唐 靈 陳春蓮 蘇桂蘭 甄瑞峰

(廣西桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，廣西省桂林市樂(lè)群路95號(hào)，541001)

糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy，DN)是2型糖尿病(Type2 Diabetic Mellitus，T2DM)嚴(yán)重的并發(fā)癥和患者主要的死亡原因之一，DN發(fā)病是多種機(jī)制共同作用的結(jié)果，大量研究表明，免疫和炎癥反應(yīng)機(jī)制在DN的發(fā)生發(fā)展機(jī)制中起著重要的作用［1-2］。白介素18(Interleukin-18，IL-18)是活化的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞分泌的一種前炎癥因子，與其他炎癥因子一起參與炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)［3］，且是心血管事件的一個(gè)預(yù)測(cè)因子［4-5］，有臨床研究表明其與糖尿病并發(fā)癥有關(guān)［6］，脂聯(lián)素作為新近發(fā)現(xiàn)的一種與慢性炎癥有關(guān)的脂肪因子，參與了糖尿病及其血管并發(fā)癥的發(fā)生［7-8］。本研究旨在探討DN不同發(fā)展階段血清IL-18和脂聯(lián)素水平變化，為DN的早期診斷及臨床防治提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 按1999年WHO糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)選擇2009年10月-2010年5月在我院住院的T2DM患者97例。其中男48例，女49例;年齡(56.8±8.7)歲。根據(jù)尿白蛋白排泄率(UAER)分為3組:正常蛋白尿組(A組，UAER＜20μg/min)35例，微量蛋白尿組(B組，UAER 20～200μg/min)30例，大量白蛋白尿組(C組，UAER＞200μg/min)32例，全部病例均除外惡性腫瘤、急慢性感染、糖尿病急性并發(fā)癥、長(zhǎng)期口服噻唑烷二酮類藥物及調(diào)脂藥、泌尿系感染、除糖尿病以外的繼發(fā)性腎臟疾病。并選擇我院同期健康體檢者35例作為對(duì)照組。其中男19例，女16例;年齡(55.7±11.4)歲。各組年齡、性別比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05)。所有受試者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 標(biāo)本采集 所有受試者均過(guò)夜空腹8～12h，晨起抽靜脈血送生化室測(cè)定血糖、血脂、腎功、糖化血紅蛋白。另取靜脈血2～3mL靜置1h后，3000r/min離心5min分離血清，標(biāo)記后貯存于-76℃低溫冰箱，同時(shí)測(cè)定血清脂聯(lián)素和IL-18。連續(xù)3天收集24h尿，記錄尿量，完成尿微量白蛋白檢測(cè)。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 一般臨床資料 所有受試者測(cè)量血壓，以體重、身高計(jì)算體重指數(shù)(BMI)。次日晨空腹采靜脈血，采用氧化酶法測(cè)定FPG，膠體濾過(guò)法測(cè)定HbA1C，應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定 TG、TC、HDL-C、LDL-C、Scr、BUN;尿微量白蛋白采用高效免疫比濁法檢測(cè)，根據(jù)24h尿量計(jì)算UAER，3次取平均值。

1.3.2 血清脂聯(lián)素和IL-18 用ELISA方法檢測(cè)血清脂聯(lián)素和IL-18水平，ELISA試劑盒購(gòu)自R＆D公司，實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。根據(jù)所測(cè)標(biāo)本的吸光度值，計(jì)算出各標(biāo)本相應(yīng)的脂聯(lián)素和IL-18濃度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(ˉx±s)表示，各組指標(biāo)比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD和SNK檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料比較用卡方檢驗(yàn);相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析和多元逐步回歸分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料比較 各組年齡、性別、體重指數(shù)(BMI)及舒張壓(DBP)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性;大量蛋白尿組與正常蛋白尿組、微量蛋白尿組比較病程、收縮壓(SBP)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.01)，見(jiàn)表1。

2.2 實(shí)驗(yàn)室結(jié)果比較

2.2.1 各組 FPG、HbA1C、TG、TC、HDL-C、LDL-C、BUN、Scr、UAER 比較 糖尿病 3組 FPG、HbA1C、TC、TG、LDL-C水平顯著高于正常蛋白尿組(P＜0.01)，而HDL-C低于正常對(duì)照組(P＜0.01);而大量白蛋白尿組BUN、Scr、UAER水平顯著高于其他3組(P＜0.01);微量蛋白尿組UAER高于正常蛋白尿組及正常對(duì)照組(P＜0.01)，見(jiàn)表2。

