崔 麗（南京市紅十字醫(yī)院藥劑科，南京市 210001）

復(fù)方間苯二酚洗劑是《中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范》第2版中收載的皮膚科外用制劑，具有殺霉菌作用，臨床上用于治療霉菌性皮膚病，如手足癬、體癬、股癬等。本制劑中間苯二酚、苯酚含量測(cè)定的方法有二階導(dǎo)數(shù)紫外光譜法[1]、雙波長(zhǎng)線性回歸光度法[2]、系數(shù)倍率法[3]和《中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范》中規(guī)定采用的溴量法[4]。采用上述方法測(cè)定時(shí)，操作煩瑣，不能達(dá)到快速檢驗(yàn)的目的，且溴量法只能測(cè)定2組分的總量，不能測(cè)定2組分各自的量。為更好地控制該制劑的質(zhì)量，保證臨床用藥安全，筆者建立反相高效液相色譜（RP-HPLC）法，以同時(shí)測(cè)定制劑中間苯二酚和苯酚的含量。結(jié)果表明，所建立的方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

LC-20AT HPLC儀、SPD-20A紫外檢測(cè)器（日本島津公司）；BS 210s電子天平（北京賽多利斯有限公司）。

復(fù)方間苯二酚洗劑（自制，批號(hào)：100402、100511、100604，規(guī)格：每瓶100 mL，其中間苯二酚含量：100 mg·mL－1，苯酚含量：37.49 mg·mL－1）；間苯二酚、苯酚標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100509-200401、100106-200303，供含量測(cè)定用）；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Hedera ODS-2（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（65∶35）；檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：25 ℃ ；進(jìn)樣量：20 μL；靈敏度：0.02AUFS。

取“2.2”項(xiàng)下混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各20μL進(jìn)樣，記錄色譜，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.混合標(biāo)準(zhǔn)品；B.供試品；C.陰性對(duì)照；1.間苯二酚；2.苯酚Fig 1 HPLC chromatogramsA.mixed standard substance；B.test sample；C.negative control；1.resorcinol；2.phenol

圖1結(jié)果表明，陰性對(duì)照樣品對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

取“2.2.2”項(xiàng)下混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液20μL，按選定的色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，色譜參數(shù)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 色譜參數(shù)結(jié)果Tab 1 Results of chromatographic parameter

由表1可見(jiàn)，各參數(shù)均符合要求。

2.2 溶液制備

2.2.1 供試品溶液。精密量取1 mL樣品，置于100 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。精密量取稀釋液1 mL，置于10 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別精密稱(chēng)取間苯二酚、苯酚標(biāo)準(zhǔn)品10、3.75 mg，同置于100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，制成每1 mL中含間苯二酚0.1 mg、苯酚0.0375 mg的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液。按處方比例制備不含間苯二酚、苯酚的陰性樣品，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

（1）間苯二酚：精密稱(chēng)取間苯二酚標(biāo)準(zhǔn)品50 mg，置于100 mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，制成每1 mL含間苯二酚0.5 mg的貯備液。精密量取該液1.0、2.5、5.0、10、20 mL，分別置于50 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，混勻。每份進(jìn)樣3次，在上述色譜條件下分析。以峰面積（Y）與其對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度（X）進(jìn)行回歸分析，得回歸方程：Y＝18650X－3213.6（r＝0.9999），即間苯二酚檢測(cè)濃度線性范圍為10～200 μg·mL－1。

（2）苯酚：精密稱(chēng)取苯酚標(biāo)準(zhǔn)品100 mg，置于100 mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，制成每1 mL含苯酚1 mg的貯備液。精密量取該液1.0、2.5、5.0、10、20 mL，分別置于100 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，混勻。每份進(jìn)樣3次，在上述色譜條件下分析。以峰面積（Y）與質(zhì)量濃度（X）進(jìn)行回歸分析，得回歸方程：Y＝19863X－16178（r＝0.9999），即苯酚的檢測(cè)濃度線性范圍為10～200μg·mL－1。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)（100402）樣品6份，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，間苯二酚標(biāo)示量為100.1%（RSD＝0.78%）、苯酚標(biāo)示量為101.0%（RSD＝0.56%）。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.4”項(xiàng)下的溶液在室溫放置1、2、3、4、5、6 h時(shí)測(cè)定峰面積，計(jì)算RSD。結(jié)果，間苯二酚平均峰面積1712468，RSD＝0.31%（n＝6），苯酚平均峰面積852097，RSD＝0.45%（n＝6），表明供試品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收率試驗(yàn)方法。精密量取已知含量的樣品（間苯二酚0.1 mg·mL－1、苯酚0.0375 mg·mL－1）2.5 mL，各6份，置于50 mL容量瓶中，分別精密加入“2.3”項(xiàng)下間苯二酚貯備液2.5、5.0、10 mL和苯酚貯備液1.25、2.5、5 mL，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，測(cè)定峰面積?；厥章试囼?yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 2 Results of recovery tests

2.7 樣品含量測(cè)定

取樣品3批，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別取供試品溶液及“2.2.2”項(xiàng)下的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液各20μL，進(jìn)樣測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）Tab 3 Results of content determination of samples（n＝3）

3 討論

在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)間苯二酚、苯酚標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行紫外光譜掃描，結(jié)果，間苯二酚在274 nm波長(zhǎng)處具有最大吸收峰，苯酚在270 nm波長(zhǎng)處具有最大吸收峰，兩者最大吸收波長(zhǎng)相差4 nm，絕大部分吸收光譜都重疊在一起，相互干擾無(wú)法進(jìn)行定量分析。因此，本文采用RP-HPLC法，選擇甲醇-水系統(tǒng)作為流動(dòng)相，并考察了該系統(tǒng)中甲醇不同加入量對(duì)間苯二酚和苯酚保留時(shí)間和色譜分離的影響。結(jié)果顯示，甲醇比例增大，被測(cè)組分保留時(shí)間隨之縮短。為保證間苯二酚和苯酚完全分離，同時(shí)又盡量縮短一次進(jìn)樣的分析時(shí)間，達(dá)到同時(shí)測(cè)定的目的，最后確定流動(dòng)相最佳配比為甲醇-水（65∶35）。

由于本制劑中的主藥成分間苯二酚、苯酚在光照條件下不穩(wěn)定，易氧化成醌類(lèi)而影響測(cè)定，故該制劑的含量測(cè)定應(yīng)在避光條件下進(jìn)行，比如用黑紙包裹容量瓶測(cè)定，這樣待測(cè)溶液穩(wěn)定性會(huì)更好。

[1]熊?chē)?guó)營(yíng).二階導(dǎo)數(shù)紫外光譜法測(cè)定復(fù)方間苯二酚洗劑中苯酚及間苯二酚的含量[J].中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2008，11（6）：1333.

[2]張 群，占 峰，開(kāi)小明.雙波長(zhǎng)線性回歸光度法同時(shí)測(cè)定苯酚和間苯二酚[J].光譜學(xué)與光譜分析，2006，26（11）：2110.

[3]洪慧豐，李安華.系數(shù)倍率法測(cè)定復(fù)方間苯二酚涂劑中二組分的含量[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2003，20（1）：63.

[4]衛(wèi)生部藥政局.中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范[S].第2版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1995：100.