李林卿，莊文欣，李鵬程，孫學(xué)軍

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。在我國，乳腺癌僅次于宮頸癌而居女性惡性腫瘤的第二位，其發(fā)病率占全身各種惡性腫瘤的7%~10%。近年來，乳腺癌的發(fā)病率有不斷上升的趨勢。脆性組氨酸三聯(lián)體 （fragile histidine triad，F(xiàn)HIT） 基因是Ohta等[1]利用外顯子捕獲法在人類染色體3p14.2區(qū)域克隆的一種抑癌基因，跨越了3號染色體脆性位點(diǎn)FRA3B部位，后者是腫瘤染色體重排的部位，因此易導(dǎo)致純合性或雜合性缺失及5’端CPG島多甲基化等。

FHIT基因的異常改變見于多種腫瘤。Sozzi等[2]研究發(fā)現(xiàn)80%小細(xì)胞肺癌和40%的非小細(xì)胞肺癌存在FHIT基因轉(zhuǎn)錄異常；Vecchione等[3]檢測發(fā)現(xiàn)FHIT表達(dá)缺失發(fā)生在宮頸癌變早期；Huiping等[4]觀察到84%胃癌患者存在FHIT基因缺失，王萍等[5]也發(fā)現(xiàn)FHIT在胃癌組織中表達(dá)減弱或消失，提示FHIT與胃癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)；Hao等[6]報道正常結(jié)腸上皮呈FHIT強(qiáng)表達(dá)，而FHIT低表達(dá)與分化程度降低及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)；另有研究發(fā)現(xiàn)FHIT在不典型增生、原位癌及浸潤性食管鱗癌中的表達(dá)缺失或降低，認(rèn)為FHIT基因表達(dá)缺失在食管癌的發(fā)生發(fā)展中有一定的作用[7]。FHIT在多種腫瘤組織或腫瘤細(xì)胞系中出現(xiàn)表達(dá)的減弱或缺失，使人們開始關(guān)注FHIT基因的功能及其與各種腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇筆者所在醫(yī)院2007-03~2009-11資料完整、診斷明確的乳腺癌根治術(shù)標(biāo)本50例（浸潤性導(dǎo)管癌48例，導(dǎo)管原位癌2例），分別取腫瘤組織和距離腫瘤5 cm以外的相對正常乳腺組織進(jìn)行FHIT表達(dá)的對照分析。50例均經(jīng)病理證實(shí)，所有患者術(shù)前均未經(jīng)放、化療。50例均為女性患者，年齡32~69歲，平均42歲。組織學(xué)分級：Ⅰ級21例，Ⅱ級17例，Ⅲ級12例；TNM分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期27例，Ⅲ期18例。腫瘤直徑≤2 cm者28例，＞2 cm者22例。平均每例查檢淋巴結(jié)13枚，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者27例，無轉(zhuǎn)移者23例。

1.2 主要試劑 兔抗人FHIT、PR單克隆抗體，鼠抗人ER單克隆抗體，SP法免疫組化檢測試劑盒，DAB顯色試劑盒，均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 所有常規(guī)石蠟包埋的組織標(biāo)本，4 μm連續(xù)切片，進(jìn)行免疫組化及常規(guī)HE染色。以試劑盒自帶的陽性片為陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。

