馬敏芝，南志標(biāo)

(蘭州大學(xué)草地農(nóng)業(yè)科技學(xué)院 農(nóng)業(yè)部草地農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室 甘肅草原生態(tài)研究所，甘肅 蘭州 730020)

病害是遏制當(dāng)今草坪業(yè)發(fā)展的主要因素之一[1]。引致草坪草病害的生物包括真菌、細(xì)菌、病毒、類菌原體、類病毒和線蟲，但由真菌引起的病害占植物病害總數(shù)的80%以上[2]。黑麥草屬(Lolium)植物易感染多種病害，僅國(guó)內(nèi)就有14屬24種真菌引致的21種病害[3]，如離蠕孢葉斑病(Bipolarissorokiniana)、黑斑病(Alternariaalternate)、黃斑病(Curvularialunata)、網(wǎng)斑病(Drechslerasp.)、褐斑病(Rhizoctoniasolani)、腐霉病(Pythiumgraminicola)以及幣斑病(Sclerotiniahomoeocarpa)等[4-5]。國(guó)外報(bào)道的其他病害有綿腐病(P.aphanidermatum)、紅線病(Leatisariafuciformis)以及灰雪腐病(Typhulaincarnata)，在歐洲和北美地區(qū)冠銹病(Pucciniacoronata)在多年生黑麥草(L.perenne)上發(fā)生嚴(yán)重[6]。目前，化學(xué)殺菌劑可有效地防治植物真菌引起的病害，與農(nóng)田和其他農(nóng)作物相比，草地面積大，使用殺菌劑不甚經(jīng)濟(jì)且易于造成生態(tài)環(huán)境的污染[7]。因此，積極采用微生物防治手段是控制病害經(jīng)濟(jì)有效的措施，國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)帶有內(nèi)生真菌的禾草對(duì)重要植物病害有抗性，而且內(nèi)生真菌對(duì)禾草生產(chǎn)力的提高起著重要作用[8]。

禾草內(nèi)生真菌是指生長(zhǎng)在植株體內(nèi)并完成全部或大部分生活周期，而禾草不顯示外部癥狀的一大類真菌[9]。1993年，Hoveland[10]首次報(bào)道多年生黑麥草中存在內(nèi)生真菌，繼而Prestidge和Gallagher[11]發(fā)現(xiàn)，被內(nèi)生真菌感染的多年生黑麥草植株具有抗阿根廷莖象甲(Listronotisbonariensis)的作用。此后研究表明，N.lolii內(nèi)生真菌與多年生黑麥草形成的共生體可提高寄主和微生物抵御生物因素和非生物因素脅迫的生態(tài)適應(yīng)性[12]。已有研究表明，黑麥草-內(nèi)生真菌共生體在田間或溫室條件下具有抗病性[13-14]。體外試驗(yàn)也證明從黑麥草中分離的Neotyphodium屬內(nèi)生真菌具有抑制真菌的活性。White和Cole[15]發(fā)現(xiàn)，自黑麥草中分離的內(nèi)生真菌可抑制禾谷絲核菌(R.cerealis)的生長(zhǎng)。在PDA培養(yǎng)基上，黑麥草內(nèi)生真菌可明顯抑制德氏霉和禾谷炭疽菌(Colletotrichumgraminicola)的生長(zhǎng)[16-17]。因此，本研究以黑麥草內(nèi)生真菌及發(fā)酵液為材料，對(duì)病原菌菌落生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)進(jìn)行生物測(cè)定，分析內(nèi)生真菌對(duì)幾種常見(jiàn)草坪草病原菌的抑菌活性，旨在為深入理解黑麥草內(nèi)生真菌-病原真菌之間的關(guān)系提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1分離內(nèi)生真菌所用植物材料 黑麥草種子購(gòu)于蘭州市邵明草坪種子公司，分別為引自美國(guó)的愛(ài)神特(Accent)、美達(dá)利(Medary)、頂峰(Pinnacle)和球道(Fairway)等 4個(gè)草坪草品種。保存于4 ℃冷庫(kù)，以保證種帶內(nèi)生真菌的活性。

1.1.2供試植物病原真菌 細(xì)交鏈孢、小麥根腐離蠕孢、新月彎孢霉、德氏霉由蘭州大學(xué)草地農(nóng)業(yè)科技學(xué)院植物病理實(shí)驗(yàn)室從發(fā)病草坪草中分離所得。

