林 霄 劉布鳴 張寧寧 劉 元

廣西中醫(yī)藥研究院 廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530022

木蘭科植物八角茴香Illicium verum Hook.f.主要產(chǎn)于廣西、云南［1］，其新鮮枝葉或成熟果實(shí)經(jīng)水蒸氣蒸餾可得到八角茴香油［2］，臨床上用于溫陽(yáng)散寒，理氣止痛，用于寒疝腹痛，腎虛腰痛，胃寒嘔吐，脘腹冷痛［2］。八角茴香油的主要成分為反式茴香腦。文獻(xiàn)報(bào)道的八角茴香油中反式茴香腦的測(cè)定方法多采用填充柱氣相色譜法或氣質(zhì)聯(lián)用色譜法［3－5］，而以內(nèi)標(biāo)法計(jì)算的毛細(xì)管柱氣相色譜法未見(jiàn)報(bào)道，且作為八角茴香油原料的八角枝葉亦鮮見(jiàn)有含量測(cè)定方面的報(bào)道?？刂瓢私擒钕阌偷馁|(zhì)量首先就需從原料抓起。本實(shí)驗(yàn)采用毛細(xì)管柱氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定八角枝葉中反式茴香腦的含量，結(jié)果表明，本法快速、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性和分離效果好，可作為八角枝葉質(zhì)量控制的測(cè)定方法。

1 儀器、試藥與試樣

美國(guó)安捷倫7890A氣相色譜儀。反式茴香腦對(duì)照品(trans－Anethol)，Lot:10370，含量≥99.0%，購(gòu)自美國(guó)Sigma－Aldich Fluka公司;環(huán)己酮 (批號(hào)20070205)，分析純，天津市福晨化學(xué)試劑廠，含量≥99%。水為蒸餾水，其余所用試劑均為分析純。樣品:八角茴香枝葉，采自廣西金秀、馬山、大新，廣西中醫(yī)藥研究院中藥所提供，經(jīng)黃云峰助理研究員鑒定為木蘭科植物八角茴香Illicium verum Hook.f.。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:HP－INNOWAX(相當(dāng)于PEG－20M)毛細(xì)管柱，內(nèi)徑 0.32mm，柱長(zhǎng)為 30m，膜厚0.50μm。程序升溫:初溫90℃，以每分鐘5℃的速率升溫至140℃，再以每分鐘10℃的速率升溫至200℃，保持5分鐘;分流進(jìn)樣，分流比為10∶1。進(jìn)樣口溫度:230℃;FID檢測(cè)器溫度:230℃。進(jìn)樣量1.0μl，理論板數(shù)按環(huán)己酮峰計(jì)算大于50000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 稱(chēng)取反式茴香腦對(duì)照品約5g，精密稱(chēng)定，得5.0917g，置50ml量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，即得 (101.834mg/ml)。

2.3 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取環(huán)己酮約2.5g，精密稱(chēng)定，得2.5146g，置50ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液 (50.292mg/ml)。

2.4 供試品溶液的制備 取八角枝葉粉末約4g，精密稱(chēng)定，置500mL蒸餾瓶中，加水300ml，于電熱套蒸餾至揮發(fā)油不再增加為止，揮發(fā)油測(cè)定器中蒸餾液用乙酸乙酯萃取3次，每次10ml，合并萃取液，置50ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍考察 精密吸取反式茴香腦對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分別置50ml量瓶中，各精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件，進(jìn)樣1.0μl，測(cè)定，以茴香腦與環(huán)己酮的峰面積積分值之比為縱坐標(biāo)，茴香腦進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，得回歸方程Y=1.0579 X－0.006，r=0.9994，說(shuō)表明茴香腦進(jìn)樣量在0.2037～2.0367μg范圍內(nèi)良好的線形關(guān)系。

2.6 校正因子測(cè)定 精密稱(chēng)取上述反式茴香腦對(duì)照品溶液0.6ml置50ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為校正因子測(cè)定溶液 (含反式茴香腦 1.222mg/ml，環(huán)己酮 1.0058mg/ml)。吸取1.0μl，注入氣相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算校正因子。結(jié)果校正因子為0.9450，RSD=1.95%(n=6)。

2.7 精密度試驗(yàn) 分別吸取同一供試品溶液，進(jìn)樣6次，依次測(cè)定，以茴香腦峰面積積分值對(duì)環(huán)己酮峰面積積分值的比值計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，測(cè)得平均值為0.9706，RSD=0.35%。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次八角枝葉 (廣西金秀)，按供試品溶液制備方法制備6份，分別進(jìn)樣，測(cè)得反式茴香腦平均值為1.11%(g/g)，RSD=1.36%。

2.9 加樣回收試驗(yàn) 取已測(cè)知含量 (1.11%)的八角枝葉(廣西金秀)6份，每份2g，精密稱(chēng)定，加入反式茴香腦對(duì)照品溶液0.2ml，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，再按上述色譜條件進(jìn)樣1.0μl，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.10 樣品測(cè)定 按供試液的制備及檢測(cè)方法，分別測(cè)定3個(gè)產(chǎn)地批號(hào)的樣品，結(jié)果見(jiàn)表2。

反式茴香腦含量 (%)(g/g)為1.09，1.08，1.11。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

本分析方法采用了毛細(xì)管氣相色譜法和內(nèi)標(biāo)校正因子法測(cè)定八角枝葉中反式茴香腦的含量，毛細(xì)管氣相色譜法具有樣品用量少的優(yōu)點(diǎn)，且采用內(nèi)標(biāo)法可減少實(shí)驗(yàn)誤差。研究結(jié)果表明，毛細(xì)管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可為八角茴香枝葉的質(zhì)量控制方法提供參考。

［1］國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草［M］.上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1998，450.

［2］中華人民共和國(guó)藥典 (一部)［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010，4.

［3］曹冠雄，陳素珍，王宗廉等.八角茴香油化學(xué)成分的毛細(xì)管氣相色譜質(zhì)譜測(cè)定［J］.中草藥，1983，14(9):19.

［4］李壽芬，劉紹華.岑溪優(yōu)質(zhì)八角茴香油的化學(xué)成分［J］.廣西植物，(20)(1):69－70.

［5］黃智波，劉布鳴，梁凱妮.氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定八角茴香油中茴香腦的含量［J］.廣西中醫(yī)藥，2005，28(3):56－57.