李天朗 唐志宇 王祖祥 付 勇 溫 月

(1四川省德昌縣人民醫(yī)院，四川省涼山彝族自治洲德昌縣德州鎮(zhèn)東風(fēng)路20號(hào)，615500;2廣州中醫(yī)藥大學(xué))

骨折延遲愈合與不愈合是骨科臨床常見(jiàn)的并發(fā)癥，中醫(yī)認(rèn)為骨折的愈合是“瘀去，新生，骨合”的過(guò)程，根據(jù)骨折特點(diǎn)分為初、中、晚三期，分期治療是中醫(yī)藥治療骨折的指導(dǎo)原則，骨延遲愈合或不愈合按分期屬骨折愈合晚期。本實(shí)驗(yàn)觀察了中藥分期治療對(duì)骨折延遲愈合X線及血清ALP的影響，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)資料及結(jié)果總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 新西蘭兔75只，2.0～2.5kg，雄性，動(dòng)物合格證編號(hào):0064192。動(dòng)物設(shè)施使用證明:0032590，均由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 主要試劑和主要儀器 骨臘:由德國(guó)AESCULAP廠提供(批號(hào):209354);7060型日立全自動(dòng)生化分析儀(日立株式會(huì)社生產(chǎn))，廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供;萬(wàn)東500mAX線機(jī)由廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院提供。

1.3 模型制作 雄性新西蘭兔75只，用戊巴比妥鈉耳緣靜脈注射麻醉(30mg/kg)，無(wú)菌施術(shù)，于左側(cè)橈骨中下1/3處縱行切開(kāi)皮膚及皮下組織，暴露左側(cè)橈骨中下1/3部位，在旋前圓肌肌止遠(yuǎn)端切開(kāi)骨膜，切除長(zhǎng)10mm的骨干與骨膜。分5組，除模型組外其余4組髓腔用骨臘封閉，造成骨延遲愈合模型，逐層縫合肌肉筋膜，關(guān)閉切口。肢體不做內(nèi)外固定允許自由負(fù)重、活動(dòng)，分籠標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，術(shù)后連續(xù)3天用青霉素40萬(wàn)單位肌肉注射預(yù)防感染。

1.4 干預(yù)方法 1)基本方劑:所用的基本方劑是根據(jù)高等中醫(yī)藥院校統(tǒng)編教材《中醫(yī)正骨學(xué)》中的肢傷一方、二方及三方，經(jīng)加減而成。2)藥液制備:按傳統(tǒng)中藥水煎劑制備方法制成含生藥1.5g/mL的濃縮液。3)給藥方法:根據(jù)動(dòng)物體重和體表面積確定給藥量，灌胃，根據(jù)不同分期起始，早晚各1次。治療2組術(shù)后第2天開(kāi)始給藥(按骨折分期，一、二、三方分別灌胃7、21、28天)。治療1組、治療3組4周成模后給藥。模型組和延遲愈合模型組術(shù)后第2天灌胃給予等容量的生理鹽水。

1.5 骨折分期 1)自然分期治療組(治療2組):造模后即根據(jù)“中醫(yī)骨折三期治療”原則，分3期干預(yù)。早期活血化瘀、行氣止痛，選用加減肢傷一方;中期接骨續(xù)筋、舒筋活絡(luò)，選用加減肢傷二方;后期補(bǔ)益肝腎、強(qiáng)筋壯骨，選用加減肢傷三方。2)模型建立治療組(治療1組、治療3組):依據(jù)骨折分期，骨延遲愈合模型建立后按分期屬骨折愈合后期，予補(bǔ)益肝腎、強(qiáng)筋壯骨，選用加減肢傷三方，其中治療3組成模后骨延遲愈合區(qū)注入自體紅骨髓2mL。

1.6 X線評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 各組動(dòng)物分別在實(shí)驗(yàn)第4周末和第8周末拍攝橈骨正側(cè)位X線片，進(jìn)行X線肉眼評(píng)分。0分:在X線片上未發(fā)現(xiàn)骨痂陰影;1分:在X線片上可見(jiàn)到骨痂陰影，骨折線比較模糊;2分:有明顯骨痂生長(zhǎng)，骨折線顯著模糊;3分:有豐富骨痂生長(zhǎng)，骨折線接近消失;4分:骨折線消失，完全連接，接近骨化。

1.7 血清堿性磷酸酶(ALP)測(cè)定 各組動(dòng)物分別在實(shí)驗(yàn)第4周和第8周末耳中央動(dòng)脈采血2mL，檢測(cè)血清ALP含量(直接法)。