1.1.3培養(yǎng)基 內(nèi)生真菌分離培養(yǎng)基為抗生素培養(yǎng)基(ABPDA)[18]，純化及測(cè)試菌培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)基為氨基酸鹽液體培養(yǎng)基(AABS)[19]。

1.2方法

1.2.1內(nèi)生真菌的分離 將黑麥草種子播種于育苗盤中(30 cm×25 cm×8 cm)，溫室培養(yǎng)(24±1)℃，植株長(zhǎng)有3～4個(gè)分蘗時(shí)檢測(cè)黑麥草帶內(nèi)生真菌的情況，并建立帶菌(E+)與不帶菌(E-)種群。參照李春杰的方法[18]，于ABPDA培養(yǎng)基上對(duì)E+植株中的內(nèi)生真菌進(jìn)行分離。待4周后觀察組織切口處有無(wú)白色菌絲體長(zhǎng)出，將長(zhǎng)出的菌落切取菌絲頂端，純化后移至PDA斜面保存。經(jīng)鑒定各菌株屬于Neotyphodium屬的內(nèi)生真菌[20]，分別編號(hào)為N-A1、N-M2、N-P2和N-F1。

1.2.2離體平板對(duì)峙測(cè)定 采用離體平板對(duì)峙法[21]，在無(wú)菌條件下，將已于PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)好的供試病原菌用直徑為6 mm的打孔器打孔并等距地轉(zhuǎn)入生長(zhǎng)1周的內(nèi)生真菌的PDA培養(yǎng)基周圍，每皿轉(zhuǎn)入3個(gè)病原菌菌餅，于(22.5±1)℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)4周，每處理3個(gè)重復(fù)。以同樣的病原菌菌餅等距地轉(zhuǎn)入無(wú)內(nèi)生真菌的PDA培養(yǎng)基中作為對(duì)照，在相同條件下培養(yǎng)。用毫米刻度尺測(cè)量病原菌菌落與內(nèi)生真菌菌落之間的距離，按下列公式計(jì)算抑菌率。

1.2.3內(nèi)生真菌發(fā)酵液和病原菌孢子懸浮液的制備 發(fā)酵液制備：將4株內(nèi)生真菌菌株于PDA上純培養(yǎng)2周，在無(wú)菌條件下用打孔器打成直徑為6 mm的菌餅接于裝有150 mL AABS培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中，于(24±1)℃下，150 r/min的搖床內(nèi)培養(yǎng)30 d后取出，10 000 r/min離心10 min，用一次性注射器吸取發(fā)酵上清液于無(wú)菌試管中，4 ℃條件下保存?zhèn)溆肹19]。

孢子懸浮液制備：無(wú)菌條件下，在長(zhǎng)有病原菌的培養(yǎng)皿中注入5 mL滅菌水，再用接種環(huán)輕輕刮下斜面上的孢子，充分分散后配成孢子懸浮液，孢子濃度大于105個(gè)/mL。

1.2.4發(fā)酵液對(duì)病原菌菌落生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的測(cè)定 采用生長(zhǎng)速率法[22]，在無(wú)菌條件下，用一次性注射器吸取發(fā)酵上清液1 mL與融化狀態(tài)下(40～50 ℃)的PDA培養(yǎng)基(每皿20 mL)混勻，凝固后接直徑6 mm的供試病原菌菌餅，在沒(méi)有發(fā)酵液的PDA上接病原菌作為對(duì)照，(22.5±1)℃黑暗培養(yǎng)，每處理3個(gè)重復(fù)。用毫米刻度尺測(cè)量病原菌菌落直徑，并計(jì)算抑菌率。

采用孢子萌發(fā)法[22]，在無(wú)菌的雙凹載玻片的凹片中，滴加1 mL各內(nèi)生真菌菌株的發(fā)酵上清液，同時(shí)滴加1 mL病原菌的孢子懸浮液后混勻，孢子濃度以每視野內(nèi)80～100個(gè)為宜(10×40倍鏡)。以沒(méi)有發(fā)酵上清液的相同濃度的孢子懸浮液作為對(duì)照，然后置于直徑為11 mm的培養(yǎng)皿中于(22～25)℃條件下保濕培養(yǎng)。每隔2 h檢測(cè)一次孢子萌發(fā)情況，在第10小時(shí)對(duì)照的萌發(fā)率超過(guò)85%時(shí)，用計(jì)數(shù)器對(duì)所有處理的孢子萌發(fā)情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并計(jì)算抑制率。

