劉元東,郝文利,王風(fēng)英,何暢

（1.鶴壁市土壤肥料工作站,河南鶴壁 458030；2.國(guó)營(yíng)浚縣農(nóng)場(chǎng),河南鶴壁 458030；3.河南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,河南新鄉(xiāng) 453000）

烤煙提倡施用腐熟有機(jī)肥近年來已被行業(yè)專家普遍認(rèn)可[1].河南寶融生物科技有限公司生產(chǎn)的BM高效腐熟劑是專門處理畜禽糞便的微生物制劑,其所處理畜禽糞便后生產(chǎn)的有機(jī)肥對(duì)烤煙落黃產(chǎn)生的明顯影響,已經(jīng)被技術(shù)人員試驗(yàn)并且得到驗(yàn)證.根結(jié)線蟲Meloidogyne incognita、黑脛病病原菌Phytophthora nicotiana和角斑病病原菌Pseudomonas angulata是烤煙上的3種常見病原[2],BM高效腐熟劑對(duì)上述病原有無(wú)抑制作用尚不清楚.因此,我們分別對(duì)烤煙的3種常見病害病原物進(jìn)行了BM高效腐熟劑的效果試驗(yàn),以期為BM高效腐熟劑用于烤煙病害的防治提供理論依據(jù).

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試的BM高效腐熟劑由河南寶融生物科技有限公司提供.

供試的根結(jié)線蟲Meloidogyne incognita、黑脛病病原菌Phytophthora nicotiana和角斑病病原菌Pseudomonas angulata3種病原采自染病的煙草植株.

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 BM高效腐熟劑對(duì)烤煙根結(jié)線蟲的影響 取結(jié)瘤煙根數(shù)條,切取根瘤,稱3份各5.0 g,將3份根瘤切片,做不同的處理.處理Ⅰ：將5.0 g根瘤切片與BM高效腐熟劑處理的畜禽糞便5 g均勻混合,置于100 mL三角瓶中,保持含水量50%,置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10 d后取出,加入無(wú)菌水50mL,同時(shí)加入玻璃珠數(shù)顆,在往復(fù)式振蕩器上振蕩24 h,用微量移液器吸取250μL于潔凈載玻片上,用呂氏美藍(lán)染色液染色,不加蓋玻片于16×4倍顯微鏡下觀察,隨機(jī)選擇10個(gè)視野,記錄活體雄成蟲、雌成蟲、卵囊數(shù).處理Ⅱ：將5 g根瘤切片放入透氣塑料薄膜袋中,置于正在用BM高效腐熟劑進(jìn)行處理的畜禽糞便中,10 d后取出,用與處理Ⅰ相同的方法進(jìn)行計(jì)數(shù).對(duì)照于25℃恒溫培養(yǎng)箱中自然放置10 d,取出后用與處理Ⅰ相同的方法進(jìn)行計(jì)數(shù).

1.2.2 BM高效腐熟劑對(duì)烤煙角斑病病原菌的影響 取30 g病斑樣品,剪成細(xì)碎小塊,分成3份.試驗(yàn)設(shè)2個(gè)處理,處理Ⅰ：將10 g病斑碎片與10 g用BM高效腐熟劑處理的畜禽糞便均勻混合,置于150mL三角瓶中,保持含水量50%,于26℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10 d后進(jìn)行CFU（colony forming units,CFU）計(jì)數(shù)，具體方法為：加入帶玻璃珠的100mL無(wú)菌水中,靜置20min,在旋轉(zhuǎn)式搖床上200 r/min充分振蕩2 h,制成基礎(chǔ)液,用5mL無(wú)菌液管分別吸5mL上述母液菌加入45mL無(wú)菌水中,按1：10進(jìn)行系列稀釋,分別得到1：10-1、1：10-2……1：10-8稀釋的菌懸液（每個(gè)稀釋度應(yīng)換無(wú)菌移液管）.取 10-6、10-7、10-83 個(gè)連續(xù)稀釋濃度,用0.5mL無(wú)菌移液管分別吸取不同稀釋度度的菌懸液0.1mL,加至預(yù)先制備好的固體肉湯培養(yǎng)基平板上,分別用無(wú)菌玻璃刮刀將不同稀釋度的菌懸液均勻涂布于表面,每一稀釋濃度重復(fù)3次.同時(shí)以無(wú)菌水作空白對(duì)照,于適宜的條件下培養(yǎng),根據(jù)烤煙角斑病菌的特征,確認(rèn)有效菌.以出現(xiàn)20～300個(gè)菌落數(shù)的稀釋濃度為計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn),統(tǒng)計(jì)有效活菌數(shù).10 d后取出檢測(cè)菌含量.處理Ⅱ：將10 g角斑病病斑碎片用適合塑料袋包裝好置于用BM高效腐熟劑處理的畜禽糞便堆肥中,其余方法同處理Ⅰ.對(duì)照取10 g病斑小塊,于26℃恒溫培養(yǎng)箱中自然放置10 d后取出,其余方法同處理Ⅰ.