2.2.2 各組血清脂聯(lián)素及IL-18水平比較 3組患者血清IL-18水平明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.05)，組間比較顯示隨著尿白蛋白排泄率的增加兩者水平增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。正常蛋白尿組血清脂聯(lián)素低于對(duì)照組，微量蛋白尿組、大量蛋白尿組血清脂聯(lián)素高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見(jiàn)表2。

2.3 單因素相關(guān)分析 IL-18與病程、SBP、HbA1c、FPG、TG、TC、LDL-C、BUN、Scr、UAER 呈不同程度正相關(guān)(P＜0.01)，與HDL-C呈負(fù)相關(guān)(P＜0.01)，且兩者互呈正相關(guān)(P＜0.01)。脂聯(lián)素與病程、SBP、BUN、Scr、UAER 呈正相關(guān)(P ＜0.01)，見(jiàn)表3、4。

表1 各組患者一般資料比較

表2 各組生化指標(biāo)比較(ˉx±s)

表3 血清IL-18與觀察指標(biāo)的相關(guān)性分析

表4 血清脂聯(lián)素與觀察指標(biāo)的相關(guān)性分析

2.4 多元線性逐步回歸分析結(jié)果 分別以IL-18和脂聯(lián)素為應(yīng)變量，年齡、病程、BMI、SBP、DBP、HbA1c、FPG、TG、TC、LDL-C、HDL-C、BUN、Scr、UAER 為自變量進(jìn)行多元線性逐步回歸分析。結(jié)果顯示:病程、TG、LDL-C、Scr、UAER、IL-18 是脂聯(lián)素的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，見(jiàn)表5;脂聯(lián)素、HbA1c和Scr是IL-18的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，見(jiàn)表6。

表5 脂聯(lián)素的多元線性逐步回歸分析結(jié)果

表6 IL-18的多元線性逐步回歸分析結(jié)果

3 討論

糖尿病腎病是糖尿病的一個(gè)重要的微血管并發(fā)癥，已成為終末期腎病的最主要的原因之一。近年來(lái)，炎癥因子和脂肪細(xì)胞因子在糖尿病腎病發(fā)生、發(fā)展中的作用受到重視。

IL-18是1995年Okalnura等［9］首次從誘發(fā)的中毒性休克小鼠肝臟提取液中獲得的一種蛋白。該蛋白有著與白介素-12(Interleukin1-12，IL-12)相似的生物學(xué)活性，主要由活化的單核/巨噬細(xì)胞產(chǎn)生。本研究顯示:糖尿病患者血清IL-18水平高于正常對(duì)照組，且與病程、SBP、HbA1c、FPG、TG、TC、LDL-C、BUN、Scr、UAER呈不同程度正相關(guān)，與HDL-C呈負(fù)相關(guān)，這些變量均是胰島素抵抗的指示，可見(jiàn)IL-18與糖尿病的發(fā)生及胰島素抵抗有關(guān)。本研究還顯示:IL-18隨著尿白蛋白排泄率的增加逐漸增高，提示IL-18與2型糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。IL-18可能通過(guò)以下機(jī)制參與DN的發(fā)展:1)IL-18可促進(jìn)近曲小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，可通過(guò)核因子-κB(NF-κB)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑誘導(dǎo)近端腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化［10］;2)IL-18能調(diào)節(jié)腎小球系膜細(xì)胞的有絲分裂，促進(jìn)其產(chǎn)生和釋放前列腺素，進(jìn)一步引起腎小球微血管改變，在早期腎小球?yàn)V過(guò)率增高中起非常重要作用［11］;3)IL-18還可通過(guò)巨噬細(xì)胞的滲入和活化的另一途徑加重腎小球的損傷［12］;4)Nakamura A 等［13］報(bào)道:腎小管間質(zhì)損傷的指標(biāo)之一尿β-2微球蛋白的排泄量亦與IL-18有明確相關(guān);提示糖尿病腎病患者IL-18的升高可引起小管間質(zhì)的損傷;5)IL-18可導(dǎo)致IL-8，IL-1β，腫瘤壞死因子-a和細(xì)胞間粘附分子 -1等其他前炎癥因子的產(chǎn)生［3，14］，且 IL-18可上調(diào)細(xì)胞間粘附分子-1及內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，提示炎癥反應(yīng)可促進(jìn)糖尿病腎病的發(fā)展［15］。IL-18水平可作為糖尿病腎病進(jìn)展的一預(yù)測(cè)因子。