1.3數(shù)據(jù)處理 所有數(shù)據(jù)均用Microsoft Excel錄入并制表。 采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行差異顯著性分析，用Duncan法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果

2.1內(nèi)生真菌對(duì)病原菌的抑制作用 離體對(duì)峙培養(yǎng)的結(jié)果表明，培養(yǎng)前期，對(duì)峙培養(yǎng)皿中病原菌的生長(zhǎng)速度與對(duì)照較為一致。培養(yǎng)2周后，對(duì)照中的病原真菌已長(zhǎng)滿并覆蓋整個(gè)培養(yǎng)皿，菌絲生長(zhǎng)豐富，而對(duì)峙培養(yǎng)皿中病原菌則生長(zhǎng)緩慢，并未產(chǎn)生大量菌絲。培養(yǎng)4周后，對(duì)峙培養(yǎng)皿中內(nèi)生真菌繼續(xù)生長(zhǎng)而病原菌停止向培養(yǎng)皿中心生長(zhǎng)，有向培養(yǎng)皿邊緣擴(kuò)散生長(zhǎng)的趨勢(shì)，內(nèi)生真菌與病原真菌之間產(chǎn)生明顯的間隔 (圖1)。

由內(nèi)生真菌和病原菌之間的距離得出，不同內(nèi)生真菌對(duì)同一病原菌的抑制作用不同，而不同病原菌對(duì)同一內(nèi)生真菌的敏感程度表現(xiàn)出差異。其中N-A1菌株對(duì)小麥根腐離蠕孢和新月彎孢霉的抑制效果顯著大于對(duì)其他2種病原菌(P<0.05)，兩菌落之間的平均間隔分別達(dá)到11.30和10.67 mm；N-M2菌株對(duì)德氏霉的抑制作用顯著(P<0.05)，兩菌落之間的平均間隔為10.17 mm；N-P2菌株對(duì)小麥根腐離蠕孢的抑制作用顯著(P<0.05)，其平均間隔為 11.17 mm；N-F1菌株對(duì)細(xì)交鏈孢、新月彎孢霉和德氏霉的抑制作用顯著(P<0.05)，其平均間隔分別為10.10、10.36和11.31 mm(表1)。

圖1 內(nèi)生真菌對(duì)病原菌的抑制效果

表1 離體對(duì)峙培養(yǎng)試驗(yàn)中內(nèi)生真菌與病原真菌菌落之距 mm

與對(duì)照相比，4株內(nèi)生真菌不同程度地抑制了病原菌菌落的生長(zhǎng)。N-A1和N-F1菌株對(duì)細(xì)交鏈孢的抑制效果顯著高于另外2株內(nèi)生真菌(P<0.05)，抑制率分別為42.51%和44.73%；N-A1和N-P2菌株對(duì)小麥根腐離蠕孢抑制效果顯著高于另外2株內(nèi)生真菌(P<0.05)，抑制率分別為46.25%和46.55%；N-A1和N-F1菌株對(duì)新月彎孢霉的抑制效果顯著高于另外2株內(nèi)生真菌(P<0.05)，抑制率分別為45.52%和44.70%；N-A1、N-M2和N-F1菌株對(duì)德氏霉的抑制效果顯著高于N-P2(P<0.05)，抑制率分別為43.24%、43.97%和46.62%(表2)。

2.2內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)病原菌的影響

2.2.1對(duì)病原菌菌落生長(zhǎng)的影響 培養(yǎng)1周后，在含有內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物的培養(yǎng)皿中，病原菌菌落生長(zhǎng)速度緩慢，菌絲向外生長(zhǎng)明顯受到抑制，菌落邊緣向外擴(kuò)散受到抑制。與對(duì)照相比，生長(zhǎng)在含有內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物培養(yǎng)基上的病原菌均受到不同程度的抑制作用(圖2)。其中N-F1菌株發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)細(xì)交鏈孢、小麥根腐離蠕孢、新月彎孢霉和德氏霉的抑制效果顯著高于其他3株內(nèi)生真菌(P<0.05)，抑制率分別為17.79%、57.20%、33.79% 和41.52%(表3)。

