白雪松 蔡光先 尹天雷

(1遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，遼寧省沈陽(yáng)市皇姑區(qū)北陵大街33號(hào)，110032;2湖南省中醫(yī)藥研究院)

中風(fēng)是一種常見的臨床疾病。按照世界衛(wèi)生組織心血管病趨勢(shì)及其決定因素監(jiān)測(cè)方案(WHO-MONICA)進(jìn)行的心血管患者群監(jiān)測(cè)結(jié)果表明:我國(guó)各地人群腦卒中事件發(fā)病率及死亡率與國(guó)際相比屬較高水平［1］。近年來(lái)腦卒中發(fā)病率呈上升趨勢(shì)而死亡率卻呈下降趨勢(shì)［2］。測(cè)算結(jié)果顯示，25歲以上人群因腦血管疾病而損失的能力喪失調(diào)整生存年(DALYs)在2000年為12.51DALYs/千人口。在2000年，缺血性腦卒中的疾病經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)為126億元～196億元［3］。如何提高腦血管病在恢復(fù)期的治愈率，已成為國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)課題。補(bǔ)陽(yáng)還五湯出自清代王清任的《醫(yī)林改錯(cuò)》，是臨床治療中風(fēng)后遺癥的經(jīng)典方劑，有很好的療效，文獻(xiàn)報(bào)道總有效率為90%以上［4-7］，并能減少后遺癥的發(fā)生［8］。本實(shí)驗(yàn)綜合評(píng)價(jià)了動(dòng)物模型感覺、運(yùn)動(dòng)等多種神經(jīng)功能缺失恢復(fù)情況，并探討了補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)中風(fēng)后遺癥期神經(jīng)功能缺失的治療效應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物 處方由黃芪120g、當(dāng)歸尾6g、川芎3g、紅花 3g、赤芍 4.5g、桃仁 3g、地龍 3g組成，由湖南省超微工程技術(shù)中心提供，濃度為0.78g/mL。

1.2 實(shí)驗(yàn)器材與試劑 手術(shù)器材、電凝器(上海滬通電子有限公司，GD350-S1型)、水合氯醛(五聯(lián)化工廠提供，批號(hào):w20051122)、肝素鈉注射液(上海生物化學(xué)制藥廠提供，批號(hào):005006)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠，單一雄性，體重280±20g。由上海希普爾-必凱試驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供［許可證編號(hào):SCXK(滬)2003-0002］。

1.4 造模方法 大鼠以10%水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉。頸正中切口，分離暴露右頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈，頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)心端打一活結(jié)，于活結(jié)外凝斷，在頸外動(dòng)脈剪一小口，將栓線插入，向顱底輕輕推送，約21mm左右感覺到輕微阻力，再輕輕回抽約2mm左右，固定。缺血損傷后1h，將栓線抽回至頸外動(dòng)脈，形成缺血再灌注。動(dòng)物清醒24h后，以Zea Longa評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)［9］初步評(píng)價(jià)動(dòng)物造模情況，剔除0分和4分動(dòng)物。具體的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):0分，無(wú)神經(jīng)功能障礙;1分，左側(cè)前爪不能完全伸展，輕度神經(jīng)功能障礙;2分，行走時(shí)大鼠向左側(cè)(癱瘓側(cè))轉(zhuǎn)圈，中度神經(jīng)功能缺失;3分，行走時(shí)大鼠身體向左側(cè)(癱瘓側(cè))傾倒，重度神經(jīng)系統(tǒng)功能缺失;4分，不能自發(fā)行走，有意識(shí)喪失。

1.5 分組及給藥方法 術(shù)后Zea Longa評(píng)分剔除后，動(dòng)物存活超過(guò)14天者可納入實(shí)驗(yàn)，舍去狀態(tài)極差的動(dòng)物，最終納入大鼠20只，隨機(jī)分成模型組、補(bǔ)陽(yáng)還五湯組(以下簡(jiǎn)稱治療組)，每組10只。另取10只同批次的動(dòng)物作為空白對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分早晚2次給藥，藥物按人與動(dòng)物體表面積折算。治療組每只每次灌胃?jìng)鹘y(tǒng)煎劑2mL，相當(dāng)于成人每日劑量為142.5g;模型組與空白組各灌胃2mL自來(lái)水。