脂聯(lián)素是由脂肪細(xì)胞分泌的一種特異性蛋白質(zhì)。與肥胖、2型糖尿病、胰島素抵抗、抗炎、抗動(dòng)脈硬化、調(diào)節(jié)血脂密切相關(guān)。正常蛋白尿組脂聯(lián)素水平低于對(duì)照組，當(dāng)有DN時(shí)，隨著UAER的增加脂聯(lián)素水平逐漸增高，且與病程、SBP、Scr、UAER均呈正相關(guān)。提示脂聯(lián)素與DN的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。作用機(jī)制可能與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。綜上所述，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)2型糖尿病腎病血清IL-18及脂聯(lián)素水平的研究，顯示兩者通過(guò)促進(jìn)炎癥反應(yīng)，加速糖尿病腎病的發(fā)展?？赏ㄟ^(guò)兩者的聯(lián)合檢測(cè)，反映早期糖尿病腎損害及腎功能損害進(jìn)展情況，為進(jìn)一步明確2型糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制提供依據(jù)。

［1］Tuttle KR.Linking metabolism and immunology:Diabetic nephropathy is an inflammatory disease.JAm Soc Nephrol，2005，16(6):1537 –1538.

［2］Mora C，Navarro JF.Inflammation and diabetic nephropathy.Curr Diab Rep，2006，6(6):463 – 468.

［3］Puren AJ，F(xiàn)antuzzi G，Gu Y，et al.Interleukin-18(IFNgamma-inducing factor)induces IL-8 and IL-1beta via TNFalpha production from non-CD14?human blood mononuclearcells.J Clin Invest，1998，101(3):711–721.

［4］Zirlik A，Abdullah SM，Gerdes N，et al.Interleukin-18，the metabolic syndrome，and subclinical atherosclerosis:results from the Dallas Heart Study.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2007，27(9):2043 – 2049.

［5］Everett BM，Bansal S，Rifai N，et al.Interleukin-18 and the risk of future cardiovascular disease among initially healthy women.Atheroscle-rosis，2009，202(1):282 – 288.

［6］Skopin'ski P，Rogala E，Duda-Kro'l B，et al.Increased interleukin-18 content and angiogenic activity of sera from diabetic(Type 2)patients with background retinopathy.J Diabetes Complicat，2005，19(6):335 –338.

［7］Daimon M，Oizumi T，Saitoh T，et al.Decreased serum levels of adiponectin are a risk factor for the progression to type2 diabetes in the Japanese population:the Funagata study.Diabetes Care，2003，26(7):2015-2020.

［8］蔡珂丹，劉必成.脂聯(lián)素與腎臟疾病關(guān)系的研究進(jìn)展.東南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2009，28(3):235-239.

［9］Okamura H，Tsutsui H，Komatsu T，et al.Cloning a new cytokine that induces IFN-production by T cells.Nature，1995，378:88–91.

［10］陳偉，梁東，姚翠微，等.IL-18對(duì)HK-2細(xì)胞E-鈣黏蛋白表達(dá)的作用及其可能得胞內(nèi)信號(hào)途徑.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2009，25(7):609-611，32.

［11］劉華鋒，陳孝文，吳瑗，等.原發(fā)性腎小球腎炎患者腎組織白介素-18的表達(dá).中華腎臟病雜志，2003，19(2):127.

［12］Araki S，Haneda M，Koya D et al.Predictive impact of elevated serum level of IL-18 for early renal dysfunction in type2 diabetes:an observational follow-up study.Diabetologia，2007，50(4):867 – 873.

［13］Nakamura A，Shikata K，Hiramatsu M，et al.Serum interleukin-18 levels are associated with nephropathy and atherosclerosis in Japanese patients with type2 diabetes.Diabetes Care，2005，28(12):2890–2895.

［14］Vidal-Vanaclocha F，F(xiàn)antuzzi G，Mendoza L，et al.IL-18 regulates IL-1beta-dependent hepatic melanoma metastasis via vascular cell adhesion molecule-1.Proc Natl Acad Sci U S A，2000，97(2):734–739.

［15］Fujita T，Ogihara N，Kamura Y，et al.Interleukin-18 contributes more closely to the progression of diabetic nephropathy than other diabetic complications.Acta Diabetol，2010:26.