李彩萍，聶建軍，谷曉濱

（1.山西省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)環(huán)境與資源研究所，山西太原030006；2.山西省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)資源與經(jīng)濟研究所，山西太原030006）

肉色杯傘（Clitocybemaxima（Fr）Kumm）是生長在山西省管涔山一帶著名的野生食用菌，多發(fā)生在夏末秋初季節(jié)。該菌體大，肉厚，香味濃郁，子實體肉紅色，因此，當?shù)赜址Q之為“紅銀盤”，極具開發(fā)利用價值[1]。目前，國內(nèi)外尚未見該菌人工馴化栽培的報道。2009年在管涔山云杉與闊葉樹的混交林內(nèi)采到2個碩大的肉色杯傘子實體，其菌蓋直徑28.7～32.5 cm，菌柄粗2.1～3.2 cm，單個質(zhì)量達453～470 g。通過組織分離，獲得該菌的純化菌株[2]。為此，本試驗研究了該菌菌絲生長的適宜培養(yǎng)基、酸堿度及培養(yǎng)溫度，旨在為進一步開展肉色杯傘馴化栽培奠定基礎。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試菌株 肉色杯傘菌株Cm01是從采自管涔山的野生子實體組織中分離純化培養(yǎng)后所得到。

1.1.2 供試配方 一級種培養(yǎng)基采用2種配方，即配方1：葡萄糖25 g，蛋白胨3 g，磷酸二氫鉀2 g，硫酸亞鐵 0.1 g，1%硫酸鋅 5mL，瓊脂 25 g，水1 000mL。配方2：腐殖土浸出液（腐殖土浸出液的制備：先取野生肉色杯傘采集地的腐殖土100 g于鋁鍋中加1 000mL水煮10min，澄清后取清液過濾，再加入5 g CaCO3即成）100mL加入到900mL水中定量成1 000mL，其他成分與配方1培養(yǎng)基相同。二級種培養(yǎng)基配方：主料為木屑與玉米芯，輔料為麩皮、腐殖土和石膏，組成6個配方（表1）。

1.2 試驗方法

1.2.1 生長指標 以肉色杯傘菌絲生長勢（菌絲萌發(fā)情況、粗細度、色澤等）和菌絲體日均生長速度為評價指標，統(tǒng)計分析不同處理肉色杯傘菌絲的生長情況[3]。

表1 二級種培養(yǎng)基配方 %

1.2.2 氮源選優(yōu)試驗 分別用酵母膏、牛肉膏、豆餅粉代替一級種培養(yǎng)基配方1和配方2中的蛋白胨，分析不同氮源在2種培養(yǎng)基中對肉色杯傘菌絲生長的影響。

1.2.3 碳源選優(yōu)試驗 分別用蔗糖、麥芽糖、乳糖、淀粉、麥麩代替一級種培養(yǎng)基配方1和配方2中的葡萄糖，觀測不同碳源在2種培養(yǎng)基中對肉色杯傘菌絲生長的影響。

1.2.4 一級種培養(yǎng)基優(yōu)化試驗 根據(jù)不同碳、氮源在配方1和配方2培養(yǎng)基中對肉色杯傘菌絲生長影響的試驗結(jié)果，選擇最佳碳、氮源及其適宜的加入量，篩選出最佳培養(yǎng)基配方。

1.2.5 酸堿度梯度試驗 通過加入檸檬酸調(diào)整pH 值，共設 6 個處理，即 pH 值為 4，5，6，7，8，9，觀測不同pH值對肉色杯傘菌絲生長的影響。

1.2.6 溫度梯度試驗 設置12～14，15～17，18～20，21～23，24～26，27～29 ℃培養(yǎng)溫度，觀測不同溫度條件下的菌絲生長情況。

1.2.7 二級種培養(yǎng)基選優(yōu)試驗 按表1配方組合分別配制培養(yǎng)基，培養(yǎng)基含水量為65%，pH值為6.5。腐殖土取自野生肉色杯傘采集地林間地表層，篩去枯枝爛葉，暴曬風干后按比例加入。每個配方配制500mL菌種瓶10瓶，高壓滅菌后，無菌條件下接入肉色杯傘二級菌種，24～26℃下培養(yǎng)。

