張董燕 季海峰 王 晶 王四新 劉 輝 單達(dá)聰 劉蘋蘋 王雅民

(北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100097)

豬源羅伊氏乳酸桿菌對斷奶仔豬生長性能和血清指標(biāo)的影響

張董燕 季海峰*王 晶 王四新 劉 輝 單達(dá)聰 劉蘋蘋 王雅民

(北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100097)

本研究旨在探討在飼糧中添加豬源羅伊氏乳酸桿菌(Lactobacillus reuteri)對斷奶仔豬生長性能和血清指標(biāo)的影響。選用平均體重為(16.57±0.23)kg的斷奶仔豬(杜洛克×長白×大白三元雜交)64頭，隨機(jī)分成4組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4頭。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組飼糧分別在基礎(chǔ)飼糧中添加0.25%、0.50%、0.75%的豬源羅伊氏乳酸桿菌，試驗(yàn)期為30 d。結(jié)果表明:1)添加0.50%和0.75%豬源羅伊氏乳酸桿菌組斷奶仔豬平均日增重分別比對照組提高了7.56%(P＜0.05)和20.07%(P＜0.05)，料重比分別比對照組降低了1.96%(P＞0.05)和14.90%(P＜0.05);2)飼糧中添加豬源羅伊氏乳酸桿菌能夠極顯著降低斷奶仔豬血清中白蛋白與球蛋白比值(P＜0.01)，并極顯著增加血清中干擾素γ含量(P＜0.01);3)添加0.50%和0.75%豬源羅伊氏乳酸桿菌組斷奶仔豬血清中結(jié)合珠蛋白含量分別比對照組降低了8.79%(P＜0.05)和9.34%(P＜0.05)。結(jié)果提示，飼糧中添加豬源羅伊氏乳酸桿菌能夠提高斷奶仔豬機(jī)體免疫能力，而當(dāng)其達(dá)到一定添加劑量時(shí)，對于提高斷奶仔豬生長性能的效果表現(xiàn)明顯。

豬源羅伊氏乳酸桿菌;斷奶仔豬;生長性能;血清指標(biāo)

一直以來，人們選擇使用抗生素進(jìn)行動物疾病的治療或預(yù)防，這造成動物腸道的微生態(tài)系統(tǒng)長期處于失衡狀態(tài)，直接影響到動物的健康生長及畜產(chǎn)品的安全。隨著歐盟等國對抗生素的禁止使用，尋求替代抗生素的綠色添加劑越來越受到人們的關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌能夠通過促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收、抑制病原菌、降低腸內(nèi)pH、加固非特異性腸內(nèi)屏障等方式促進(jìn)豬的生長和健康［1］。其中，羅伊氏乳酸桿菌(Lactobacillus reuteri)是普遍存在于人和動物腸道的有益乳酸桿菌，已有研究表明該菌可定植于動物腸道內(nèi)，代謝可產(chǎn)生乳酸、乙酸等物質(zhì)，有抑制腸道有害菌生長和繁殖的作用［2］。另有研究認(rèn)為，羅伊氏乳酸桿菌能夠發(fā)酵甘油產(chǎn)生一種廣譜抗菌劑——reuterin，當(dāng)reuterin濃度不超過7.5 mmol/L時(shí)就能夠抑制腸道大部分細(xì)菌(乳酸菌除外)的生長［3-4］，該菌被認(rèn)為是唯一能夠?qū)闹鳟a(chǎn)生廣譜抗菌作用的腸道乳桿菌［5］。因此，羅伊氏乳酸桿菌正在越來越受到人們的重視。目前，國外對該菌的研究主要集中在reuterin及其抑菌機(jī)理的分析，國內(nèi)主要用于功能性發(fā)酵乳新型菌種的開發(fā)，而在動物生產(chǎn)中的應(yīng)用較少。在豬生長過程中，斷奶仔豬易受到環(huán)境、營養(yǎng)、心理等多方面的應(yīng)激，這些應(yīng)激會造成消化道微生態(tài)功能紊亂，并使得機(jī)體對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力降低，甚至發(fā)生腹瀉等疾病，嚴(yán)重影響著仔豬的生長。因此，斷奶仔豬生產(chǎn)被認(rèn)為是整個(gè)養(yǎng)豬過程中最重要的環(huán)節(jié)之一。為此，本試驗(yàn)選用斷奶仔豬為試驗(yàn)動物，將豬源羅伊氏乳酸桿菌應(yīng)用于斷奶仔豬生產(chǎn)中，從仔豬生長性能和血清指標(biāo)兩方面來探討該菌株對仔豬機(jī)體的影響，從而為評價(jià)、分析該菌株對斷奶仔豬的益生作用及促進(jìn)仔豬健康生長奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 菌種