1.4 結(jié)果判定 FHIT陽性反應(yīng)定位于胞漿上，ER及PR陽性反應(yīng)定位于胞核上，胞質(zhì)染成棕黃色為陽性細(xì)胞。每張切片觀察5個具有代表性的高倍視野，計(jì)數(shù)500個細(xì)胞中的陽性細(xì)胞。依據(jù)1996-05北京舉辦的“全國免疫組織化學(xué)技術(shù)及診斷標(biāo)準(zhǔn)化專題研討會”標(biāo)準(zhǔn)，按陽性細(xì)胞所占比例數(shù)進(jìn)行分級：≤25%為 （－），26%～50%為 （+），51%～74%為（++），≥75%為（+++）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 運(yùn)用 SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件包作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。對相關(guān)資料進(jìn)行卡方檢驗(yàn)、線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 FHIT在乳腺癌和相對正常乳腺組織的表達(dá)檢測發(fā)現(xiàn)FHIT表達(dá)在上皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)，表達(dá)物為棕黃色顆粒（圖1、2）。用PBS代替一抗作陰性對照，未見FHIT的表達(dá)。相對正常乳腺組織50例中有44例FHIT陽性表達(dá)，總陽性率為88.0%；50例乳腺癌組織中有16例呈陽性表達(dá)，總陽性率為32.0%。對兩組乳腺組織的表達(dá)陽性率進(jìn)行分析，經(jīng)卡方檢驗(yàn)，有顯著性差異（P<0.01），表明FHIT在乳腺癌組織中的表達(dá)陽性率明顯低于相對正常乳腺組織。

2.2 乳腺癌和相對正常乳腺組織中FHIT表達(dá)與腫瘤臨床病理特征的關(guān)系 見表1。

圖1 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中FHIT的表達(dá) IHC×100

圖2 乳腺黏液型腺癌組織中FHIT的表達(dá) IHC×100

表1 FHIT表達(dá)與腫瘤臨床病理特征的關(guān)系

2.3 乳腺癌組織中FHIT表達(dá)與ER、PR表達(dá)的相關(guān)性 檢測發(fā)現(xiàn)ER、PR陽性細(xì)胞的細(xì)胞核呈棕黃色 （圖3、4）。16例FHIT表達(dá)陽性乳腺癌組織中，ER表達(dá)陽性13例，陰性3例，陽性表達(dá)率為81.3%；34例FHIT表達(dá)陰性的乳腺癌組織中，ER表達(dá)陽性16例，陰性18例，陽性表達(dá)率為47.6%；FHIT與ER一致表達(dá)者共31例，占62.0%。通過線性相關(guān)性分析得出FHIT和ER在乳腺癌組織的表達(dá)相關(guān)（χ2=5.221，P<0.05，r=0.307）；FHIT表達(dá)陽性乳腺癌組織中，PR表達(dá)陽性12例，陰性4例，陽性表達(dá)率為75.0%；FHIT表達(dá)陰性的乳腺癌組織中，PR表達(dá)陽性13例，陰性21例，陽性表達(dá)率為38.2%；FHIT與PR一致表達(dá)者共33例，占66.0%。通過相關(guān)性分析得出FHIT表達(dá)與PR表達(dá)相關(guān)（χ2=6.127，P<0.05，r=0.330）。

圖3 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中ER的表達(dá) IHC×200

圖4 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中PR的表達(dá) IHC×400

3 討 論

基因變異是腫瘤侵襲性生長的一個顯著標(biāo)志，若能將脆性位點(diǎn)上發(fā)生的斷裂與基因的變異聯(lián)系起來，則可將脆性位點(diǎn)與腫瘤聯(lián)系起來。FHIT就是第一個將脆性位點(diǎn)和腫瘤聯(lián)系起來的抑癌基因，并且FHIT基因異常是腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中的早期事件。FHIT基因在多種腫瘤中，包括食管癌、胃癌、結(jié)腸癌、肺癌、肝癌、宮頸癌中，均有改變，以缺失為主，包括外顯子和（或）內(nèi)含子的缺失，還可有外源序列的插入。

本研究采用免疫組化SP法檢測50例乳腺癌及相對正常乳腺組織中FHIT的表達(dá)，結(jié)果顯示，F(xiàn)HIT在乳腺癌組織中的陽性率明顯低于其在相對正常乳腺組織中的陽性率，表明乳腺癌組織中存在FHIT表達(dá)缺失或降低，與邵霞等[8]的研究結(jié)果相似。提示由于FHIT表達(dá)降低，其抑癌作用減弱，失去了對乳腺上皮增生癌變的抑制作用，因此FHIT基因表達(dá)減少與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。FHIT基因缺失與腫瘤的大小、臨床分期及組織學(xué)分級無關(guān)。本文結(jié)果顯示，乳腺癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的FHIT表達(dá)陽性率為44.4%，與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。此結(jié)果與Yang等[9]的觀點(diǎn)相似，即FHIT表達(dá)與乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。

