丁夢(mèng)影 段曉輝 秦 燕 鄭暇暉 劉 蛟 江益婷 羅玉琴

大理學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 1 2006級(jí)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)本科2班 2 生理與病理生理學(xué)教研室,云南省大理州 671000

自由基產(chǎn)生增多及其誘導(dǎo)的氧化反應(yīng)損傷是引起生物衰老的重要原因。提高自由基的清除能力對(duì)抗衰老具有很重要的意義?，F(xiàn)代研究表明,花生殼中除含有大量的碳水化合物和粗纖維外,還含有多酚類、黃酮類物質(zhì)以及β2谷甾醇等甾體化合物?；ㄉ鷼ぶ幸阅鞠菟貫榇淼狞S酮類成分除能降血壓、降血脂、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈等作用外,還具有抗氧化、鎮(zhèn)咳、平喘、增強(qiáng)免疫和抗腫瘤等藥理活性[1,2],但其對(duì)衰老的作用卻未見(jiàn)報(bào)道。故本研究通過(guò)復(fù)制亞急性衰老小鼠模型,探討花生殼提取液的抗衰老活性,為花生殼的開(kāi)發(fā)利用提供一定的思路。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 花生殼購(gòu)自云南省大理州賓川縣。在大理學(xué)院藥學(xué)院有機(jī)實(shí)驗(yàn)室提純?yōu)榻嗪笈渲茷?5mg/ml濃度的溶液(黃酮含量為0.34mg/ml)。超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒,丙二醛(MDA)試劑盒,考馬斯亮藍(lán)試劑盒均購(gòu)自南京建成科技有限公司,D-半乳糖購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 3～4月齡的昆明小鼠30只,分籠飼養(yǎng)于大理學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心動(dòng)物房。青年對(duì)照組進(jìn)行正常飼養(yǎng);模型組給予每天1次皮下注射5%D-半乳糖(0.25ml/10g)及生理鹽水0.5ml灌胃;花生殼提取液組每天定時(shí)行皮下注射5%D-半乳糖(0.25ml/10g)及花生殼提取液0.15ml/10g灌胃。8周后斷頭取血、分離血清,制備肝組織、腦組織勻漿,測(cè)定SOD和MDA含量;蛋白質(zhì)含量采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定,具體操作均按測(cè)試盒所附方法、步驟進(jìn)行;計(jì)算脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù),指數(shù)計(jì)算采用如下公式:小鼠胸腺指數(shù)=胸腺重量(mg)/體重(g);小鼠脾臟指數(shù)=脾臟重量(mg)/體重(g)。

1.3 主要儀器 SHB-ⅢT循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司生產(chǎn));RE-52-05旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠生產(chǎn));JY88-Ⅱ超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)(寧波新芝科器研究所生產(chǎn));18R冷凍高速離心機(jī) TG L-18R(珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司生產(chǎn));電子分析天平CVA214C(奧豪斯儀器上海有限公司生產(chǎn));電子制冰機(jī)Barline BF320(斯科茨曼制冰系統(tǒng)上海有限公司生產(chǎn))。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)免疫器官體質(zhì)量指數(shù)的影響 觀察胸腺、脾臟的臟器指數(shù),臟器指數(shù)即臟器與體質(zhì)量之比=內(nèi)臟質(zhì)量(mg)/體質(zhì)量(g)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析后可知,花生殼提取液組的胸腺、脾臟指數(shù)比青年組的低,但是明顯高于衰老模型組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),見(jiàn)表1。

表1 各組小鼠免疫器官臟器指數(shù)的變化(,mg?g-1)

表1 各組小鼠免疫器官臟器指數(shù)的變化(,mg?g-1)

注:與青年對(duì)照組比較,△P＜0.01;與衰老模型組比較,*P＜0.01。

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2.2 血清、肝組織和腦組織MDA含量的變化 由表2可見(jiàn),衰老模型組血清、肝組織及腦組織MDA含量均顯著高于青年對(duì)照組(P＜0.01),與模型組相比,花生殼提取液干預(yù)組小鼠的血清、肝組織及腦組織MDA含量則顯著降低,差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

表2 各組小鼠血清、肝組織和腦組織丙二醛(M DA)含量的變化(,nmol/mg)