乳酸桿菌由北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所動物營養(yǎng)與繁育研究室保存，分離于60日齡仔豬盲腸黏膜，經(jīng)中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心鑒定為羅伊氏乳酸桿菌，其凍干制劑中活菌數(shù)≥2.0 ×109CFU/g。

1.1.2 試驗(yàn)試劑

豬結(jié)合珠蛋白(pig haptoglobin)ELISA試劑盒購于美國Immunology Consultants公司，豬干擾素γ(sw ine IFN-γ)ELISA試劑盒購于美國Invitrogen生命技術(shù)公司，總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、葡萄糖(GLU)試劑盒購于中生北控生物科技股份有限公司。

1.1.3 主要儀器

ZHWY-2102型全溫震蕩培養(yǎng)箱、發(fā)恩D-1立式蒸汽滅菌鍋、ESCO生物安全柜、HITACHI 7020全自動生化分析儀、TGL-16G高速臺式離心機(jī)、318C酶標(biāo)儀等。

1.2 試驗(yàn)動物及飼糧

試驗(yàn)動物選用杜洛克×長白×大白三元雜交豬，飼糧參照我國《豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》配制，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

選用64頭平均體重(16.57±0.23)kg的斷奶仔豬，隨機(jī)分成4組，每組設(shè)4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4頭。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組飼糧分別在基礎(chǔ)飼糧中添加 0.25% 、0.50% 、0.75% 豬源羅伊氏乳酸桿菌。試驗(yàn)按照豬場常規(guī)飼養(yǎng)管理進(jìn)行，試驗(yàn)在封閉式豬舍內(nèi)進(jìn)行，水泥地面，網(wǎng)床圈養(yǎng)，自由采食，以鴨嘴式飲水器提供充足清潔飲水。免疫、驅(qū)蟲和消毒按豬場規(guī)程進(jìn)行，試驗(yàn)期為30 d。

1.4 樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，從每組隨機(jī)挑選8頭仔豬(每個(gè)重復(fù)2頭)，前腔靜脈采血5 m L，分離血清于-20℃保存，備用。

1.5 生長性能測定

試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)，個(gè)體空腹稱重;每日觀察豬群生長情況，記錄飼料消耗情況，記錄仔豬腹瀉情況;試驗(yàn)結(jié)束后，計(jì)算平均日增重、平均日采食量和料重比。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干物質(zhì))Table1 Composition and nutrient levels of the basal diet(air-dry basis) %

1.6 血清指標(biāo)的測定

血清生化指標(biāo)總蛋白、白蛋白、葡萄糖均采用HITACHI 7020全自動生化分析儀測定，血清免疫指標(biāo)豬結(jié)合珠蛋白和豬干擾素γ采用ELISA試劑盒測定。

1.7 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件中的ANOVA程序進(jìn)行單因素方差分析，Duncan氏法進(jìn)行多重比較，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 生長性能

斷奶仔豬生長性能見表2。由結(jié)果可知，添加0.25%羅伊氏乳酸桿菌組仔豬平均日增重、料重比與對照組相比無顯著差異(P＞0.05)，而添加量達(dá)到0.50%和0.75%時(shí)，斷奶仔豬平均日增重和料重比均有所改善。0.50%組和0.75%組平均日增重分別比對照組提高了7.56%(P＜0.05)和20.07%(P＜0.05)，料重比分別比對照組降低了1.96%(P＞0.05)和 14.90%(P＜0.05)，而 2 組平均日采食量與對照組相比無顯著影響(P＞0.05)。

表2 豬源羅伊氏乳酸桿菌對斷奶仔豬生長性能的影響Table 2 Effect of Lactobacillus reuteri from sw ine on growth performance of weaned piglets

2.2 血清指標(biāo)

2.2.1 血清中總蛋白、白蛋白、球蛋白含量和白球比

斷奶仔豬血清中總蛋白、白蛋白、球蛋白和白球比見表3。與對照組相比，試驗(yàn)組添加豬源羅伊氏乳酸桿菌對斷奶仔豬血清中總蛋白含量無顯著影響(P＞0.05)，但通過添加豬源羅伊氏乳酸桿菌能夠顯著降低斷奶仔豬血清中白球比，試驗(yàn)組與對照組相比差異極顯著(P＜0.01)，3個(gè)試驗(yàn)組之間差異不顯著(P＞0.05)。

表3 豬源羅伊氏乳酸桿菌對斷奶仔豬血清中總蛋白、白蛋白、球蛋白含量及白球比的影響Table 3 Effect of Lactobacillus reuteri from sw ine on serum total protein，album in，globulin content and album in/globulin of weaned piglets