1.6 神經(jīng)損傷嚴(yán)重度評(píng)分(Neurological Severity Score，NSS)方法 參考文獻(xiàn)［10］的方法，通過(guò)一系列的行為學(xué)測(cè)試來(lái)獲得更詳細(xì)的神經(jīng)學(xué)判定。主要包括運(yùn)動(dòng)能力和感覺情況等一系列10個(gè)測(cè)試項(xiàng)目。21分是試驗(yàn)鼠能達(dá)到的最高分，即正常大鼠得分。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物手術(shù)前每日撫摸若干次，建立良好的反射，適應(yīng)神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分測(cè)試，使給藥前基線平穩(wěn)。1)爪放置:動(dòng)物在長(zhǎng)凳的邊緣縱向抓握，每爪依次放在凳子的邊緣。每只成功放置到凳子上的爪積1分。2)翻正反射:動(dòng)物仰臥放在手掌，如果能翻過(guò)來(lái)積1分。3)單杠測(cè)試:前肢放在有棱的棒上，積分情況如下:3分，兩后肢向上隆起到棒上;2分，一后肢向上隆起到棒上;1分，動(dòng)物吊著;0分，動(dòng)物掉下來(lái)。4)傾斜平臺(tái):動(dòng)物面向下放置45°斜面，積分情況如下:3分，15s內(nèi)動(dòng)物轉(zhuǎn)身，使頭向上;2分，16～30s內(nèi)轉(zhuǎn)身;1分，轉(zhuǎn)身花費(fèi)時(shí)間超過(guò)30s;0分，掉下來(lái)或還保持指頭向下方向。5)旋轉(zhuǎn):拿著動(dòng)物尾巴根部，然后順時(shí)針旋轉(zhuǎn)，再逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)，動(dòng)物應(yīng)該向旋轉(zhuǎn)對(duì)側(cè)方向轉(zhuǎn)圈，每側(cè)積1分。6)前爪視覺范圍:動(dòng)物能在輕拿，使其位置到達(dá)長(zhǎng)凳邊緣，每成功前肢放置積1分。7)轉(zhuǎn)圈:1分，不轉(zhuǎn)圈;0分，轉(zhuǎn)圈。8)對(duì)側(cè)反射:0分，反射;1分，不反射。9)活動(dòng)能力:2分，正?；顒?dòng)能力;1分，搖擺、不穩(wěn);0分，不能活動(dòng)。10)一般條件:2分，正常(皮毛光澤，警覺，自由走動(dòng));1分，不整潔(皮毛臟、駝背姿勢(shì)、好斗);0分，瘦弱，軟弱，肌肉緊張性下降。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)量資料以ˉx±s的形式表示，滿足正態(tài)性與方差齊性，以析因設(shè)計(jì)方差分析檢驗(yàn)NSS評(píng)分時(shí)間與組間效應(yīng)，以Dunnett-t檢驗(yàn)對(duì)多組與一組數(shù)據(jù)差別進(jìn)行比較。如果數(shù)據(jù)不滿足方差分析條件，則以秩和檢驗(yàn)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 造模后大鼠精神萎靡，喜臥少動(dòng)，易激惹;體重下降，皮毛枯槁無(wú)光澤，豎毛，并有掉毛現(xiàn)象;部分有呃逆，流涎，稀便。出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)缺失表現(xiàn)，表現(xiàn)為左側(cè)肢體運(yùn)動(dòng)和感覺的缺失。這些表現(xiàn)可持續(xù)到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

2.2 行為學(xué)測(cè)試結(jié)果 NSS評(píng)分總體結(jié)果見表1、表2。

表1 NSS評(píng)分結(jié)果(ˉx±s)

