古麗克孜·阿日甫 李暮春 古力娜孜·熱西提

新疆維吾爾自治區(qū)分析測試研究院，新疆 烏魯木齊 830011

黃花柳 (Salix caprea L)為楊柳科柳屬植物 Salicaceae salix L。主要分布于我國新疆。長期以來在新疆維吾爾醫(yī)學(xué)中就作為藥物使用，主要用于治療冠狀動脈粥樣硬化性心臟病，高血壓，抗菌、抗病毒、解熱、消炎、止痛、消腫、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、黃疸性肝炎等［1]。有關(guān)柳屬植物的化學(xué)成分研究，國內(nèi)外已有些報道，但就新疆黃花柳葉藥材而言，其總黃酮含量的研究尚未見報道。為了初步了解新疆維吾爾醫(yī)藥材黃花柳葉的藥效與總黃酮含量的關(guān)系，本研究參照乙醇回流提取法，對采自新疆和田地區(qū)的藥用黃花柳葉中總黃酮的最佳提取條件進行了研究，在最佳提取條件下，對黃花柳葉總黃酮含量進行了測定。其黃花柳葉中總黃酮含量為4.17%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.41%，最佳提取條件適合該藥材的提取。

1 材料與方法

1.1 材料

黃花柳葉采自新疆和田維吾爾醫(yī)醫(yī)院的栽培基地，由和田維吾爾醫(yī)院主任醫(yī)師巴克阿力木鑒定，采后自然陰干，粉粹使用。

1.2 儀器設(shè)備

HP－8452A型紫外可見見光光度計 (美國惠譜)，電子天平 (北京賽多利天平有限公司)，微型植物試樣粉碎機(河北省黃華市新興電器長)，電熱恒溫水浴鍋 (京泰克儀器有限公司)。

1.3 試劑

蘆丁 (中國藥品物制品檢定所)，乙醇，亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉，均為分析純。

2 實驗方法

2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)試劑20.7 mg用50%的乙醇溶解，并完全移入100mL容量瓶中，用50%的乙醇稀釋至刻度，得到濃度為0.207 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.2 最大吸收波長的選擇

取上述蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液2.5 mL于25ml具塞試管中，用50%的乙醇至10 mL，加入5%NaNO20.6mL，搖勻，放置6min;加入10%Al(NO3)30.6mL，搖勻，放置6min后加入4%的 NaOH 4mL，搖勻，再用50%的乙醇定容至刻度，均勻，放置15min。以相應(yīng)的溶液為空白，照分光光度法在430～700nm波長范圍內(nèi)掃描吸收度。由曲線可知，波長在503nm處為最大吸收。

2.3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別取上述蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3，3.5mL于25mL具塞試管中，用50%的乙醇至10mL，加入5%NaNO20.6mL，搖勻，放置6min;加入10%Al(NO3)30.6mL，搖勻，放置6min后加入4%的NaOH 4mL，搖勻，再用50%的乙醇定容至刻度，均勻，放置15min。以相應(yīng)的溶液為空白，照分光光度法在503 nm處測定吸光度。以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線良好線性關(guān)系 (r=0.9974)。見圖1。

3 結(jié)果與分析

3.1 乙醇濃度對提取的影響

精確稱取5份 (4.00g)柳樹葉，分別加入體積分?jǐn)?shù)為50%，60%，70%，80%，90%乙醇各為120mL，在60℃水浴中回流3小時，趁熱過濾，冷卻后，轉(zhuǎn)移到250mL的容量瓶中稀釋至刻度，取各1mL至25mL具塞試管補充10mL各自的溶劑后分別加入5%NaNO20.6mL，搖勻，放置6min;加入10%Al(NO3)30.6mL搖勻，放置6min后加入4%的NaOH 4mL，搖勻，再用各自的溶劑定容至刻度，均勻，放置15min后在503 nm波長處分別測定吸光度。吸光度 (A) 為 0.1014，0.0080，0.0322，0.0114，0.0035。從實驗中可以看出：50%乙醇的吸光值最大，所以乙醇濃度確定在50%。

3.2 回流時間對提取的影響

精確稱取5份 (4.00g)柳樹葉，加50%120mL的乙醇，在60℃水浴中回流1，1.5，2.0，2.5，3小時，趁熱過濾，冷卻后，按照3.1的方法分別測定吸光度。吸光度(A) 為：0.1101，0.1037，0.0838，0.0804，0.0771。實驗結(jié)果表明：當(dāng)回流時間為1 h時，提取效果最好。而當(dāng)時間繼續(xù)延長時，總黃酮含量反而降低，這可能是回流時間太長，有部分乙醇被揮發(fā)而導(dǎo)致沸點逐漸增大，從而破壞某些黃酮類化合物。

3.3 回流溫度對提取的影響

精確稱取5份 (4.00g)柳樹葉，加50%乙醇120ml分別在20℃，30℃，50℃，70℃，80℃水浴中回流1小時趁熱過濾，冷卻及在室溫下放1個小時過濾后，按照3.1的方法進行測定，吸光度 (A)為：0.0477，0.0871，0.1221，0.1757，0.1674。結(jié)果可見，70℃的黃酮提取率高。

3.4 料液比對提取的影響

精確稱取4份 (4.00g)柳樹葉，加50%乙醇80 mL，120mL，160mL，200mL，料液比分別為1：20，1：30，1：40，1：50在70℃水浴中回流1小時，趁熱過濾，冷卻后，按照3.1的方法進行測定，吸光度 (A)為：0.1025，0.1345，0.1105，0.0969。結(jié)果表明，料液比在1∶30時的值最大值，因此選擇料液比1∶30為考慮對象。

3.5 黃花柳葉中總黃酮的測定結(jié)果

精確稱取5份 (4.00g)柳樹葉，加50%乙醇120mL料液比分別為1：30在70℃水浴中回流1小時，趁熱過濾，冷卻后，按照3.1的方法進行測定，結(jié)果見表1。

表1 黃花柳葉中總黃酮的測定結(jié)果 (n=5)

4 結(jié)論

試驗結(jié)果表明：影響黃酮類物質(zhì)提取量的因素主次順序為：提取溫度＞乙醇濃度＞回流時間＞料液比。確定了黃花柳葉中總黃酮的最佳條件為：乙醇濃度為50%，回流時間為1小時，料液比1：30，回流溫度為70℃。在最佳條件下的總黃酮得率4.17%。結(jié)果表明：新疆黃花柳葉中總黃酮的含量較高，達到4.17%，這說明黃花柳葉之所以有抗心臟病，高血壓，抗菌消炎、解熱、止痛、消腫、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、黃疸性肝炎等作用與其中所含的黃酮類化合物具有密切關(guān)系。下一步將進一步考察黃花柳葉藥材的藥理活性，為開發(fā)新疆黃花柳葉的藥用價值提供科學(xué)依據(jù)。

［1]古麗克孜·阿日甫，李慕春，楊飛．新疆維吾爾醫(yī)藥藥材黃花柳葉中鞣質(zhì)含量的測定［J]．中國民族民間醫(yī)藥，2009，10(18)：39－40．

［2]孫慧麗，艾來提·蘇里坦，買吾蘭·買提努爾等．黃花柳花中總黃酮含量的研究［J]．新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，45(1)：84－87．

［3]古麗克孜·阿日甫，阿依古麗·塔西．新疆維吾爾藥材黃花柳中無機元素的測定［J]．藥物分析雜志，2008，28(11)：1880－1882．