2.2.2 血清中干擾素γ含量

斷奶仔豬血清中干擾素γ含量見表4。3個(gè)試驗(yàn)組斷奶仔豬血清中干擾素γ含量分別比對照組提高了 33.33% 、38.20% 、33.52% ，差異極顯著(P＜0.01)，其中0.50%組血清干擾素 γ 含量顯著高于其他2個(gè)試驗(yàn)組(P＜0.05)。

2.2.3 血清中結(jié)合珠蛋白含量

由表5可知，3個(gè)試驗(yàn)組斷奶仔豬血清中結(jié)合珠蛋白含量隨著飼糧中豬源羅伊氏乳酸桿菌添加劑量的增加而減少，0.75%組最低。0.25%組血清中結(jié)合珠蛋白含量與對照組相比無顯著差異(P＞0.05)，而 0.50% 組和 0.75% 組分別比對照組降低了 8.79%和 9.34%，差異顯著(P＜0.05)。

表4 豬源羅伊氏乳酸桿菌對斷奶仔豬血清中干擾素γ含量的影響Table 4 Effect of Lactobacillus reuteri from sw ine on serum IFN-γcontent of weaned piglets pg/m L

表5 豬源羅伊氏乳酸桿菌對斷奶仔豬血清中結(jié)合珠蛋白含量的影響Table 5 Effect of Lactobacillus reuteri from sw ine on serum haptoglobin content of weaned piglets mg/m L

3 討論

3.1 豬源羅伊氏乳酸桿菌對斷奶仔豬生長性能的影響

仔豬斷奶最易造成腸道微生態(tài)失衡，再加上抗生素的使用，對機(jī)體腸道屏障功能造成破壞，直接影響到豬體的健康生長。而益生菌能夠加固腸道屏障功能，增加小腸絨毛長度和隱窩深度，從而促進(jìn)機(jī)體對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，促進(jìn)仔豬對飼料營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收和健康生長［6-8］。Lee等［9］推薦益生菌在動物飼糧中的最低劑量為106CFU/g，Guerra等［10］則通過試驗(yàn)證明，增加益生菌的添加劑量，能夠促進(jìn)仔豬的增重效果，當(dāng)添加劑量達(dá)109CFU/g時(shí)，其對斷奶仔豬平均日增重效果要好于 Lee等［9］推薦的 106CFU/g。而Nousiainen等［11］則研究指出，對于日齡大一些的豬體而言，飼喂益生菌的效果首先會在提高飼料轉(zhuǎn)化率和機(jī)體免疫力等方面表現(xiàn)出來，而平均日增重效果要差于日齡較小的豬體。本試驗(yàn)選用了斷奶后15 d的仔豬，該階段豬生理特點(diǎn)要比斷奶時(shí)期相對完善，當(dāng)豬源羅伊氏乳酸桿菌添加劑量為0.25%時(shí)，從表觀上看，其平均日增重低于對照組，但經(jīng)生物統(tǒng)計(jì)分析，2組之間無顯著影響，這說明添加劑量較低時(shí)，促進(jìn)平均日增重的效果未能顯示出來，添加劑量為0.50%時(shí)，試驗(yàn)組能夠顯著增加斷奶仔豬平均日增重，尤其當(dāng)劑量達(dá)到0.75%時(shí)，斷奶仔豬平均日增重比對照組提高了20.07%，料重比降低了14.90%，差異顯著(P＜0.05)，其效果要顯著高于其他2個(gè)試驗(yàn)組，分析原因是由于各組之間益生菌活菌數(shù)相差5×106CFU/g飼料，活菌數(shù)增加，其平均日增重效果也出現(xiàn)了較大的改善。但0.50%組和0.75%組仔豬平均日采食量與對照組相比無顯著差異，這說明豬源羅伊氏乳酸桿菌對斷奶仔豬平均日增重的提高主要是通過提高飼料利用效率來實(shí)現(xiàn)的，這與Nousiainen等［11］所認(rèn)為的益生菌能夠有效促進(jìn)較大日齡豬群的飼料轉(zhuǎn)化率的報(bào)道是一致的，而關(guān)于該菌是否能夠提高機(jī)體免疫力方面的研究將另文進(jìn)一步闡述。

