積流量:0.9 mL/min;柱溫:30℃;進樣量為:20 μL;檢測波長:203 nm。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取澳洲茄堿對照品10.46 mg，置于10 mL量瓶中，用色譜甲醇溶解至刻度，搖勻，制成1.046 mg/mL的對照品溶液作為貯備液。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取龍葵藥材粉末2.0 g置于50 mL具塞錐形瓶中，加入10倍體積的60%乙醇溶液，60℃下超聲提取2次，每次30 min，濾過，合并濾液，濾液水浴加熱，濃縮至近干，用60%乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品液。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗

精密吸取供試品溶液20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以澳洲茄堿計算，理論塔板數(shù)不低于5 000。如圖1。

圖1 澳洲茄堿HPLC圖

2.5 線性關(guān)系考察

精密吸取對照品貯備液5 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，得濃度為0.523 mg/mL的對照品溶液，分別吸取濃度為0.523 mg/mL的對照品 0.5、1、2、4、6、8、10、15、20 μL，以及對照品貯備液15 μL，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以含量(μg)為坐標(biāo)(X)，以峰面積為坐標(biāo)(Y)，進行線性回歸，得回歸方程:Y=263.81X－14.82，r=0.999 6，表明澳洲茄堿在0.261 5～10.46 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗

取濃度為0.523 mg/mL的對照品溶液，連續(xù)進樣6次，每次10 μL，記錄峰面積，RSD為1.94%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗

精密稱取編號為1的藥材粉末2.0 g，按供試品制備方法，平行制備6份，進行測定，計算各澳洲茄堿含量，算得RSD為1.96%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

取編號為1的供試品制備液，分別于0、2、4、8、16、24、48 h后進行測定，記錄峰面積，算得RSD為1.43%，結(jié)果表明該樣品在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗

精密稱取已知含量的的藥材粉末(編號為1)6份，每份1.0 g，置于50 mL具塞錐形瓶中，再精密加入澳洲茄堿對照品溶液(0.523 mg/mL)1 mL，按供試品制備方法，平行制備，測定含量，平均加樣回收率為100.14%，RSD為1.38%。

2.10 測定結(jié)果

精密稱取不同產(chǎn)地、生境及不同生長周期的龍葵藥材粉末(過60目篩)2.0 g，按供試品制備項下的方法制備，進樣20 μL，測定色譜峰面積，按外標(biāo)兩點法計算龍葵中澳洲茄堿的含量。具體見表2。

3 討論與結(jié)論

本實驗對來自10個省市、24個產(chǎn)地不同生境及不同生長周期的龍葵中澳洲茄堿的含量進行測定，結(jié)果表明龍葵藥材中澳洲茄堿含量因產(chǎn)地、生境及生長周期不同差異很大。

3.1 產(chǎn)地比較 遼西地區(qū)所產(chǎn)龍葵中的澳洲茄堿含量較高，可能是因為當(dāng)?shù)乇容^干旱引起的［9］。

3.2 生境比較 在不同生境下的龍葵藥材中，以田間的龍葵，澳洲茄堿含量較高，可能是由于農(nóng)田中常常施加氮肥，有利于澳洲茄堿的合成。另外，馬鈴薯地中的龍葵，澳洲茄堿含量最高，可能由于馬鈴薯也為茄科植物，對于龍葵中的某些成分的積累有一定的協(xié)同作用，但仍有待進一步研究。

3.3 生長周期比較 苗期、花期、成熟后期以及摘除龍葵果實的龍葵地上部分澳洲茄堿的含量極低，甚至未檢出，而以盛果期及始熟期的龍葵地上部分澳洲茄堿含量較高，其次為成熟期，由此推斷出，澳洲茄堿主要存在于龍葵果實中，與文獻報道［8，10-11］相符，同時與1977年版《中國藥典》規(guī)定的“帶果者為佳”一致。

表2 龍葵藥材中澳洲茄堿含量(n=3)

［1］中國藥典［S］.一部，1977:154.

［2］鄭虎占，董澤宏，佘 靖主編.中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用［M］.北京:學(xué)苑出版社，1997:1388-1392.

［3］向大斌.土家藥龍葵外敷治療眼瞼帶狀皰疹［J］.中國民族醫(yī)藥雜志，2004，2:42.

［4］顧錦華，張 偉，李 鋒，等.復(fù)方龍葵膠囊抗腫瘤作用及其對腫瘤細胞周期分布的影響［J］.時珍國醫(yī)國藥，2006，17(12):2463-2464.

［5］王 蔚，陸道培.龍葵總提取物對多發(fā)性骨髓瘤U 266細胞株的作用［J］.北京大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版，2005，37(3):2402-2441.

［6］羅文娟，王光輝，周新蘭，等.螺甾皂苷類化合物的體外抗人肝細胞增殖作用［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2007，15(3):307-308.

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［8］李明慧，丁 岡，孟兆青，等.龍葵藥材中澳洲茄堿、澳洲茄邊堿的含量測定［J］.中國天然藥物，2007，5(5):360-362.

［9］黃璐奇，郭蘭萍.環(huán)境脅迫下次生代謝產(chǎn)物的積累及道地藥材的形成［J］.中國中藥雜志，2007，32(4):277-280.

［10］袁海建，賈曉斌，陳 彥，等.不同產(chǎn)地龍葵中澳洲茄堿的分析研究［J］.中草藥，2008，39(5):772-774.

［11］楊 輝，陳曉青，趙 宇，等.龍葵甾體類生物堿的表征、及其在該植物體內(nèi)的形成、變化［J］.精細化工，2006，23(4):358-361.