蔣美山，蒲華靖

（1.重慶市開(kāi)縣畜牧技術(shù)推廣站，重慶 開(kāi)縣，405400；2.重慶市開(kāi)縣農(nóng)業(yè)委員會(huì)，重慶 開(kāi)縣 405400）

1 所需的材料

1.1 試劑 凡士林，精液稀釋液（4°C保存），促排3號(hào)。

1.2 設(shè)備 硅膠安全套，血細(xì)胞計(jì)算器，輸精槍，集精瓶，輸精管，顯微鏡，載玻片，烘箱，吸管，PVC管，注射器，帶針頭注射器，集精杯，保溫箱，水浴鍋，恒溫箱，保溫箱、試管架。

2 方法

2.1 組裝假陰道

2.1.1 用玻璃棒將硅膠避孕套插入PVC管中。

2.1.2 翻轉(zhuǎn)硅膠避孕套使其包裹在PVC管的兩端，不斷調(diào)整硅膠避孕套使其內(nèi)部成“一”字型。

2.1.3 如果假陰道是冷的，須用50mL的注射器向避孕套和PVC管之間的空間注入 40～45mL 55℃溫水。

2.1.4 把集精杯套在假陰道上。

2.1.5 立即使用或保存在55℃的烘箱備用。收集精液時(shí)，假陰道的溫度應(yīng)該在41～42℃，如果溫度太冷，公兔將不會(huì)射精或者排尿。

2.2 收集精液

2.2.1 抓住臺(tái)兔頸背皮膚將其送到公兔籠中，公兔將立即爬跨臺(tái)兔。

2.2.2 將假陰道靠近公兔的陰莖，讓其插入假陰道并射精。在交配結(jié)束時(shí)公兔從臺(tái)兔背部翻滾下來(lái)說(shuō)明射精成功，否則反之。

2.2.3 采精結(jié)束后，豎直采集器，取下集精杯，放到保溫箱的試管架中。

2.3 精液檢測(cè) 通過(guò)以下指標(biāo)評(píng)估精液質(zhì)量。

2.3.1 射精量。如果精液中有果凍樣凝結(jié)物存在，須在測(cè)定前，用吸管將其移除。通過(guò)精液收集管上的刻度線可以直接讀出精液的體積。標(biāo)準(zhǔn)值在0.3～2mL，平均值為0.8mL。

2.3.2 外觀。精液呈乳白色表明是正常的，像水樣的精液說(shuō)明精子的濃度低，呈黃色說(shuō)明有尿液存在，有棕色、紅色或者顆粒存在說(shuō)明精液被血污染。

2.3.3 活力。將吸管吸一滴精液在預(yù)熱到38℃的載玻片上，再用蓋玻片蓋上，通過(guò)顯微鏡觀察直線活動(dòng)精子占精子總數(shù)的比例。正常精液精子的活力在0%～100%，但是僅僅活力在70%以上的精液可以用于人工授精。

2.4 精液稀釋

2.4.1 在人工授精前1h，將精液稀釋液在水浴鍋里加熱到35℃。

2.4.2 根據(jù)精液的質(zhì)量（濃度和活力），用稀釋液將精液稀釋4-10倍（即加入3～9倍體積的稀釋液），并裝入在15mL的管子中。稀釋過(guò)程注意：應(yīng)以逐滴添加的方式向精液中加入稀釋液，每次滴加完后，應(yīng)輕柔地?fù)u動(dòng)混合，直到初始體積的2倍；加入更大劑量的稀釋液直到想要的體積。

2.4.3 精液在稀釋液中的質(zhì)量評(píng)估。

2.4.4 評(píng)估稀釋后精液的質(zhì)量。注意在精液稀釋后不要立即評(píng)估其質(zhì)量，因?yàn)橄♂尡旧頃?huì)對(duì)精液產(chǎn)生短暫的不良影響，否則容易引起誤判導(dǎo)致質(zhì)量好的精液被丟棄。

2.5 人工授精

2.5.1 將稀釋好的精液裝入輸精瓶，然后裝載到輸精槍上，再把輸精管套在輸精槍的前端。

2.5.2 輸精前肌肉注射促排3號(hào) 0.8μg。

2.5.3 助手一手抓住母兔的耳朵和頸皮，另一只手輕輕按住背部，把母兔保定在桌面上。

2.5.4 輸精者一手抓緊兔尾根皮膚，緩慢抬起母兔后驅(qū)并懸空，使外陰盡可能高地暴露，另一只手用槍頭撥開(kāi)母兔外陰，沿著脊背方向進(jìn)槍輸精。

2.5.5 緩慢按壓輸精槍活塞將精液注入（0.5mL），然后緩慢將輸精槍拔出，并順勢(shì)在母兔臀部輕拍一下。