3.2 豬源羅伊氏乳酸桿菌對斷奶仔豬血清指標(biāo)的影響

3.2.1 對血清中總蛋白、白蛋白、球蛋白含量及白球比的影響

正常情況下，動物機(jī)體保持正常的生理生化指標(biāo)，而當(dāng)由于某種原因引起代謝加強(qiáng)或減弱，甚至發(fā)生代謝障礙或代謝紊亂時(shí)，就會改變機(jī)體代謝的原有動態(tài)平衡，甚至出現(xiàn)病癥，而這些變化首先反映在血清生化指標(biāo)上。血清中總蛋白為球蛋白和白蛋白之和，其中，白蛋白由肝臟合成，是機(jī)體蛋白質(zhì)來源之一，而球蛋白源于B細(xì)胞轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞后分泌而成，白蛋白與球蛋白的比值(白球比)可反映機(jī)體的抵抗力，該值的降低，說明更多的球蛋白合成用于提高機(jī)體免疫機(jī)能。張永勇［12］研究指出，復(fù)合益生菌能夠降低斷奶仔豬血清白球比，從而提高斷奶仔豬機(jī)體免疫力。本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，飼糧中添加豬源羅伊氏乳酸桿菌能夠提高斷奶仔豬血清球蛋白的含量，降低白球比，提高其免疫力，從而促進(jìn)豬的生長。

3.2.2 對血清中干擾素γ含量的影響

細(xì)胞因子是機(jī)體免疫的重要調(diào)節(jié)劑，它能夠調(diào)節(jié)全身系統(tǒng)免疫，是判斷機(jī)體免疫功能的重要指標(biāo)。研究認(rèn)為，乳酸菌進(jìn)入消化道后被腸內(nèi)特有的M細(xì)胞攝取，傳遞給派氏集合淋巴結(jié)(Peyer’s patche)內(nèi)的抗原遞呈細(xì)胞，促進(jìn)Th0細(xì)胞分泌Th1型細(xì)胞因子，引發(fā)Th1優(yōu)勢應(yīng)答［13-14］，而干擾素 γ是重要的 Th1細(xì)胞效應(yīng)因子，其免疫調(diào)節(jié)活性比其他細(xì)胞因子高100～1 000倍，被稱為機(jī)體免疫的第一道防線，該值的提高能夠增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)、巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的活力，以起到免疫效果［15］。本試驗(yàn)對斷奶仔豬血清中干擾素γ進(jìn)行了檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)添加羅伊氏乳酸桿菌后能夠極顯著增加斷奶仔豬血清中干擾素γ含量(P＜0.01)。其中，添加劑量為0.50%時(shí)效果最好，與其他2個(gè)試驗(yàn)組相比差異顯著。Mohamadzadeh等［16］研究指出羅伊氏乳桿菌能夠調(diào)節(jié)人樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，DCs)的表達(dá)，從而誘導(dǎo)干擾素γ等Th1細(xì)胞因子的產(chǎn)生，本試驗(yàn)與該結(jié)果一致。因此，作者認(rèn)為，豬源羅伊氏乳酸桿菌對于促進(jìn)斷奶仔豬機(jī)體Th1型細(xì)胞因子分泌，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫等方面具有積極的功能。

3.2.3 對血清中結(jié)合珠蛋白含量的影響

研究認(rèn)為，當(dāng)動物在受到內(nèi)外界刺激時(shí)，機(jī)體首先會伴隨著急性期蛋白(acute phase protein，APP)的變化，該類蛋白水平隨著動物的疾病感染、炎癥發(fā)生、免疫發(fā)揮、應(yīng)激效應(yīng)及藥物治療等影響健康的因素密切相關(guān)，也被認(rèn)為是評價(jià)動物機(jī)體是否健康的直接指標(biāo)［17-18］。Sorensen 等［19］指出，結(jié)合珠蛋白是檢測豬體內(nèi)APP最具有敏感性和特異性且最為有效的指標(biāo)之一，該指標(biāo)是對管理、應(yīng)激、飼養(yǎng)密度、限飼、日齡及亞疾病等機(jī)體健康狀態(tài)的反映［20-22］，其值越高，說明機(jī)體健康狀態(tài)越壞。Pi?eiro等［23］對 10 個(gè)規(guī)模豬場的健康豬群(長白×大白)進(jìn)行了血清結(jié)合珠蛋白檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，哺乳仔豬體內(nèi)結(jié)合珠蛋白含量最低，斷奶后開始升高，第12周達(dá)到最高，而后趨于穩(wěn)定，生長階段(4～20周齡)豬血清結(jié)合珠蛋白含量為0.43～1.47 mg/m L，后備母豬高于繁育公豬(1.47和 0.94 mg/m L)。W itten［24］則提出，健康豬血液中結(jié)合豬蛋白含量為0.079～2.000 mg/m L，而Petersen等［25］則認(rèn)為，豬體在健康和疾病時(shí)，其結(jié)合珠蛋白含量相差1.1～1.8 mg/m L。在本試驗(yàn)中，4個(gè)組斷奶仔豬血清中結(jié)合珠蛋白含量為1.82、1.88、1.66、1.65 mg/m L，0.25% 組結(jié)合珠蛋白含量略高于對照組，0.50%組和0.75%組均能降低血清中結(jié)合珠蛋白含量(P＜0.05)。由此可見，當(dāng)豬源羅伊氏乳酸桿菌達(dá)到一定劑量后，能夠降低動物機(jī)體內(nèi)急性期蛋白含量，促進(jìn)動物健康。同時(shí)，各組數(shù)值均在W itten［24］所述范圍之內(nèi)，并且各組之差小于1.1 mg/m L，但各組含量均高于Pi?eiro等［23］所報(bào)道的生長豬血清結(jié)合珠蛋白水平(8～12周為0.85～1.42 mg/m L)。Eckersall等［26］則解釋，豬群結(jié)合珠蛋白含量存在種間差異性。另外，我國在飼養(yǎng)管理、養(yǎng)殖環(huán)境等方面與歐洲國家存在著不同，從而也造成了試驗(yàn)結(jié)果的差異。目前，國外已將結(jié)合珠蛋白和豬主要急性蛋白(pig-MAP)作為檢測豬群健康、亞健康及疾病等機(jī)體狀況的主要評定指標(biāo)，而我國對這方面的研究及評定標(biāo)準(zhǔn)尚需進(jìn)一步探討。

