賴馨 李小峰 陳麗芳 胡琴 萬彥彬 林建華

IL-22、IL-27、VEGF、TF及TFPI對良惡性漿膜腔積液的鑒別價值*

賴馨 李小峰 陳麗芳 胡琴 萬彥彬 林建華

目的 評估漿膜腔積液中白介素22（interleukin-22，IL-22）、IL-27、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、組織因子（tissue factor，TF）和組織因子途徑抑制物（tissue factor pathway inhibitor，TFPI）水平在鑒別良惡性漿膜腔積液中的價值。方法應用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測41例病理學和影像學檢測確診為惡性漿膜腔積液患者、41例良性漿膜腔積液患者的漿膜腔積液中IL-22、IL-27、VEGF、TF和TFPI水平，并加以分析。結(jié)果惡性漿膜腔積液患者的漿膜腔積液中IL-22、IL-27、VEGF、TF和TFPI水平明顯高于良性漿膜腔積液患者，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。ROC分析表明，惡性漿膜腔積液中IL-22、IL-27、VEGF、TF和TFPI的ROC曲線下面積分別為0.638、0.750、0.687、0.568和0.657。而聯(lián)合這5個指標建立的預測診斷模型，ROC曲線下面積為0.793。結(jié)論漿膜腔積液中IL-22、IL-27、VEGF、TF和TFPI水平對鑒別良惡性漿膜腔積液有重要參考價值。

白介素22 白介素27 血管內(nèi)皮生長因子 組織因子 組織因子途徑抑制物 漿膜腔積液 受試者工作特征曲線

漿膜腔積液的發(fā)生有5%～20%源于腫瘤患者，這種漿膜腔積液稱為惡性漿膜腔積液[1-3]。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中，漿膜腔積液與腫瘤進展與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，因此在臨床工作中鑒別良惡性漿膜腔積液具有重要意義。漿膜腔積液中發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞，是診斷惡性漿膜腔積液的金標準，特異性高。但僅有小部分惡性漿膜腔積液中能夠檢測到腫瘤細胞，且多數(shù)出現(xiàn)在腫瘤轉(zhuǎn)移及晚期，因此敏感性差。目前，臨床仍缺乏特異性和敏感性俱佳的指標來鑒別漿膜腔積液的性質(zhì)。

血管新生與腫瘤細胞的增殖與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，多種細胞因子參與腫瘤的血管新生過程。漿膜腔積液中促血管新生的細胞因子水平升高，對于惡性漿膜腔積液的診斷具有重要意義。本實驗檢測了82例良惡性漿膜腔積液中白介素22（interleukin-22，IL-22）、IL-27、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、組織因子（tissue factor，TF）以及組織因子途徑抑制物（tissue factor pathway inhibitor，TFPI）水平，并對其進行統(tǒng)計分析，探討這5種分子標記物單獨及聯(lián)合應用對于診斷漿膜腔積液性質(zhì)的意義。

資料與方法

1 一般資料 選取本院住院部經(jīng)病理學和影像學檢測確診的41例惡性漿膜腔積液患者，其中男性23例，女性18例；年齡（53.5±16.4）歲（1～80歲）；腹水標本19例，胸水標本22例。選取同期治療的41例良性漿膜腔積液患者作為對照組，其中男性28例，女性13例；年齡（53.9±19.0）歲（21～89歲）；腹水標本19例，胸水標本22例。兩組患者在年齡、性別等一般資料方面的差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05），具有可比性。

2 試劑與儀器 ①試劑：人IL-22、人IL-27、人VEGF、人TF和人TFPI試劑盒，均采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA），試劑盒均為上海酶聯(lián)公司生產(chǎn)。②儀器：離心機，酶標儀。

3 檢測方法 獲取漿膜腔積液標本后立即送檢，以2 500 r/min常規(guī)離心分離上清，在2 h內(nèi)嚴格按照ELISA試劑盒操作流程完成檢測。

4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 16.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計量資料采用均值±標準差（±s）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料用率（100%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。分別計算各個指標ROC曲線下面積（AUC）[4，5]：AUC＜0.5為無診斷價值，AUC 0.5～0.7為診斷準確性較低，AUC 0.7～0.9為診斷準確性較高，AUC＞0.9為診斷準確性很高。聯(lián)合5個指標構(gòu)建預測模型，計算聯(lián)合指標后的ROC曲線下面積。