表2 離體對(duì)峙培養(yǎng)試驗(yàn)中內(nèi)生真菌對(duì)病原真菌菌落生長(zhǎng)的影響

圖2 內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)病原真菌的抑制作用

表3 內(nèi)生真菌發(fā)酵液對(duì)病原真菌菌落生長(zhǎng)的影響

2.2.2對(duì)病原菌孢子萌發(fā)的影響 在10×40倍顯微鏡下觀察到，被內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物處理過(guò)的病原菌孢子萌發(fā)的個(gè)數(shù)以及芽管長(zhǎng)度明顯小于對(duì)照組中的孢子，說(shuō)明內(nèi)生真菌的發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)孢子萌發(fā)具有一定的延遲作用。各處理孢子萌發(fā)數(shù)均呈下降趨勢(shì)，其中4株內(nèi)生真菌菌株對(duì)小麥根腐離蠕孢的抑制作用較強(qiáng)，抑制率分別為77.70%、62.08%、55.03%和86.60%；N-F1菌株對(duì)4種病原菌的抑制效果顯著高于其他3株內(nèi)生真菌(P<0.05)，抑制率分別達(dá)到79.14%、86.60%、85.58%和80.25%(表4)。

表4 內(nèi)生真菌發(fā)酵液對(duì)病原真菌孢子萌發(fā)的影響

3 討論與結(jié)論

本研究以常見(jiàn)的草坪草病原菌為作用對(duì)象，探討了從不同品種的多年生黑麥草中分離出的Neotyphodium屬內(nèi)生真菌及發(fā)酵產(chǎn)物的抑菌作用。結(jié)果表明，離體對(duì)峙培養(yǎng)條件下黑麥草內(nèi)生真菌分離菌株對(duì)病原菌菌落的生長(zhǎng)均表現(xiàn)出不同程度的抑制作用。不同內(nèi)生真菌對(duì)同一種病原菌的體外抑制作用不同，可能是由內(nèi)生真菌分泌的抑菌物質(zhì)的種類和數(shù)量存在差異所致[23]，而同一株內(nèi)生真菌對(duì)不同病原菌的抑制作用也表現(xiàn)出差異，這可能是同種內(nèi)生真菌分泌多種抑菌活性物質(zhì)，而不同活性物質(zhì)只能抑制某一特定病原菌的生長(zhǎng)，也可能是每種內(nèi)生真菌只能分泌一種抑菌活性物質(zhì)，但是不同病原菌對(duì)它的反應(yīng)不一致，這有待進(jìn)一步研究[24]。張苗苗等[25]對(duì)線葉嵩草(Kobresiacapillifolia)內(nèi)生真菌抗植物真菌活性測(cè)定中也發(fā)現(xiàn)，Acremonium屬的內(nèi)生真菌較其他內(nèi)生真菌表現(xiàn)出更強(qiáng)的抑菌活性。在培養(yǎng)過(guò)程中，對(duì)峙培養(yǎng)皿中病原菌生長(zhǎng)緩慢，內(nèi)生真菌則繼續(xù)生長(zhǎng)，這可能是由于內(nèi)生真菌具有營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)能力，在生長(zhǎng)過(guò)程中逐步占據(jù)營(yíng)養(yǎng)空間，從而使病原菌得不到足夠的營(yíng)養(yǎng)而停止生長(zhǎng)，因此競(jìng)爭(zhēng)作用或許是內(nèi)生真菌抑制病原菌的主要機(jī)制之一。另外，在實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)離體條件下內(nèi)生真菌的純培養(yǎng)可以產(chǎn)生毒素或生物堿等物質(zhì)，對(duì)病原菌的生長(zhǎng)具有抑制作用[26]，這或許是內(nèi)生真菌抑制病原菌生長(zhǎng)的另外一種作用機(jī)制。