4 結(jié)論

①本試驗(yàn)條件下，飼糧中添加豬源羅伊氏乳酸桿菌能夠降低斷奶仔豬血清中白球比，提高血清干擾素γ含量，從而提高機(jī)體免疫能力。

②本試驗(yàn)條件下，當(dāng)添加劑量增加到0.50%以上時(shí)，能夠提高斷奶仔豬平均日增重(P＜0.05)，降低血清中結(jié)合珠蛋白含量(P＜0.05)，促進(jìn)豬體生長。

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*Corresponding author，professor，E-mail:jhf309@sohu.com

(編輯 田艷明)

Effect of DietaryLactobacillus reuterifrom Sw ine on G row th Perform ance and Serum Indices of Weaned Piglets

ZHANG Dongyan JIHaifeng*WANG Jing WANG Sixin LIU Hui SHAN Dacong LIU Pingping WANG Yam in
(Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine，Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences，Beijing100097，China)

The objective of this study was to evaluate the effects of supplementation of freeze-driedLactobacillus reuterion growth performance and serum indices of weaned piglets.Sixty-four crossbred(Duroc×Landrace×LargeWhite)weaned pigletswith averge body weight of(16.57 ±0.23)kg were selected and randomly distributed intofour groups with four replicates per group and four pigs per replicate comprising of control(basal diet)，and 0.25%，0.50%，and 0.75%freeze-driedLactobacillus reuterisupplementation groups.The experiment lasted for30 d.The results showed that:1)compared with the control group，the average daily gain in 0.50%and 0.75%Lactobacillus reuterigroupswere significantly increased by 7.56%(P＜0.05)and 20.07%(P＜0.05)，respectively，and the feed/gain were decreased by 1.96%(P＞ 0.05)and 14.90%(P＜0.05)，respectively;2)theLactobacillus reuterisupplementation could significantly decrease the album in/globulin(P＜0.01)in serum compared with the control group，and also significantly increase the serum IFN-γ content(P＜0.01);3)compared with the control group，the haptoglobin contents in 0.50%and 0.75%Lactobacillus reuterigroupswere significantly decreased by 8.79%(P＜0.05)and 9.34%(P＜0.05)，respectively.In conclusion，Lactobacillus reuterisupplementation could improve the immune ability of weaned piglets，and the obvious promotion on growth performance could obtained in adequate amounts of supplementaion.［Chinese Journal of Animal Nutrition，2011，23(9):1553-1559］

Lactobacillus reuterifrom sw ine;weaned piglets;growth performance;serum indices

S 828;S816.7

A

1006-267X(2011)09-1553-07

10.3969/j.issn.1006-267x.2011.09.014

2011-03-29

豬雞專用益生菌的研制與應(yīng)用(Z080005032508010);生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系北京市創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)項(xiàng)目(GWZJ-2009-06)

張董燕(1981—)，女，河北邯鄲人，碩士，助理研究員，主要從事動物營養(yǎng)研究。E-mail:zhangdongyan1981@163.com

*通訊作者:季海峰，研究員，博士生導(dǎo)師，E-mail:jhf309@sohu.com