周亞東，史繼學(xué)，劉洪年，劉 建，張軍利，姚 靜

百草枯（paraquat，PQ），是目前世界范圍內(nèi)廣泛使用的有機雜環(huán)類接觸性脫葉劑及除草劑，對人畜均有較強的毒性（大鼠急性口服LD50為150 mg/kg），因缺乏特效解毒劑及有效降低毒物毒性的治療手段，病死率高達50%～80%[1]。百草枯進入人體后可通過能量依賴過程緩慢聚集到肺，引起肺損傷。肺損害也是引起中毒者死亡的主要原因。肺的病理改變?yōu)棰裥秃廷蛐头闻萆掀ぜ毎缙诔霈F(xiàn)肺泡炎、肺水腫、出血，晚期出現(xiàn)纖維細胞的增殖及肺纖維化。其肺損傷機制尚未完全闡明，目前認為，主要在于氧化循環(huán)反應(yīng)產(chǎn)生的自由基損傷及脂質(zhì)過氧化反應(yīng)有關(guān)。依達拉奉作為新型自由基清除劑已在腦血管病救治領(lǐng)域取得良好效果，本文主要探討其在急性百草枯中毒救治方面的作用。

1 材料與方法

1.1 動物與分組 取成年雄性SD大鼠36只，體重在200～250 g，由山東醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。實驗動物按隨機數(shù)字表法分為對照組和試驗組，每組各18只，于染毒后第1、3、7天三個不同時間點處死大鼠，每時間點6只大鼠。

1.2 實驗試劑 20%PQ農(nóng)藥，購自山東科信生物化學(xué)有限公司。依達拉奉注射液由先聲藥業(yè)公司提供。SOD測試盒、MDA測試盒，由南京建成生物工程研究所提供。

1.3 主要儀器 721紫外分光光度計、顯微鏡、低溫離心機、恒溫水浴箱、勻漿器等。所有手術(shù)器械均經(jīng)高溫高壓消毒，取樣均于無菌環(huán)境下進行。

1.4 方法

1.4.1 模型制作 對照組和試驗組共36只大鼠均經(jīng)腹腔一次性灌胃百草枯溶液80 mg/kg[2]。試驗組大鼠于中毒2 h起2次/d腹腔內(nèi)注射依達拉奉2 mg/kg。對照組大鼠染毒后腹腔內(nèi)注射等量生理鹽水2次/d。兩組大鼠均正常喂養(yǎng)。

1.4.2 觀察及取樣 給藥后觀察大鼠反應(yīng)，包括呼吸、動作及精神狀態(tài)等。在染毒后第1、3、7天分別取6只對照組及試驗組大鼠用水合氯醛（0.3 ml/100 g）麻醉后腔靜脈采血，在肝素鈉預(yù)處理的試管中低溫離心，留取血漿。取各組大鼠右肺組織在4%甲醛中固定并做HE染色，左肺組織勻漿。

1.4.3 檢測指標及方法 按照試劑盒說明書檢測大鼠血漿及肺組織勻漿中SOD活力、MDA含量。取肺臟固定標本做HE染色觀察病理變化。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 所有統(tǒng)計均采用SPSS11.5軟件包對結(jié)果進行t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 光鏡檢查 中毒后對照組大鼠第1天出現(xiàn)肺毛細血管擴張、充血，內(nèi)皮細胞腫脹，肺泡內(nèi)可見少量紅細胞及炎性細胞浸潤；中毒后第3天，間質(zhì)性和肺泡性水腫達高峰，肺出血明顯，細支氣管腔和肺泡腔內(nèi)透明膜形成，細支氣管壁和肺泡腔內(nèi)炎性細胞浸潤；中毒后第7天，仍可見肺泡內(nèi)水腫、出血，纖維母細胞在肺泡壁和細小支氣管內(nèi)蔓延，呼吸膜變厚，細支氣管周圍淋巴組織增生。試驗組使用依達拉奉治療后，第1天肺泡毛細血管擴張、充血，內(nèi)皮細胞腫脹，炎性細胞浸潤，與對照組無明顯差異，但第3、7天肺泡腔內(nèi)水腫程度、出血情況較對照組有明顯減輕。