1.2.3 BM高效腐熟劑對(duì)烤煙黑脛病病原菌的影響 BM高效腐熟劑對(duì)烤煙黑脛病病原菌的影響試驗(yàn)方法同1.2.2,不同之處在于所用培養(yǎng)基為PDA孟加拉紅培養(yǎng)基,稀釋濃度為10-3、10-4、10-5,培養(yǎng)溫度30℃,計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)為10～150個(gè)菌落數(shù).

2 結(jié)果與分析

2.1 BM高效腐熟劑對(duì)煙草根結(jié)線蟲的影響

由表1可以看出,處理Ⅰ較對(duì)照活體根結(jié)線蟲雄蟲數(shù)、雌蟲數(shù)、卵囊數(shù)分別減少37.9%、48%、34.9%.處理Ⅱ從堆肥中挖出,根瘤切片呈炭黑狀,未曾觀察到有完整的雄蟲雌蟲和卵囊,判定3者含量為0.處理Ⅰ利用BM高效腐熟劑處理的有機(jī)肥中含有某些生物防治菌,如蘇云金芽胞桿菌[3]的伴孢晶體及毒素和大量抗生素類物質(zhì),可能是導(dǎo)致根線蟲活體數(shù)量減少的一個(gè)原因.處理Ⅱ由于連續(xù)60℃以上的高溫導(dǎo)致了根結(jié)線蟲蟲體和蟲卵自溶,所以未見活體根結(jié)線蟲[4].

表1 不同處理煙草根結(jié)線蟲數(shù)量變化情況

2.2 BM高效腐熟劑對(duì)烤煙黑脛病、角斑病病原菌的影響

由表2可以看出,BM高效腐熟劑對(duì)角斑病菌、黑脛病菌按處理Ⅰ的方法處理10 d后均有一定的抑制效果,但處理Ⅱ中未觀察到2種病原菌存在.病原菌的減少可能是因?yàn)橛肂M高效腐熟劑處理的畜禽糞便中含有大量抗生素類物質(zhì)和生防菌群,對(duì)病原菌具用殺滅、拮抗或寄生作用.

表2 不同處理烤煙兩種病原菌數(shù)量的變化

3 討論

以菌治菌,以菌治蟲[5]是近年來植物保護(hù)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一.BM高效腐熟劑由河南寶融生物科技有限公司從自然界眾多微生物中篩選出來的若干有益微生物組合而成,其含有大量具有生物防治效果的微生物.從試驗(yàn)中可以看出,BM高效腐熟劑對(duì)根結(jié)線蟲、煙草角斑病菌、煙草黑脛病菌都有一定的抑制作用.在模擬土壤的條件下,殺滅了大部分有害病原物,從而促進(jìn)了烤煙正常的生長(zhǎng)發(fā)育.究其原因,BM高效腐熟劑中含有大量具有生物防治效果的微生物,其所產(chǎn)生的毒素和抗生素類物質(zhì)對(duì)病原物具有拮抗、殺滅作用.但是,在10 d內(nèi)并不能徹底殺滅有害病原物也是事實(shí),關(guān)于BM高效腐熟劑處理時(shí)間對(duì)烤煙病原物的影響,以及如何提高BM高效腐熟劑的抑蟲抑菌效果,是尚需繼續(xù)研究解決的問題[6].

[1]韓錦峰,王凌,張秀英,等.生物有機(jī)肥對(duì)烤煙生長(zhǎng)發(fā)育及其產(chǎn)量和品質(zhì)的影響[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué),1999（6）：11-14.

[2]楊建卿,江彤,承河元.煙草病理學(xué)[M].北京：中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社,2003.

[3]常明,孫啟宏,周順桂,等.蘇云金芽孢桿菌生物殺蟲劑發(fā)酵生產(chǎn)的影響因素及其工藝選擇[J].生態(tài)環(huán)境學(xué)報(bào),2010,19（6）：1471-1477.

[4]劉維志.植物病原線蟲學(xué)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2000.

[5]顧月華.生物技術(shù)與綠色環(huán)境[J].生物學(xué)雜志,1998,15（5）：25-26.

[6]朱貴明,何命軍,石屹.對(duì)我國(guó)煙草肥料研究與開發(fā)工作的思考[J].中國(guó)煙草科學(xué),2002,23（1）：19-20.