董立新，李向春，董淑芬，付占昭

(1秦皇島市第一醫(yī)院，河北秦皇島066000;2昌黎縣醫(yī)院)

本文通過MTT法檢測(cè)分別加入環(huán)磷酰胺(CTX)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、平陽霉素(PYM)、紫杉醇(PTX)、順鉑(CDDP)5種化療藥物后的23例口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞樣本的活細(xì)胞數(shù)，并通過與空白對(duì)照組比較得出5種化療藥物對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的體外抑制率來反映5種化療藥物的抗腫瘤活性，并簡要復(fù)習(xí)5種藥物的作用機(jī)制，希望對(duì)口腔頜面部鱗狀細(xì)胞癌化療方案的制定有所幫助。

1 材料與方法

1.1 材料 23例口腔頜面部惡性腫瘤組織新鮮標(biāo)本均來自秦皇島市第一醫(yī)院口腔科2009年9月～2010年10月手術(shù)和活檢組織標(biāo)本，所有病例經(jīng)病理診斷證實(shí)為鱗狀細(xì)胞癌。取材部位:舌7例、牙齦7例、頰6例、口底2例、唇1例。腫瘤細(xì)胞抑制率檢測(cè)選用藥物:CTX、5-FU、PYM、PTX、CDDP。試劑:MTT為美國Sigma公司產(chǎn)品，RPMI 1640培養(yǎng)基和胰蛋白酶為美國Gibco公司產(chǎn)品，胎牛血清為杭州四季青生物工程材料公司產(chǎn)品。

1.2 MTT法檢測(cè) 腫瘤細(xì)胞抑制率的MTT檢測(cè)方法參考周曉健等［1］方法并依據(jù)我處實(shí)驗(yàn)條件做出相應(yīng)修改:①腫瘤組織標(biāo)本用GKN液沖洗2～3次，去除血塊及壞死組織，以胰蛋白酶2 mg/ml消化40 min，200目濾網(wǎng)收集細(xì)胞入10 ml GKN液，加于離心管中1 000 r/min離心7 min，棄上清，細(xì)胞混懸于適量RPMI 1640培養(yǎng)基(含15%胎牛血清)中，調(diào)細(xì)胞數(shù)為5×106/ml;②細(xì)胞培養(yǎng)板及培養(yǎng)基預(yù)溫至37℃;③每孔加細(xì)胞懸液200μl，每4孔為1組，設(shè)實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組，輕微振蕩混勻;④培養(yǎng)板置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，各孔加入抗腫瘤藥物(CTX:120μg/ml;5-FU 40 μg/ml;PYM:1.28 μg/ml;PTX:11.6 μg/ml;CDDP 12.6μg/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)48 h;⑤每孔加入MTT(5 mg/ml)20μl，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4 h以上;⑥離心(1 000 r/min)，棄上清，每孔加入DMSO 100 μl，終止反應(yīng);⑦ST-360型酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔在450 nm下的OD值;⑧腫瘤細(xì)胞生長抑制率計(jì)算公式:腫瘤細(xì)胞抑制率=(1－A/B)×100%，A為給藥孔平均OD值，B為對(duì)照孔平均OD值;⑨藥物敏感性判斷標(biāo)準(zhǔn):高度敏感，細(xì)胞生長抑制率≥50%;敏感，細(xì)胞生長抑制率≥30%;不敏感，細(xì)胞生長抑制率﹤30%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以±s表示，各藥物間差別顯著性應(yīng)用多個(gè)獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)法檢驗(yàn)。以P≤0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

各種化療藥物對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞抑制率及敏感程度情況見表1。由表1可見，本實(shí)驗(yàn)23例口腔鱗狀細(xì)胞癌組織樣本經(jīng)藥物敏感試驗(yàn)后測(cè)得各藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制率以PTX為最高，P＜0.05。

表1 5種抗腫瘤藥物對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞抑制率極敏感程度比較

3 討論

口腔鱗狀細(xì)胞癌是口腔頜面部常見的惡性腫瘤，采用手術(shù)為主的綜合治療已為人們廣泛接受，如何選擇對(duì)腫瘤敏感的抗腫瘤藥物是臨床工作中研究的重點(diǎn)。目前應(yīng)用于口腔頜面部惡性腫瘤治療的藥物主要有 CTX、5-FU、PYM、PTX、CDDP，其作用機(jī)制各不相同［2～4］。

由于腫瘤在個(gè)體的差異性，相同組織類型、同樣臨床階段的惡性腫瘤，對(duì)于不同的患者，即使用同一化療藥物，同樣治療方案，其療效常不一致［5］。因此在為患者進(jìn)行化療前有必要進(jìn)行針對(duì)患者腫瘤的化療藥物敏感性測(cè)定，以實(shí)現(xiàn)化療的個(gè)體化。MTT法則是目前臨床上常用的化療藥物敏感性測(cè)定方法［6］。本研究通過MTT法檢測(cè)5種化療藥物針對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的抑制率反映藥物的敏感性，結(jié)果表明PTX對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的抑制效果較強(qiáng)，CTX、5-FU、PYM、CDDP間無差異，隨著 PTX在抗腫瘤臨床治療中的應(yīng)用逐漸廣泛，可通過更廣泛的臨床觀察確證PTX對(duì)口腔癌的治療效果。

［1］周曉健，陳萬濤，林李嵩，等.口腔頜面部惡性腫瘤化療藥物敏感性臨床分析［J］.口腔頜面外科雜志，2000，10(2):134-137.

［2］黃峻，皇祖珊.臨床藥物手冊(cè)［M］.4版.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2008:149.

［3］林毅，歐子民，鄺海.應(yīng)用甲酰四氫葉酸鈣使5-FU增效的舌癌化療［J］.臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志，1999，15(12):79.

［4］李雅東.口腔頜面部惡性腫瘤化療藥物現(xiàn)狀［J］.天津醫(yī)藥，2002，14(3):22-23.

［5］邱春元.張嘉慶.化療藥物敏感性測(cè)定方法近況［J］.中國腫瘤臨床，1991，18(5):368-372.

［6］鄭順友，朱翌，丁熙，等.口腔癌中HSP-70表達(dá)和體外藥物敏感試驗(yàn)的關(guān)系［J］.實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志，2006，22(16):1839-1841.