表2 NSS評(píng)分結(jié)果統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)(n=10)

統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，NSS評(píng)分時(shí)間和組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且時(shí)間與組間具有交互作用，提示NSS評(píng)分恢復(fù)情況受組間和時(shí)間2種因素影響，可以說(shuō)隨著時(shí)間延長(zhǎng)，NSS評(píng)分有恢復(fù)的趨勢(shì)。具體不同時(shí)間點(diǎn)組間比較結(jié)果，各時(shí)間點(diǎn)模型組和治療組NSS評(píng)分與空白組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而治療組與模型組比較，在給藥后2、4、6周NSS評(píng)分差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可以說(shuō)治療組能改善模型動(dòng)物神經(jīng)缺失癥狀。

3 討論

大腦支配調(diào)控機(jī)體的感覺、運(yùn)動(dòng)等多種生命活動(dòng)。如果腦的血流供應(yīng)發(fā)生障礙，導(dǎo)致供血區(qū)域缺血性損傷，導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)、感覺、反射等功能缺損。實(shí)驗(yàn)研究常采用阻塞大腦中動(dòng)脈來(lái)復(fù)制局灶性腦梗死動(dòng)物模型。動(dòng)物常表現(xiàn)為神經(jīng)功能缺失:如對(duì)側(cè)肢體，特別是前肢運(yùn)動(dòng)功能障礙，對(duì)側(cè)感覺功能障礙，反射協(xié)調(diào)障礙等。對(duì)于這些表現(xiàn)，最常用的評(píng)測(cè)方法是一些簡(jiǎn)單的分級(jí)方法如Zea Longa評(píng)分方法來(lái)進(jìn)行神經(jīng)學(xué)判定［9］。這些方法往往比較粗糙，無(wú)法體現(xiàn)模型感覺、運(yùn)動(dòng)、平衡協(xié)調(diào)等功能的全部變化。目前已經(jīng)有不同的研究者根據(jù)需要開發(fā)了一系列方法更敏感精確的方法評(píng)測(cè)這種功能損傷。這些包括肢體放置、橫木行走、網(wǎng)屏行走、旋轉(zhuǎn)試驗(yàn)、粘性標(biāo)簽粘貼測(cè)試、樓梯測(cè)試等［11-12］。對(duì)于中風(fēng)模型理想的功能結(jié)果測(cè)試應(yīng)該是對(duì)于各種功能損傷敏感，能檢測(cè)到慢性長(zhǎng)期功能不足，不會(huì)因?yàn)橹貜?fù)測(cè)量過(guò)分影響，并且對(duì)損傷是有針對(duì)性的。但是測(cè)試選擇一直是爭(zhēng)論相當(dāng)多的論題，關(guān)于哪個(gè)實(shí)驗(yàn)該被選擇以及最少的測(cè)試數(shù)目是多少仍沒有一致意見。如果大量動(dòng)物被檢測(cè)，就會(huì)受時(shí)間和資金限制。神經(jīng)損傷嚴(yán)重程度評(píng)分綜合了運(yùn)動(dòng)、感覺、反射、整體情況以及感覺運(yùn)動(dòng)整合等能力，從一定程度上彌補(bǔ)了單一測(cè)試的的缺點(diǎn)。

中風(fēng)多發(fā)于中老年人，大部分存活患者留有不同程度的后遺癥。究其病因病機(jī)多為氣虛血瘀，其病性多為本虛標(biāo)實(shí)、虛實(shí)夾雜。王清任創(chuàng)制補(bǔ)陽(yáng)還五湯，以黃芪四兩補(bǔ)氣為君，伍以活血化瘀藥為輔，以補(bǔ)氣活血立法治療本病，是臨床上治療中風(fēng)后遺癥的經(jīng)典方劑，療效確切，在本實(shí)驗(yàn)中能明顯提高NSS評(píng)分，改善神經(jīng)缺失癥狀，從中藥藥理學(xué)角度論證了其療效。

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