結(jié) 果

1 兩組患者漿膜腔積液IL-22、IL-27、VEGF、TF和TFPI水平及比較 惡性漿膜腔積液中IL-22、IL-27、VEGF、TF及TFPI的水平明顯高于良性漿膜腔積液，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，表1）。

2 惡性漿膜腔積液中IL-22、IL-27、VEGF、TF和TFPI的診斷效能 計算5種分子標記物單獨診斷惡性漿膜腔積液的AUC：IL-22、IL-27、VEGF、TF和TFPI分別為0.638 3、0.750 4、0.686 8、0.567 5和0.656 5。5種分子標記物單獨運用，對于惡性漿膜腔積液均具有一定的診斷價值（表2）。

3 惡性漿膜腔積液中5項指標聯(lián)用的預測模型和診斷效能 構(gòu)建模型：b+a1*IL-22（ng/L）+a2*IL-27（ng/L）+a3*VEGF（pg/ml） +a4*TF（pg/ml）+ a5*TFPI（μg/L），b=–3.790 9，a1=0.018 7，a2=0.051 2，a3=0.001 4，a4=–0.013 1，a5=–0.011 9。該預測模型的ROC曲線下面積為0.793 0，見圖1；AUC 95%置信區(qū)間為0.695 1～0.890 9。

表1 良惡性漿膜腔積液IL-22、IL-27、VEGF、TF和TFPI水平比較（均數(shù)±標準差）

表2 惡性漿膜腔積液中IL-22、IL-27、VEGF、TF和TFPI的診斷效能

圖1 5種分子標記物聯(lián)合后診斷惡性漿膜腔積液的ROC曲線

討 論

臨床所見漿膜腔積液主要包括胸水和腹水，在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中并不少見。但漿膜腔積液也可以在其他非腫瘤性疾病如炎癥性、自身免疫性等疾病中發(fā)生。因此，鑒別漿膜腔積液的良惡性具有重要的臨床意義。盡管漿膜腔積液中發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞是惡性漿膜腔積液診斷的最確切診斷標準，特異度高，但該指標并不敏感，且耗時。臨床亟待兼具敏感性和特異性的檢測指標用以鑒別漿膜腔積液性質(zhì)。

IL-22首次從活化的T細胞中克隆純化，屬于IL-10家族的一員，最初被命名為IL-10相關(guān)的T細胞來源的誘導因子（IL-10-related T cell derived inducible factor，IL-TIF）[6]，主要由Th22、Th17和Th1細胞亞群分泌。IL-22通過結(jié)合IL-10R2和IL-22R1形成的異源二聚體受體復合物，激活下游信號通路[7]。IL-22作用的特異性主要取決于IL-22R1的表達，而IL-10R2主要介導細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導[8]。IL-22R主要表達于胰臟、皮膚、腎臟、肝臟、小腸、呼吸道等，因此這些器官組織也是IL-22主要作用的對象。多項研究顯示，IL-22通過多種機制參與腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移，包括免疫功能紊亂、促進細胞增殖、抑制細胞凋亡、促進血管新生等[9]。Th-22細胞比例在消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)以及血液系統(tǒng)腫瘤中均被證實升高，外周血及漿膜腔積液中IL-22水平也相應升高[10]。

IL-27屬于IL-12家族，對于調(diào)控T細胞反應的持續(xù)時間和強度有重要作用[11]。IL-27能增強Th1細胞功能，促進IL-10分泌，同時抑制Th2和Th17細胞分化，因此在特異免疫和非特異免疫系統(tǒng)中均有重要作用。盡管研究顯示，IL-27在多種疾病包括腫瘤中具有保護性作用，但由于IL-27信號通路復雜，參與體內(nèi)多個生理過程，目前研究尚未能明確IL-27在腫瘤中的作用和分子機制[12]。

VEGF早在上世紀80年代就被發(fā)現(xiàn)在惡性漿膜腔積液形成中發(fā)揮重要作用[13]。VEGF能夠促進血管新生，增加血管通透性，與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移以及惡性漿膜腔積液的產(chǎn)生密切相關(guān)。