1.2.8 變溫培養(yǎng) 設24～26℃的常溫區(qū)與4～6℃的低溫區(qū)，肉色杯傘菌絲在24～26℃常溫條件下培養(yǎng)7 d后，于4～6℃冰箱中保藏1，2，3，4，5，6，7，8，9 d，取出后繼續(xù)在 24～26 ℃培養(yǎng)，與未經(jīng)低溫保藏的肉色杯傘菌絲生長量（對照）進行比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 氮源選優(yōu)試驗結(jié)果

由表2可知，肉色杯傘菌絲在配方2培養(yǎng)基中的生長要優(yōu)于配方1培養(yǎng)基，在這2種培養(yǎng)基中均以酵母膏為氮源的培養(yǎng)基最有利于菌絲生長，表現(xiàn)為菌絲粗壯，菌絲日均生長速度快，在配方1培養(yǎng)基中菌絲日均生長速度為1.5mm/d，在配方2添加了腐殖土浸出液的培養(yǎng)基中日均生長速度為1.8mm/d，均顯著高于其他氮源，且生長差異達到了顯著水平。

表2 不同氮源對肉色杯傘菌絲體生長的影響

2.2 碳源選優(yōu)試驗結(jié)果

試驗結(jié)果（表3）表明，供試碳源在2種培養(yǎng)基中的菌絲長勢均以麥麩表現(xiàn)最好；但從菌絲日均生長速度來看，以葡萄糖生長最快，在配方1培養(yǎng)基中日均生長速度為1.6mm/d，在配方2培養(yǎng)基中日均生長速度為1.7mm/d，且與其他碳源生長差異顯著。

2.3 肉色杯傘菌絲生長適宜的一級種培養(yǎng)基優(yōu)化配方

通過肉色杯傘菌絲體在不同碳、氮源的2種培養(yǎng)基上的優(yōu)選試驗，從表2，3結(jié)果還可以看出，麥麩、葡萄糖和酵母膏為最佳碳、氮源，而且在添加了腐殖土浸出液的配方2培養(yǎng)基中生長要優(yōu)于配方1。因此，對配方2優(yōu)化后的培養(yǎng)基配方為：葡萄糖 25 g、麥麩 50 g、瓊脂 25 g、酵母膏3 g、磷酸二氫鉀2 g、硫酸亞鐵0.1 g、1%硫酸鋅5mL。

進一步試驗表明，在優(yōu)化后的配方2培養(yǎng)基上，肉色杯傘菌絲萌發(fā)后沿培養(yǎng)基伸展能力更強，長勢更好，日均生長速度達到1.9mm/d。

表3 不同碳源對肉色杯傘菌絲體生長的影響

2.4 肉色杯傘菌絲生長的適宜pH值

培養(yǎng)基的酸堿度直接影響細胞酶的活性[4]。本試驗表明，肉色杯傘菌絲生長的適宜pH值為6～7。pH＜6，菌絲萌發(fā)力弱，菌絲僅在菌塊周圍形成團狀的菌落；pH＞7，菌絲萌發(fā)后生長勢逐漸減弱，滿管度降低，菌絲生長無力，先端菌絲纖細灰白，接著好象“扎”入培養(yǎng)基，不再向前擴展。

2.5 肉色杯傘菌絲生長的適宜溫度

真菌生長繁殖適宜溫度范圍為20～30℃[5]。本試驗表明，肉色杯傘菌絲生長的溫度范圍為6～30℃，最適溫度為24～26℃。在適溫下，菌絲生長均勻一致；高于26℃，菌絲萌發(fā)快，但纖細，沿培養(yǎng)基伸展能力差；高于28℃，菌絲生長受到抑制；低于18℃，菌絲萌發(fā)、生長較慢，培養(yǎng)周期延長，易造成培養(yǎng)基斜面脫水，不利于菌絲的生長。