2.2 中毒大鼠肺組織及血漿酶學(xué)指標的變化 兩組大鼠肺組織勻漿及血漿中的MDA含量在中毒后第3天升高達高峰，第7天逐漸下降。在治療后第1天兩組大鼠肺組織勻漿及血漿中的MDA含量比較無顯著性差異，在治療第3天及第7天試驗組大鼠肺組織勻漿及血漿中的MDA含量比對照組含量明顯降低（P<0.05）。兩組大鼠肺組織勻漿及血漿中的SOD活力在中毒后第1天出現(xiàn)下降，第7天逐漸恢復(fù)。在治療后第2天兩組大鼠肺組織勻漿及血漿中的SOD活力比較無顯著性差異，在治療第3天及第7天試驗組大鼠肺組織勻漿及血漿中的SOD活力比對照組含量明顯增高 （P<0.05），見表1。

表1 中毒后兩組大鼠不同時點肺組織勻漿及血漿中MDA、SOD（±s）

表1 中毒后兩組大鼠不同時點肺組織勻漿及血漿中MDA、SOD（±s）

與對照組比較，#P<0.05

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3 討 論

急性百草枯中毒病死率高，肺損傷是其最主要的損害機制，死者最終多死于呼吸窘迫綜合征。PQ中毒的治療目前仍處于探索階段。目前臨床多采用持續(xù)血液凈化、大劑量激素沖擊、免疫抑制劑及對癥支持治療[3]，均未明顯降低其病死率。

百草枯可經(jīng)完整皮膚、呼吸道和消化道吸收，在胃腸道中吸收率為5%～15%，大部分經(jīng)糞便排泄，吸收后0.5～4 h達血漿濃度峰值。中毒后肺組織百草枯濃度是血漿濃度的10～90倍，其選擇性在肺內(nèi)大量積聚，緣于肺部存在胺類物質(zhì)轉(zhuǎn)運系統(tǒng)（由于百草枯和二胺、多胺及二胺胱胺具有結(jié)構(gòu)上特殊的相似性），當(dāng)血漿中存在大量百草枯時，與胺類物質(zhì)競爭被肺泡細胞攝入[4]。百草枯進入細胞內(nèi)迅速與分子氧反應(yīng)，隨之發(fā)生氧化還原反應(yīng)導(dǎo)致大量活性氧產(chǎn)生和NADH及其它還原當(dāng)量耗盡，誘導(dǎo)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，破壞細胞功能，導(dǎo)致細胞死亡[5]。MDA是脂質(zhì)過氧化的重要終產(chǎn)物之一，反映了機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度；SOD是機體抗氧化損傷防御體系中最重要的抗氧化酶之一，反映了機體清除氧自由基的能力；正常情況下，機體內(nèi)自由基的產(chǎn)生和清除保持著動態(tài)平衡，體內(nèi)SOD活性、MDA含量的變化可以反映機體清除自由基和抗氧化損傷的能力[6]。本文結(jié)果顯示，大鼠染毒后1 d血漿和肺組織勻漿中的MDA水平明顯升高，SOD活力顯著下降，第3天達高峰，第7天開始逐漸恢復(fù)，試驗組在應(yīng)用依達拉奉后可明顯降低MDA水平，顯著提高SOD活力，證實依達拉奉可有效對抗PQ中毒繼發(fā)的自由基損傷，病理表現(xiàn)同樣證實依達拉奉在染毒后第3天有效改善肺充血、水腫、出血，從而減輕纖維母細胞增生，避免出現(xiàn)嚴重的肺纖維化。綜上所述依達拉奉對百草枯中毒致氧化損傷具有明顯的對抗作用，它的應(yīng)用可能成為治療百草枯中毒患者的有效新途徑，其在臨床的應(yīng)用有待進一步研究。

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