TF又稱凝血因子Ⅲ，是凝血因子中唯一在細胞表面表達的跨膜蛋白，主要由血管平滑肌細胞、纖維母細胞和外膜細胞組成性表達[14]。越來越多的研究顯示，TF除凝血作用外，在多種腫瘤中高表達。TF能夠促進血管新生、腫瘤細胞生長和轉(zhuǎn)移，從而加快腫瘤進展[15，16]。

TFPI是一種絲氨酸蛋白酶抑制物，是TF凝血途徑的主要抑制物[17]。研究顯示多種惡性腫瘤中TFPI均有不同程度的高表達，其機制包括以下幾項[18]：①腫瘤細胞自身可合成TFPI；②腫瘤引起體內(nèi)促凝血活性增強，如TF表達升高，可反饋性促進TFPI釋放；③腫瘤患者常伴有炎癥和感染，也能促進內(nèi)皮細胞合成釋放TFPI。

因此，我們檢測了41例惡性和41例良性漿膜腔積液中上述5個分子標記物的水平并進行對比；同時對各個分子標記物對惡性漿膜腔積液的獨立診斷能力及5個分子標記物聯(lián)合試驗的診斷能力進行了分析。研究發(fā)現(xiàn)，相比良性漿膜腔積液，惡性漿膜腔積液中IL-22、IL-27、VEGF、TF以及TFPI水平均有升高，差異有統(tǒng)計學意義。而通過計算ROC曲線下面積，我發(fā)現(xiàn)這5個指標對于惡性漿膜腔積液均有診斷意義，其中IL-27的AUC達到0.7504。而聯(lián)合5個指標構(gòu)建的預測模型對于惡性漿膜腔積液的診斷AUC為0.7930，高于5個指標的獨立診斷AUC，說明聯(lián)合應用對于惡性漿膜腔積液具有更高的診斷價值。檢測漿膜腔積液IL-22、IL-27、VEGF、TF及TFPI水平，方法簡單、耗費時間短。因此，這5項指標對于鑒別良惡性漿膜腔積液具有潛在的臨床應用價值。

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The Diagnostic Value of IL-22，IL-27，VEGF，TF and TFPI in Benign and Malignant Pleural Effusion

LAI Xin，LI Xiao-feng，CHEN Li-fang，et al. Department of Clinical Laboratory，Longgang District People′s Hospital，Shenzhen 518172

Objective To investigate the diagnostic value of IL-22，IL-27，VEGF，TF and TFPI inhibitor value in the benign and malignant pleural effusions.MethodSelected ninety pleural patients were subdivided into two groups according to the results of pathology and iconography diagnosis，ie the benign pleural effusions （benign） group with 43 cases and malignant pleural effusions （malignant） group with 47 cases. To test the diagnostic ability of several indicatorsused alone and in combination，the concentrations of IL-22，IL-27，VEFG，TF and TFPI were determined by ELISA method，and the concentrations of these five biomarkers in pleural effusion were compared，then receiver operating curve（ROC） analysis was performed.ResultsA significant difference of IL-22，IL-27，VEGF，TF and TFPI levels were observed in patients with malignant and benign pleural effusion （P＜0.05）. Receiver operating curve analysis indicated that several indicators used alone showed a less potent diagnostic ability of benign and malignant pleural effusion，the area under the ROC curve of less than 0.8; while these biomarkers used in combination showed an obvious improvement in sensitivity，specificity and accuracy.ConclusionThe combination of several biomarkers can provide a reference for the differential diagnosis of benign and malignant pleural effusion. Because of the high accuracy，efficiency and simplicity，this method is worthy promotion.

IL-22 IL-27 VEGF TF TFPI Serous cavity effusion Ros curve

R446.11

A

1671-2587（2017）01-0063-04

2016-08-27）

（本文編輯：王虹）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.01.018

*本課題受廣東省深圳市龍崗區(qū)科技發(fā)展資金醫(yī)療衛(wèi)生項目（No. YLWS20150513173417559）資助

518172 廣東省深圳市龍崗區(qū)人民醫(yī)院檢驗科（賴馨 ，李小峰，陳麗芳，胡琴，萬彥彬）；中山大學附屬腫瘤醫(yī)院檢驗科（林建華）

賴馨（1987–），女，江西吉安人，主管檢驗師，學士，主要從事臨床檢驗基礎(chǔ)工作，（E-mail）mmyoo35@163. com。