ER、PR的表達(dá)是乳腺癌重要的預(yù)后因素和預(yù)測激素治療反應(yīng)的參數(shù)。ER、PR的表達(dá)和乳腺癌組織學(xué)分級、臨床病理分期有著密切關(guān)系，同時可指導(dǎo)臨床應(yīng)用內(nèi)分泌治療。本文結(jié)果表明，F(xiàn)HIT表達(dá)與ER、PR表達(dá)存在相關(guān)性（P＜0.05）。有研究表明，3p14.2區(qū)域的雜合性缺失與ER、PR表達(dá)缺失高度相關(guān)，與本文結(jié)果一致，提示在乳腺癌的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移過程中，包括有FHIT基因的3p14.2區(qū)的某種特異基因改變或FHIT表達(dá)缺失與雌激素失調(diào)之間存在一定的聯(lián)系。提示同時檢測乳腺癌中FHIT基因與ER表達(dá)狀況更有助于對乳腺癌的侵襲性和雌激素抵抗的預(yù)測。

綜上所述，乳腺癌中FHIT表達(dá)明顯降低，提示FHIT表達(dá)異常在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中可能起著重要的作用，F(xiàn)HIT和ER、PR一樣可用免疫組化方法檢測，所以可以對乳腺癌高危人群的乳腺活檢組織進(jìn)行FHIT的檢測，在對乳腺癌高危人群的篩選方面具有一定的意義。FHIT與ER、PR之間有相關(guān)性，聯(lián)合檢測對于乳腺癌診斷及惡性程度判定有一定的意義。

[1]Ohta M,Inoue H,Cotticelli MG,et al.The FHIT gene,spanning the chromosome 3p14.2 fragile site and renal carcinoma associatedt(3;8)break point is abnormal in digestive tract cancer[J].Cell,1996,84(4):587-597.

[2]Sozzi G,Veronese ML,Negrini M,et al.The FHIT gene at 3p14.2 is abnormal in lung cancer[J].Cell,1996,85(1):17-26.

[3]Vecchione A,Zanesi N,Trombetta G,et al.Gervical dysptasia,ploidy and human papillomavirus status correlate with loss of FHIT expression[J].Clin Cancer Res,2001,7(5):1306-1312.

[4]Huiping C,Kristjansdottir S,Bergthorsson JT,et al.High frequency of LOH,MSI and abnormal expression of FHIT in gastric cancer[J].Eur J Cancer,2002(38):728-735.

[5]王 萍,劉德純,姚 敏,等.脆性組氨酸三聯(lián)體基因蛋白表達(dá)與胃癌臨床關(guān)系[J].臨床消化病雜志,2002,14(2):57-59.

[6]Hao XP,Willis JE,Pretlow TG,et al.Loss of fragile histidine triad expression in colorectal carcinomas and premalignant lesions[J].Cancer Res,2000,60(1):18-21.

[7]Kitamura A,Yashima K,Okamoto E,et al.Reduced FHIT expression occurs in the early stage of esophageal tumor rigenesis:nocorrelation with p53 expression and apoptosis[J].Oncology,2001,61(3):205-211.

[8]邵 霞，王修珍.抑癌基因FHIT在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義[J].蘇州大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2008，28(4)：614-616.

[9]Yong Q,Nakamura M,Nakamura Y,et al.Two-hit inactivation of FHIT by loss of heteroygosity and hypermethylation in breast cancer[J].Clinical Cancer Res,2002,8(9):2890-2893.