以往研究表明，內(nèi)生真菌純培養(yǎng)的液體提取物具有抑制多種植物病原菌生長(zhǎng)的作用[27]。黑麥草內(nèi)生真菌在馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中的提取液可抑制或延遲大刀鐮孢菌(Fusariumculmorum)的孢子萌發(fā)[26]。本研究中，黑麥草內(nèi)生真菌的發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)4種病原菌的菌落生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)表現(xiàn)出較好的抑制作用，這與Christensen[28]研究黑麥草內(nèi)生真菌提取液抑制病原真菌生長(zhǎng)的結(jié)果相類似。并且各內(nèi)生真菌菌株對(duì)同一種病原菌的抑制效果表現(xiàn)出差異，產(chǎn)生這種差異的原因一方面可能是內(nèi)生真菌-宿主共生體遺傳型表現(xiàn)不同所致[29]，另一方面是由于參試的病原菌屬于半知菌亞門，在特性上存在差異，因此，病原菌對(duì)內(nèi)生真菌的敏感程度也表現(xiàn)出差異。其中N-F1菌株的發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)各病原菌表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑菌活性且顯著高于其他3株內(nèi)生真菌(P<0.05)，這可能是不同菌株產(chǎn)生不同數(shù)量和濃度的抑菌物質(zhì)所致，但具體的抑菌成分和抑菌機(jī)制有待進(jìn)一步研究。黃東益等[24]對(duì)旗草(Brachiariabrizantha)內(nèi)生真菌的研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)病原菌有抑制作用的內(nèi)生真菌提取液進(jìn)行熱處理或蛋白水解酶處理后，抑菌作用明顯減弱或消失，說(shuō)明抗真菌活性物質(zhì)是熱不穩(wěn)定的、能被蛋白酶水解，推斷這類抗真菌物質(zhì)可能屬于蛋白質(zhì)或酶類。這為以后探尋和明確黑麥草內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物的抑菌活性成分提供了新的思路。

國(guó)內(nèi)外研究者已從黃花蒿(Artemisiaannua)[30]等植物的內(nèi)生真菌發(fā)酵液中提取到對(duì)病原菌有抑制作用的活性物質(zhì)，說(shuō)明內(nèi)生真菌可能成為生物防治中有潛力的微生物農(nóng)藥。目前人們發(fā)現(xiàn)近80屬290多種禾本科植物中含有內(nèi)生真菌，我國(guó)已在14屬43個(gè)種的天然草地禾草中發(fā)現(xiàn)內(nèi)生真菌[26]，是一個(gè)豐富的內(nèi)生真菌資源庫(kù)，要充分利用這一資源，既要對(duì)禾草內(nèi)生真菌共生體進(jìn)行深入研究，也要開拓其可能的優(yōu)勢(shì)作用。

[1]劉明稀，易自立，趙運(yùn)林，等.草坪病害生物防治研究進(jìn)展[J].草業(yè)學(xué)報(bào)，2004，13(6)：1-7.

[2]南志標(biāo).草坪草病害綜合防治體系[A].見(jiàn)：陳佐忠.面向2l世紀(jì)的中國(guó)草坪科學(xué)與草坪業(yè)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，1999：193-202.

[3]Dunsday J L，Smith K F，F(xiàn)orster J W.SSR based genetic linkage analysis of resistance to crown rust (Pucciniacoronataf.sp.lolii) in perennial ryegrass (Loliumperenne)[J].Plant Pathology，2003，52:628-637.

[4]李春杰，南志標(biāo).混播對(duì)草坪建植與病害的影響[J].草業(yè)科學(xué)，2002，19(8)：63-68.

[5]李春杰，南志標(biāo).甘肅草坪草真菌病害初報(bào)[J].草業(yè)科學(xué)，1998，15(1)：48-50.

[6]張翔，鄧其驥，樓潔瓊，等.蘭州大學(xué)草坪與綠地植物病蟲害調(diào)查和養(yǎng)護(hù)技術(shù)[J].草業(yè)科學(xué)，2005，22(8)：62-66.

[7]南志標(biāo).建立中國(guó)的牧草病害可持續(xù)管理體系[J].草業(yè)學(xué)報(bào)，2000，9(2)：1-9.

[8]Prestidge R A.Cause and control of perennial ryegrass in NewZealand[J].Agriculture，Ecosystems and Environment，1993，44:283-300.

[9]Siegel M R，Latch G C M，Johnson M C.Fungal endophytes of grasses[J].Annual Review of Phytopathology，1987，25:293-315.

[10]Hoveland C S.Importance and economic significance of theAcremoniumendophytes to performance of animals and grass plant[J].Agriculture，Ecosystems and Environment，1993，44:3-12.

