文 宏，李醒三，曾曉聰

(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南寧530021)

特發(fā)性肺動脈高壓(IPAH)是一種進(jìn)展迅速且預(yù)后極差的疾病，即使給予最積極有效的治療，5年生存率僅50% ～60%［1］。目前病因及發(fā)病機(jī)制仍尚未闡明。研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)分泌因子ET/NO失衡是其重要的病理過程;炎癥在肺動脈高壓的發(fā)展過程中也可能起重要作用［2］。本實驗擬通過野百合堿(MCT)復(fù)制肺動脈高壓模型，外源性纈沙坦干預(yù)，觀察能否改善ET/NO失衡狀態(tài)從而降低肺高壓模型的肺動脈壓。

1 材料與方法

1.1 動物 健康成年雄性Wistar大鼠30只，體質(zhì)量200～220 g，由廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。

1.2 藥物、試劑及儀器 纈沙坦(瑞士諾華公司，商品名代文);MCT(Sigma公司);SPACE LABS 90369型心電監(jiān)護(hù)系統(tǒng)(美國);CRP酶聯(lián)試劑盒(武漢博士德生物制品有限公司);ET-1試劑盒(北京東亞放免研究所);NO試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.3 肺動脈高壓大鼠模型的建立及動物分組 參照Hayashi等方法建立肺動脈高壓大鼠模型，隨機(jī)分為單純肺動脈高壓模型組(M組)、纈沙坦干預(yù)組(V組)及正常對照組(C組)，每組10只。將MCT結(jié)晶以生理鹽水配成2%的溶液，M組和V組分別一次性項背部皮下注射MCT 60 mg/kg;C組以等量生理鹽水一次性項背部皮下注射;3組動物均同等條件下自由飲水、攝食4周后，V組以纈沙坦20mg/(kg·d)灌胃;其余仍與C、M組同等條件下繼續(xù)飼養(yǎng)，4周后達(dá)實驗終點。

1.4 大鼠肺動脈平均壓(mPAP)測定和右室肥大指數(shù)的計算 參照孫波等的方法測定血流動力學(xué)指標(biāo)，腹腔內(nèi)注射2%戊巴比妥鈉40 mg/kg麻醉后，仰臥固定，頸正中切口，分離右頸外靜脈，將一肝素化的微導(dǎo)管自右頸外靜脈插管達(dá)肺動脈;微導(dǎo)管另一端接壓力換能器并與SPACE LABS 90369型心電監(jiān)護(hù)系統(tǒng)相連，據(jù)其壓力波形記錄mPAP。放血處死動物，取出心臟。剪除心房，分別游離右心室(RV)及左室加室間隔(LV+S)，濾紙吸水后分別稱重。以右室肥大指數(shù)［RV/(LV+S)］來反映右室的重量變化。

1.5 血漿 CRP、ET-1、NO的檢測 在進(jìn)行完血流動力學(xué)檢測后，抽取其肺動脈血4 ml，4℃ 3 000 r/min離心10min，取上清液，于－70℃冰箱中保存?zhèn)溆?。CRP用酶聯(lián)吸附反應(yīng)法測定;ET-1采用放射免疫法測定;NO采用硝酸還原酶法測定，通過測定亞硝酸鹽/硝酸鹽濃度間接反映NO含量。均嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，數(shù)據(jù)以±s表示，采用方差分析檢驗，3組間的總體差異、兩組間差異比較采用q檢驗，以P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 mPAP與RV/(LV+S)比較 見表1。

表1 3組大鼠m PAP、右室肥大指數(shù)的比較(±s)

表1 3組大鼠m PAP、右室肥大指數(shù)的比較(±s)

注:與 M 組比較，*P ＜0.05，△P ＜0.01

組別 n mPAP(mmHg) RV/(LV+S)(%)C 組 10 14.20 ±2.57△ 23.40 ±5.30△M 組 10 32.90 ±5.15 44.10 ±5.93 V 組 10 27.60 ±4.88* 37.80 ±4.44*

2.2 血漿中CRP、ET-1和NO含量變化 見表2。

表2 3 組大鼠 CRP、ET-1、NO 含量的變化(±s)

表2 3 組大鼠 CRP、ET-1、NO 含量的變化(±s)

注:與 M 組比較，*P ＜0.05，△P ＜0.01

組別 n CRP(mg/L) ET-1(pg/ml) NO(μmol/L)C 組 10 12.30 ±0.87△ 48.93 ±7.21△ 136.80 ±45.20△M 組 10 22.60 ±1.03 120.30 ±15.64 72.16 ±12.42 V 組 10 19.70 ±0.96* 94.58 ±9.38* 102.60 ±24.90*

3 討論

MCT是豆科植物野百合中提取的雙吡咯生物堿，在體內(nèi)經(jīng)肝臟轉(zhuǎn)化為吡咯野百合堿，能選擇性的作用于肺血管內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、壞死、脫落，原位血栓形成，內(nèi)皮下平滑肌增殖、遷移，導(dǎo)致肺動脈結(jié)構(gòu)性重建，最終引起肺動脈高壓，是目前國際上公認(rèn)的復(fù)制肺高壓模型之一。本實驗研究證實M組mPAP高于V組、C組，經(jīng)纈沙坦干預(yù)后V組mPAP有所降低。目前研究認(rèn)為，肺動脈高壓的發(fā)生涉及細(xì)胞、體液介質(zhì)和分子遺傳等多個方面。血管收縮、血管重構(gòu)和原位血栓是肺動脈高壓發(fā)生、發(fā)展的重要病理生理基礎(chǔ)［3］。本實驗發(fā)現(xiàn)M組CRP高于其他兩組，說明炎癥反應(yīng)在肺高壓的產(chǎn)生和形成過程中扮演了重要的角色，與文獻(xiàn)報道一致［4］。經(jīng)過纈沙坦干預(yù)后，CRP水平下降。同時，作為重要的神經(jīng)體液調(diào)節(jié)機(jī)制，ET/NO的失衡可能是肺高壓的病理基礎(chǔ)之一，經(jīng)過纈沙坦干預(yù)后ET/NO失衡亦有所改善。

纈沙坦為選擇性AT1受體拮抗劑，通過與AT1受體選擇性結(jié)合，從而減少AngⅡ?qū)?nèi)皮細(xì)胞的刺激，使ET排泄增加，改善內(nèi)皮功能，并切斷AngⅡ與ET的正反饋機(jī)制，同時刺激AngⅡ與AT2受體結(jié)合，使內(nèi)皮細(xì)胞合成NO增加，發(fā)揮其擴(kuò)張肺血管作用，從而降低肺動脈壓力;抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖、遷移;阻斷AngⅡ促進(jìn)鈣內(nèi)流的作用，減輕內(nèi)皮細(xì)胞的鈣超負(fù)荷，使內(nèi)皮功能失調(diào)得以糾正等機(jī)制達(dá)到對血管內(nèi)皮功能的保護(hù)作用［5］。此外，纈沙坦通過阻斷血小板中的AngⅡ，對血小板聚集和血小板主要受體有持久的抑制作用，且其抗血小板的特性并不依賴于用藥劑量和療程［6］。從而抑制血小板的活化反應(yīng)，改善纖溶功能，抑制血栓形成。

本研究結(jié)果顯示，經(jīng)過纈沙坦干預(yù)后，可有效降低MCT性肺高壓大鼠的肺動脈壓，降低CRP等炎性指標(biāo)水平［7］，改善ET/NO失衡狀態(tài)，上述結(jié)果可能與其阻斷AngⅡ與內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)合，從而產(chǎn)生獨(dú)特的內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)功能有關(guān)。

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