2.6 不同二級種培養(yǎng)基對菌絲生長的影響

肉色杯傘菌絲在6個供試的二級種培養(yǎng)基上均可生長，在1號培養(yǎng)基上菌絲生長最快，在3號培養(yǎng)基上菌絲生長勢最強，菌絲濃白粗壯（表4），1，2，3號之間培養(yǎng)基菌絲生長速度差異不顯著，因此，3號培養(yǎng)基應為最適培養(yǎng)基。

表4 不同二級種培養(yǎng)基對菌絲生長的影響

2.7 變溫培養(yǎng)對肉色杯傘菌絲生長的影響

通過常溫（24～26℃）與低溫（4～6℃）變溫培養(yǎng)，與持續(xù)常溫培養(yǎng)的對照相比，經(jīng)低溫（4～6℃）處理后的菌絲生長勢逐漸增強，生長點的先端菌絲變得濃白粗壯，在試管斜面上菌落增厚。結(jié)果（圖1）表明，在低溫處理后的前3 d作用不明顯，3 d后菌絲的生長能力開始增強，7 d后菌絲日均生長速度達到了2.1mm/d，但低溫處理8，9 d后日均生長速度差異不大。相反，未經(jīng)低溫處理的對照，菌絲日均生長速度變化不大，基本維持在1.5～1.6mm/d，與經(jīng)低溫處理對應第7天菌絲日均生長速度2.1mm相差0.5～0.6mm。

3 討論

肉色杯傘菌絲在加入取自野生肉色杯傘采集地林間地表層腐殖土的腐殖質(zhì)浸出液培養(yǎng)基中生長較好，腐殖液的成分較為復雜，其綜合作用可能與其促進了菌絲對碳、氮源的利用，增強了菌絲的抗逆能力相關[6]。

本試驗中，低溫處理促進了肉色杯傘菌絲的生長，在之前我們對一些野生菌（如白雷蘑）的馴化培養(yǎng)中，也觀測到了低溫處理促進菌絲生長的現(xiàn)象。從有關的研究來看，這可能與肉色杯傘在低溫下誘導產(chǎn)生了新的代謝途徑有關。如張懵等[7]研究發(fā)現(xiàn)，草菇在低溫下會產(chǎn)生新的誘導蛋白，從而產(chǎn)生新的代謝途徑。但是，肉色杯傘在低溫下是否有新的酶類蛋白產(chǎn)生而改變了代謝途徑，還有待深入研究。

本研究在人工基質(zhì)上實現(xiàn)了對肉色杯傘菌絲的純培養(yǎng)。試驗結(jié)果證明，選擇適宜的培養(yǎng)基是菌絲培養(yǎng)的前提，而培養(yǎng)出生長健壯的菌絲又是出菇的前提。本試驗觀測到了培養(yǎng)基表面有菌絲球團狀的隆起[8]，但是沒有分化出完整的子實體，因此，對該菌的出菇馴化仍需進一步研究。

［1］賈定洪，郭勇，鄭林用，等.野生香蘑屬菌株的ITS序列分析[J].食用菌，2010（1）：21-23.

［2］班立桐，谷榮祥，高燕，等.平菇津平90特性及栽培技術[J].天津農(nóng)業(yè)科學，2001，7（2）：36-37.

［3］郭向華，班立桐，王永莊，等.杏鮑菇對不同碳氮營養(yǎng)源的利用[J].天津農(nóng)業(yè)科學，2002，8（3）：4-6.

［4］齊振祥，孫軒，張麗，等.用木屑袋式反季節(jié)栽培滑子菇技術[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技，2008（2）：111-113.

［5］曹日亮，楊晉青，梁興龍，等.CY發(fā)酵醋糟的最佳條件[J].山西農(nóng)業(yè)科學，2003，31（2）：81-84.

［6］王保川.蕈菌側(cè)耳屬品比試驗 [J].山西農(nóng)業(yè)科學，2009，37（11）：15-17.

［7］張懵，賈新成，陳明杰.草菇低溫誘導蛋白的初步研究[J].食用菌學報，2000，7（1）：56-58.

［8］劉波，朱玫，范黎.山西大型食用真菌[M].太原：山西高校聯(lián)合出版社，1991：62.