[11]Prestidge R A，Gallagher R T.Endophyte fungus confers resistance to ryegrass: Argentine stem weevil larval studies[J].Ecological Entomology，1988，13:429-435.

[12]Latch G C M.Physiological interactions of endophytic fungi and their hosts.Biotic stress tolerance imparted to grasses by endophytes[J].Agriculture，Eosystems and Environment，1993，44:143-156.

[13]Wheatley W M，Nicol H I，Hunt E R，etal.An association between perennial ryegrass endophyte，a leafspot caused by (Pyrenophorasemeniperda) and preferential grazing by sheep[A].Proceedings of The 3rd International Conference on Harmful and Beneficial Microorganisams in Grassland，Pasture and Turf[C].Soest，Germany:The 3rd International Conference on Harmful and Beneficial Microorganisams in Grassland，Pasture and Turf ,2000:71-74.

[14]Tian P，Nan Z B，Li C J，etal.Effect of the endophyteNeotyphodiumloliion susceptibility and host physiological response of perennial ryegrass to fungal pathogens[J].European Journal of Plant Pathology，2008，122(4):593-602.

[15]White J FJr，Cole G T.Endophyte-host association in forage grasses.The endophyte ofFestucaversuta[J].Mycologia，1986，78(1):102-107.

[16]Christensen M J，Latch G C M，Tapper B A.Variation within isolates ofAcremoniumendophyte from perennial ryegrasses[J].Mycological Research，1991，95:918-923.

[17]Holzmann-Wirth A，Dapprich P D，Eierdanz S，etal.Anti-fungal substances extracted fromNeotyphodiumendophytes[A].In:Proceedings of The 3rd International Conference on Harmful and Beneficial Microorganisms in Grassland，Pasture and Turf[C].Soest，Germany: The 3rd International Conference on Harmful and Beneficial Microorganisams in Grassland，Pasture and Turf,2000:65-69.

[18]李春杰.醉馬草-內(nèi)生真菌共生體生物學(xué)與生態(tài)學(xué)特性研究[D].蘭州：蘭州大學(xué)，2005.

[19]James F，White J F Jr，Garry T，etal.Endophyte-host associations in forages grasses.III.In vitro inhibition of fungi byAcreamniumcoenophialum[J].Mycologia，1986，77(3):487-489.

[20]White Jr J F，Morgan-Jones G，Morrow A C.Taxonomy，life cycle，reproduction and detection ofAcremoniumendophytes[J].Agriculture，Ecosystems and Environment，1993，44:13-37.

[21]Li C J，Gao J H，Nan Z B.Interactions ofNeotyphodiumgansuense，Achnatheruminebrians，and plant-pathogenic fungi[J].Mycological Research，2007，111(10):1220-1227.

[22]黃彰欣.植物化學(xué)保護(hù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1993：53-58.

[23]Siegel M R，Latch G C M.Expression of antifungal activity in agar culture by isolates of grass endophytes[J].Mycologia，1991，83(4):529-537.

[24]黃東益，黃小龍，Segenet K.旗草內(nèi)生真菌與旗草抗病性研究[J].草業(yè)學(xué)報(bào)，2009，18(2)：39-45.

[25]張苗苗，張蓉，陳偉，等.線葉嵩草內(nèi)生真菌抗植物病原真菌活性測(cè)定[J].草業(yè)科學(xué)，2009，26(7)：122-126.

[26]南志標(biāo)，李春杰.禾草-內(nèi)生真菌共生體在草地農(nóng)業(yè)系統(tǒng)中的作用[J].生態(tài)學(xué)報(bào)，2004，24(3)：605-616.

[27]Kim H Y，Choi G J，Lee H B，etal.Some fungal endophytes from vegetable crops and their anti-oomycete activties against tomato late blight[J].Letters in Applied Microbiology，2007，44:332-337.

[28]Christensen M J.Antifungal activity in grasses infected withAcremoniumandEpichloeendophytes[J].Australian Plant Pathology，1996，25:186-191.

[29]Faeth S H.Are endophytic fungi defensive plant mutualists[J].Oikos，2002，98:25-36.

[30]Zuo W X，Meng J C，Lu H，etal.Metabolites ofColletotrichumgloeosporicides，an endophytic fungus inArtemisiaannua[J].Journal of Natural Products，2000，63:1529-1530.