表2 各組小鼠血清、肝組織和腦組織丙二醛(M DA)含量的變化(,nmol/mg)

注:與青年對(duì)照組比較,△P＜0.01;與衰老模型組比較,*P＜0.01。

組別 n 血清MDA 肝組織MDA 腦組織M DA青年對(duì)照組 10 3.35±1.08 3.92±1.04 17.47±2.31衰老模型組 10 4.04±0.48△ 12.71±3.92△ 24.20±6.18△花生殼液灌胃組 10 3.75±0.37* 8.76±2.12* 18.72±1.15*

2.3 血清、肝組織和腦組織SOD活力的變化 由表3可見(jiàn),衰老模型組的血清、肝組織及腦組織SOD活性均顯著降低,低于青年對(duì)照組(P＜0.01),而花生殼提取液干預(yù)組小鼠的血清SOD活性、肝組織及腦組織SOD活性則較衰老模型組升高(P＜0.01)。

表3 各組小鼠血清、肝組織和腦組織超氧化物歧化酶(SOD)含量的變化(,n=10)

表3 各組小鼠血清、肝組織和腦組織超氧化物歧化酶(SOD)含量的變化(,n=10)

注:與青年對(duì)照組比較,△P＜0.01;與衰老模型組比較,*P＜0.01。

組別 血清SOD(U/ml) 肝組織SOD(U/mg) 腦組織SOD(U/mg)青年對(duì)照組 221.84±23.06 345.0±86.38 217.33±11.93衰老模型組 117.40±11.64△ 257.34±34.86△ 172.16±22.33△花生殼液灌胃組 200.07±14.57* 273.79±32.50* 195.14±11.03*

3 討論

生物衰老是一個(gè)多因素、復(fù)雜的、綜合的生理變化過(guò)程。關(guān)于衰老的產(chǎn)生機(jī)制主要存在以下學(xué)說(shuō):自由基損傷學(xué)說(shuō)[2]、遺傳突變學(xué)說(shuō)[3]、端粒丟失學(xué)說(shuō)[4]、線粒體丟失學(xué)說(shuō)[5]、衰老的網(wǎng)絡(luò)學(xué)說(shuō)[6]等。目前被普遍認(rèn)可的是自由基損傷和端粒丟失學(xué)說(shuō)。作為人體正常代謝產(chǎn)物的自由基在正常情況下處于不斷的產(chǎn)生與消除的動(dòng)態(tài)平衡中,一旦數(shù)量過(guò)多會(huì)引起生物大分子如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸的損傷。因此減少自由基的產(chǎn)生和清除自由基在抗衰老方面具有重要意義。而研究表明花生殼中以木犀草素為代表的黃酮類成分除能降血壓、降血脂、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈等作用外,還具有抗氧化、增強(qiáng)免疫、抗腫瘤等藥理活性。本實(shí)驗(yàn)以D-半乳糖注射法建立亞急性衰老小鼠模型,用花生殼提取液灌胃干預(yù),研究結(jié)果顯示,皮下注射D-半乳糖的模型組小鼠血清、肝組織及腦組織SOD活性降低、MDA含量明顯上升,表明氧化損傷程度加重;與衰老模型組相比,經(jīng)過(guò)花生殼提取液灌胃干預(yù)的花生殼提取液組小鼠SOD活性升高、MDA含量明顯降低,表明花生殼提取液可能消除了機(jī)體一定量的氧自由基和抗脂質(zhì)氧化的作用,故干預(yù)后機(jī)體氧化損傷程度減輕,發(fā)揮了較好的抗衰老作用。

隨著機(jī)體年齡的增長(zhǎng),免疫功能也在不斷下降。胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)在一定程度上可間接反映機(jī)體衰老的狀況[7]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,衰老模型組小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均明顯低于青年對(duì)照組,兩者具有顯著的差異,而經(jīng)花生殼提取液連續(xù)灌胃后的小鼠,其胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)較衰老模型組增大,二者差異也較明顯,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),說(shuō)明花生殼提取液在一定程度上可延緩機(jī)體的衰老進(jìn)程。

綜上所述,花生殼提取液具有良好的抗氧化和抗衰老作用,其原因可能是花生殼提取液具有的良好的抗氧化作用有效清除了自由基,減輕了脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)所致的。

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