，，

(吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春130033)

炎立消片為由單味丁香葉水煎煮和粉末入藥制成的片劑。原兒茶酸為其主要成分之一，也是其有效成分，因此原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用反相高效液相色譜法測(cè)定樣品中原兒茶酸的含量。在復(fù)核過(guò)程中發(fā)現(xiàn)原操作方法看上去色譜峰為單峰，但是通過(guò)多年的經(jīng)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)色譜峰實(shí)為有效成分與雜質(zhì)峰的復(fù)合峰，使含量測(cè)定不能真實(shí)的控制有效成分的含量[1-4]。因此，對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)中原兒茶酸的含量測(cè)定方法進(jìn)行了修訂。修改后方法易于操作，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性良好。

1 儀器與試藥

島津LC-2010A高效液相色譜儀，CLASS-VP色譜工作站；原兒茶酸對(duì)照品(批號(hào):0844-9802，規(guī)格:供含量測(cè)定用)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；乙腈為色譜純；磷酸為分析純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Alltima HP C18(Φ 4.6×250 mm)(奧泰公司)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液(3∶97)；流速：0.8 mL/min；柱溫：40 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：260 nm；理論板數(shù)按原兒茶酸峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取原兒茶酸對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1 mL含0.02 mg的溶液，即得

2.3 供試品溶液的制備 取本品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，取約1.5 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理30 min，放冷，稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25 mL，蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，加稀鹽酸約1.5 mL，搖勻，用醋酸乙酯提取5次，每次20 mL，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 陰性對(duì)照試驗(yàn) 為進(jìn)一步考察實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的合理性，取不含丁香葉的陰性對(duì)照樣品，依上述方法測(cè)定，結(jié)果陰性樣品色譜圖在原兒茶酸峰相應(yīng)的保留時(shí)間附近無(wú)干擾峰檢出，從而證明本法是合理可行的。

2.4.2 線性關(guān)系考察 精密稱(chēng)取原兒茶酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.023 64 mg的溶液。分別精密吸取1、3、5、8、10、12 μL，測(cè)定，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

求得回歸方程：Y=4 812 772.83X-1 024.51(r=1.000 0)

結(jié)果表明原兒茶酸進(jìn)樣量在0.023 64～0.283 68 μg范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好，符合外標(biāo)法定量測(cè)定的要求。

2.4.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液5 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)6次，測(cè)定原兒茶酸色譜峰面積的平均值為486 219，RSD為0.35%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取本品供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明，在24 h內(nèi)，供試品溶液中原兒茶酸的含量基本穩(wěn)定。

表1 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.4.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一供試品6分，依“2.3”項(xiàng)下的方法制成供試品溶液，在上述條件下測(cè)定，原兒茶酸含量的平均值為85.0 μg/片，RSD為1.26%。結(jié)果表明，方法重復(fù)性良好。

2.4.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取同法測(cè)定已知含量的供試品(批號(hào)070601,含量：274.64 μg/g)6分，分別精密加入對(duì)照品甲醇溶液(4.5 μg/mL)50 mL，按“2.3”項(xiàng)下的方法制成所需溶液，并按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.5 樣品測(cè)定 取本品，按“2.3”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中原兒茶酸的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 3批樣品含量測(cè)定結(jié)果

2.6 原料藥材的測(cè)定 上述方法測(cè)定3批投料藥材，3批丁香葉中原兒茶酸的含量結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 3批藥材含量測(cè)定結(jié)果

如表4所示，3批樣品含原兒茶酸的量在0.005 0%～0.005 7%之間，故暫定本品的含量限度為每1片含原兒茶酸不得少于50 μg。

3 討論

本次實(shí)驗(yàn)考察了供試品提取純化條件的選擇：1)將樣品用70%甲醇超聲，濾過(guò)，即得；2)將樣品用鹽酸溶液超聲，乙醚振搖提取；3)“2.2”項(xiàng)下的方法。3種提取方法測(cè)得的原兒茶酸含量分別為86 mg/片，74 mg/片，85 mg/片，對(duì)方法1)、2)、3)進(jìn)行比較,結(jié)果表明方法2)提取易乳化，雜質(zhì)較多，含量較低；方法1)、3)得到的供試品含量較高，但是方法1)得到的供試品雜質(zhì)較多，難于分離，故未采用；方法3)得到的供試品雜質(zhì)較少，分離效果佳，含量較高，故選此方法。

取原兒茶酸對(duì)照品，用甲醇配制成溶液，經(jīng)UV-2550紫外分光光度計(jì)在波長(zhǎng)200～350 nm范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，測(cè)得原兒茶酸在258.7 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，因此確定260 nm為本法的測(cè)定波長(zhǎng)。

本文建立的方法簡(jiǎn)單準(zhǔn)確、靈敏度高、方便可行，為控制炎立消片的質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)。

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