陳啟斌

(云南省昭通市第一人民醫(yī)院檢驗科，云南 昭通 657000)

很多文章報導了抗溶血紅細胞、有核紅細胞和聚集的血小板對白細胞計數(shù)的干擾，小紅細胞、紅細胞碎片、血小板聚集、EDTA-K2依賴型聚集對血小板計數(shù)的干擾作，但試劑質量對血細胞分析的影響鮮有描述。

當懸液中一個細胞通過小孔時，由于血細胞具有極小的傳導性，細胞的導電性比等滲的稀釋液要低，在電路中小孔感應區(qū)內電阻增加，瞬間引起電壓的變化而出現(xiàn)一個脈沖信號，電壓增加的程度取決于細胞的體積，細胞的體積愈大，引起的電壓變化愈大，產生的脈沖振幅越高。記錄脈沖的數(shù)量可以得到細胞計數(shù)的結果，這就是庫爾特原理，也被稱為電阻法。

三分群和五分類血細胞分析儀中，紅細胞和血小板的檢測都使用電阻抗法，紅細胞和血小板被稀釋液稀釋后通過同一個檢測孔，根據RBC閾值線(如果閾值線定在30fl)，大于30fl的顆粒被計數(shù)成紅細胞，小于30fl的顆粒被計數(shù)成血小板。紅細胞和血小板的檢測主要受稀釋液的影響。稀釋液的導電性、離子強度、pH值直接影響脈沖的變化，會造成直方圖的變化和檢測結果的不確定性。稀釋液的滲透壓如果不是等滲液，將會改變紅細胞和血小板體積的大小，高滲的稀釋液會使細胞皺縮，MCV和MPV減小，低滲的稀釋液會使細胞腫脹造成MCV和MPV 增大， 自然 HCT、MCH、MCHC、PCT 已會隨之變化。

三分群白細胞的檢測不但受儀器電壓、儀器的檢測孔電流、儀器脈沖的增益的影響；也受溶血劑的種類、溶血時間，稀釋液，清洗液的影響。紅細胞的數(shù)量是白細胞的幾百倍，如果溶血素有質量問題，有1%的紅細胞不能被溶解，被計數(shù)成白細胞后使白細胞計數(shù)成倍增加。如果經溶血素和稀釋液作用后，白細胞的“膜包核”的體積大小不能按從大到小分別落在中性粒細胞、中間細胞、淋巴細胞的閾值范圍內，將影響白細胞的準確分類。

五分類白細胞的檢測，以希森美康XT-2000i為例，分兩個通道進行：一個是WBC/BASO通道，完成白細胞總數(shù)和嗜堿性粒細胞計數(shù)及分類，使用了嗜堿性分類溶血素和嗜堿性分類染色液；另一個是DIFF通道，完成中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、單核細胞和淋巴細胞的計數(shù)和分類，使用了白細胞分類溶血素和白細胞分類染色液。不論是那一個通道的溶血素或/和染色液有質量問題，將影響本通道的分類和計數(shù)。

現(xiàn)將筆者在實際工作中遇到的試劑有質量問題對血細胞分析的影響和大家分享。筆者使用雅培CD1800三分群血細胞分析儀時，遇到同一個批號的兩桶溶血劑出了質量問題，紅細胞不能溶解，被計數(shù)成白細胞，超過機器的檢測線性，機器顯示白細胞檢測結果“>>>>”。同時由于紅細胞不能被溶解，影響血紅蛋白吸光度的檢測，血紅蛋白的檢測結果顯示“>>>>”。當時筆者就懷疑溶血素有質量問題，還做了個機器外溶血試驗，將血液和有質量問題的溶血素加入同一只玻璃試管，紅細胞不能被溶解，試管內一直呈渾濁狀態(tài)，顯微鏡下紅細胞密集。將剛被換下的做出正常結果的溶血素 (試劑桶里還剩下一小點)，同時做了機器外溶血試驗，紅細胞被全部溶解，試管內呈紅色澄清狀態(tài)，顯微鏡下無紅細胞。還有一次，雅培CD1800的稀釋液用完后，筆者科室一位同事錯將清洗液當成稀釋液換上后，檢測結果白細胞分類中間細胞(中值細胞)比例一直高達30%～40%；最后將正確的稀釋液換上后，中間細胞(中值細胞)比例立刻就降到正常。

筆者科室還有一臺希森美康XT-2000i五分類血細胞分析儀，有一次換上白細胞分類染色液(FFS)，正常做了幾個標本，之后的標本白細胞分類不出結果，DIFF(白細胞分類)散點圖呈灰色向高熒光區(qū)域延伸，當時機器報警白細胞分類溶血素(FFD)消耗完了；但是換上新的FFD后標本白細胞分類還是不出結果，白細胞分類散點圖和以前相同。最后經反復試驗，證實是換上的白細胞分類染色液(FFS)有質量問題。為什么正常做了幾個標本，才出現(xiàn)之后的標本白細胞分類不出結果呢？是因為機器的試劑管道里還殘留有換試劑之前質量正常的試劑。

總結，我們在使用血細胞分析儀時，除了對機器的工作原理爛熟于心，還要對每一種試劑的分析原理應當了解，熟悉哪種試劑對哪些血細胞檢測項目有影響，以便我們分析是哪種試劑有質量問題。當血細胞分析的直方圖、散點圖有問題或分析結果與復檢結果誤差較大時，除了機器故障，還要高度懷凝試劑有質量問題。換上正常試劑后，要進行排空或深度灌注，使機器管道里殘留的有問題的試劑消耗完，才能得到正確的結果。必須使用機器的原裝試劑，以保證血細胞分析結果的準確。