孫民

CL-BIII殘留農(nóng)藥測(cè)定儀快速測(cè)定蔬菜農(nóng)殘技術(shù)

孫民

孫民，青海西寧市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中心，810008，電話：13709761950，E-mai1：sunmin1994@163.com

我國(guó)是農(nóng)藥使用大國(guó)，年使用量80萬～100萬t，居世界首位，由農(nóng)藥殘留引起的食物中毒事故屢有發(fā)生，主要有在蔬菜、瓜果上使用高毒農(nóng)藥后短時(shí)間內(nèi)采摘和食用所引起的急性中毒和農(nóng)藥殘留量超過最高允許限量（MRL值）長(zhǎng)期食用引起的慢性中毒2種。由于農(nóng)藥品種結(jié)構(gòu)不合理，加上一些人為的不合理使用，以及農(nóng)藥殘留監(jiān)管力度不夠，致使我國(guó)農(nóng)藥殘留問題比較突出。由于高毒、高殘留的有機(jī)磷農(nóng)藥，如對(duì)硫磷、甲基對(duì)硫磷、樂果、氧化樂果、敵敵畏及甲胺磷等占據(jù)了殺蟲劑產(chǎn)量的70%以上，造成70%以上的中毒事故由有機(jī)磷農(nóng)藥引起，直接影響人民身體健康和農(nóng)產(chǎn)品在國(guó)際市場(chǎng)的競(jìng)爭(zhēng)力，并已經(jīng)成為國(guó)家領(lǐng)導(dǎo)和社會(huì)公眾高度重視和廣泛關(guān)注的問題。隨著我國(guó)人民物質(zhì)生活水平的不斷提高及市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)和世界經(jīng)濟(jì)貿(mào)易一體化的不斷推進(jìn)，農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量安全問題日益突出，尤其是農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留量超標(biāo)問題，因此，農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)是保護(hù)人民生命安全，提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量和品牌效應(yīng)，增強(qiáng)農(nóng)產(chǎn)品市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力的有效途徑。

1 農(nóng)藥殘留酶抑制率法的概念

農(nóng)藥殘留是農(nóng)藥使用后殘存在生物體和環(huán)境中的微量農(nóng)藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質(zhì)的總稱。其含量以mg/kg表示。

酶抑制率法指根據(jù)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)乙酰膽堿酯酶活性的抑制作用，通過計(jì)算待測(cè)樣品對(duì)乙酰膽堿酯酶活性的抑制率，定性判斷其中是否含有有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥及其存在總量的一種快速初篩方法。

2 儀器主要用途和原理

CL-BIII八通道型殘留農(nóng)藥測(cè)定儀，主要用于測(cè)定果蔬中有機(jī)磷類與氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留量。

CL-BIII殘留農(nóng)藥測(cè)定儀和所配套的試劑依據(jù)的是中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 5009.199－2003 《蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè)》。該標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)酶的活性變化程度，定性和半定量地測(cè)定果蔬中農(nóng)藥的殘留量，并用抑制率來表示殘留農(nóng)藥量的多少。若被測(cè)樣本的酶抑制率＜50%，屬于陰性，為安全果蔬；若被測(cè)樣本的酶抑制率≥50%，屬于陽性，為農(nóng)藥殘留的毒性超標(biāo)，建議重復(fù)檢測(cè)2次，如再超標(biāo)可送有關(guān)部門作進(jìn)一步的化學(xué)分析檢測(cè)。

3 試劑配制

提取液配制：把甲乙粉末倒入大玻璃瓶中，加入510 mL蒸餾水或純凈水溶解。

酶試劑配制：用移液槍取3.1 mL提取液，加入酶試劑瓶中。

顯色劑配制：取2.5 mL提取液，倒入棕色顯色劑瓶中，重復(fù)2次，再往棕色瓶中直接加15 mL提取液，總?cè)莘e為20 mL。

底物配制：用移液槍取3.1 mL蒸餾水或純凈水，加入底物瓶中。

4 檢測(cè)分析過程

4.1 開機(jī)

接通農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀電源，按兩次“確定”鍵，然后按“設(shè)置”鍵，再按“確定”把光標(biāo)選到“受控”，按“確定”，此時(shí)儀器會(huì)出現(xiàn)“正處于受控工作模式”字樣，表明儀器與電腦已正常連接，打開檢測(cè)軟件。

4.2 正確取樣

稱樣時(shí)，蔬菜樣品不能剪切得太小，以2 cm×2 cm為好；對(duì)于顏色深的蔬菜盡量取莖、葉各一半為好；對(duì)于果品，可以順皮削下一塊或取皮下部分；對(duì)于有味蔬菜可以使用檢測(cè)軟件的對(duì)照標(biāo)樣庫(kù)來檢測(cè)；而蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、芫荽、茭白、蘑菇及番茄汁液中含有對(duì)酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性，處理這類樣品時(shí)，可采取整棵蔬菜萃取或采用表面測(cè)定法；對(duì)一些葉綠素含量較高的蔬菜，也可采取整株蔬菜萃取的方法，減少色素的干擾。另外，所測(cè)試樣的不同部位農(nóng)藥殘留情況不同，為準(zhǔn)確反映該樣品的農(nóng)藥殘留情況，取樣必須有代表性，不可以點(diǎn)代面。