2 結(jié)果

第4周末治療2組血清ALP明顯高于其他4組，差異極顯著，P＜0.01;第8周治療2組與模型組比較差異極顯著，P＜0.01，與延遲愈合模型組比較差異顯著，P＜0.05，治療1組和治療3組血清ALP與模型組比較顯著下降，P＜0.05，與治療2組比較無(wú)顯著性差異，P＞0.05(見(jiàn)表1)。X線肉眼評(píng)分:術(shù)后第28天模型組極顯著高于其他4組，P＜0.01;延遲愈合模型組極顯著高于各治療組，P＜0.01;術(shù)后第56天:模型組極顯著高于延遲愈合模型組和治療1組，P＜0.01，治療2組極顯著高于治療1組和治療3組，P＜0.01，治療3組顯著高于治療1組，P=0.01。模型組與治療2組、治療3組無(wú)明顯差異，P＞0.05，見(jiàn)表2。

3 討論

骨形成和骨吸收是骨代謝的兩個(gè)基本過(guò)程，骨形成的相對(duì)增強(qiáng)和骨吸收的相對(duì)減弱是骨折愈合的基礎(chǔ)。中醫(yī)根據(jù)骨折損傷的發(fā)展過(guò)程，分為初、中、晚3期，骨延遲愈合或不愈合按分期屬骨折愈合晚期，運(yùn)用補(bǔ)氣血健脾胃、益肝腎舒筋絡(luò)之法，有利于骨折的愈合。

表1 骨折后不同時(shí)段新西蘭兔血清ALP指標(biāo)(U/L，s)

表1 骨折后不同時(shí)段新西蘭兔血清ALP指標(biāo)(U/L，s)

注:與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與延遲愈合模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。

模型組13 120.54±32.9 9 90.56±35.47延遲愈合模型組 15 120.33±40.33 11 96.72±26.79治療1組 15 123.27±22.81 14 74.79±20.68*治療2組 12 155.54±23.33△△＊＊ 9 62.44±27.67△＊＊治療3組 15 122.4±35.54 11 67.27±24.34*

表2 各時(shí)間點(diǎn)X線肉眼觀察評(píng)分(s，n=9)

表2 各時(shí)間點(diǎn)X線肉眼觀察評(píng)分(s，n=9)

注:與模型組比較，＊＊P＜0.01;與延遲愈合模型組比較，△△P＜0.01;治療2組與治療1組相比，□□P＜0.01;治療3組與治療1組相比，▲▲P=0.01;治療2組與治療3組相比，■■P=0.01。

時(shí)間 第28天 第56天2.6717±0.21292 3.6700±0.58355延遲愈合模型組 1.8300±0.19162＊＊ 2.2700±0.25942＊＊治療1組 1.0200±0.11489＊＊△△ 2.9200±0.26574＊＊△△治療2組 1.1400±0.12560＊＊△△ 3.7789±0.20630△△□□■■治療3組 1.1600±0.12853＊＊△△ 3.3300±0.62884模型組△△▲▲

試驗(yàn)第28天各治療組和延遲愈合模型組X線肉眼觀察評(píng)分皆明顯低于模型組，第56天各治療組均高于延遲愈合模型組，治療3組和治療2組與模型組無(wú)明顯差異，治療2組效果最好。提示依據(jù)骨折分期不同而給予不同的中藥，可以干預(yù)骨延遲愈合模型成模，預(yù)防骨延遲愈合，有利于骨折的愈合。同時(shí)發(fā)現(xiàn)早期即對(duì)骨折進(jìn)行中藥治療干預(yù)比后期進(jìn)行干預(yù)更有效，中藥配合骨髓移植較單純骨髓移植效果更明顯。ALP主要由成骨細(xì)胞分泌，可反映出成骨細(xì)胞的成骨能力。治療2組4周時(shí)血清ALP升高明顯高于其他4組，提示體內(nèi)成骨細(xì)胞處于活躍狀態(tài)，骨形成功能增強(qiáng)，8周時(shí)骨折基本愈合時(shí)先于其他組下降，提示血清中ALP含量可反映骨折愈合的情況。因此，對(duì)骨折患者進(jìn)行血清ALP的監(jiān)測(cè)，可對(duì)骨折愈合情況作出早期判斷，并采取相應(yīng)措施及時(shí)干預(yù)。

研究結(jié)果提示，中藥分期治療明顯提高骨折X線肉眼評(píng)分以及血清ALP含量，中藥組均有促進(jìn)骨折愈合的作用。其可能機(jī)制是分期治療更能激活成骨細(xì)胞，提高骨形成能力，能更有效地促進(jìn)鈣鹽的沉積，因此對(duì)骨折進(jìn)行分期辨證治療是必要的，有利于加速骨折愈合，其進(jìn)一步的機(jī)制需要今后利用組織學(xué)、免疫組化等方法進(jìn)行探討。