4.3 提取殘留液

用天平稱取 1 g果蔬，剪成（1～2） cm×（1～2） cm放入燒杯中，用大移液槍抽取5 mL提取液加入到燒杯中，靜置15 min，得到的清液即為樣品殘留液。再用大移液槍從中抽取2.5 mL浸泡液放入試管中備用，有條件的最好選用振蕩器，以消除人為因素的干擾及樣品處理的時(shí)間。

4.4 空白對(duì)照溶液測(cè)試

用大移液槍抽取2.5 mL提取液放入試管中，用小移液槍取0.1 mL酶試劑加入試管中，再用小移液槍取0.1 mL顯色劑加入試管中，用小移液槍取0.1 mL底物加入試管中，迅速搖勻并倒入比色皿，放入比色池，按“對(duì)照”鍵，等待結(jié)束。反應(yīng)測(cè)試時(shí)間為3 min，測(cè)試時(shí)間確定后，樣品處理液測(cè)試時(shí)間與之相同。結(jié)果顯示對(duì)照溶液反應(yīng)吸光度變化值△A0。

4.5 樣品處理液測(cè)試

用小移液槍取0.1 mL酶試劑加入有樣品殘留液的試管中，再用小移液槍取0.1 mL顯色劑加入試管中，靜置15 min，用小移液槍取0.1 mL底物加入試管中，迅速搖勻并倒入比色皿，放入比色池，按“開始樣品分析”鍵，等待結(jié)束。結(jié)果顯示樣品溶液反應(yīng)吸光度變化值A(chǔ)t和其酶抑制率A%。

4.6 結(jié)果判定

抑制率（A）計(jì)算：A（%）=[（ΔA0-ΔAt）/ΔA0]×100%。

結(jié)果判定：結(jié)果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。當(dāng)蔬菜樣品提取液對(duì)酶的抑制率≥50%時(shí)，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在，樣品為陽性結(jié)果。陽性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗(yàn)2次以上。

5 檢測(cè)注意事項(xiàng)

①檢測(cè)儀在每次開機(jī)后檢測(cè)前需先調(diào)零，然后放置比色皿開始檢測(cè)，不可倒置。在測(cè)試樣品前，都要先做一次對(duì)照測(cè)試。若對(duì)照測(cè)量后，有關(guān)機(jī)重啟，則需重新測(cè)量對(duì)照。

②移液器使用時(shí)，必須遵循器具專用原則，吸取酶、顯色劑、底物時(shí)分別使用不同的移液器。移液器的槍頭不能互相污染，都要各自貼上標(biāo)簽，移取試劑時(shí)要一一對(duì)應(yīng)使用。禁止混用，以免造成試劑污染。轉(zhuǎn)移或滴加液體要準(zhǔn)確，釋放液體要徹底。在移液槍將試劑加入檢液時(shí)，一定要保證槍頭垂直于液面，不能將試劑加到試管壁上。

③已配制完的試劑應(yīng)按照要求，放在冰箱保鮮層中貯存，切勿凍結(jié)。使用前搖勻，并恢復(fù)至室溫。為防止試劑變質(zhì)失效，配制過的溶液可采取分裝制，即取即用。測(cè)試時(shí)，從任何試劑瓶中吸出的試劑；必須堅(jiān)持只出不進(jìn)的原則，禁止再次注射回試劑瓶，防止污染整瓶試劑。

④在加酶試劑顯色反應(yīng)時(shí)，對(duì)照測(cè)量和樣品測(cè)量加入的量和測(cè)試時(shí)間一定要一致，且速度盡量快。嚴(yán)格把握對(duì)照液配制到入檢測(cè)儀這段時(shí)間的長(zhǎng)短。加入底物后立即檢測(cè)，否則速度太慢會(huì)導(dǎo)致偏差。

⑤操作檢測(cè)儀時(shí)，必須注意比色皿通光面不能受到手指或油跡等污染，如有臟物可用擦鏡紙擦拭干凈。每次放入比色皿必須保持比色皿方向一致，不能反向，放置的位置也應(yīng)保持一致，緊靠一個(gè)定位面，不能歪斜，所有溶液和藥品，不能灑在儀器外殼或測(cè)量室內(nèi)。

2011-08-22快速農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)是保護(hù)人民生命安全，提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量和品牌效應(yīng)，增強(qiáng)農(nóng)產(chǎn)品市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力的有效途徑。常用CL-BIII八通道殘留農(nóng)藥測(cè)定儀測(cè)定果蔬中有機(jī)磷類與氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留量，為確保結(jié)果的準(zhǔn)確性，使用該儀器檢測(cè)時(shí)有五點(diǎn)請(qǐng)注意：開機(jī)后檢測(cè)前需先調(diào)零；遵循器具專用原則；配的試劑放在冰箱保鮮層中貯存，使用前搖勻并恢復(fù)至室溫；對(duì)照和測(cè)樣的顯色反應(yīng)保持一致且快速；比色皿通光面不能受到手指或油跡等污染。