彭祥云，楊 霞

(湖北洪湖市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 洪湖 433200)

分析前質(zhì)量控制是全面質(zhì)量控制中至關(guān)重要的前提，各環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制直接影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，在可分析出原因的不準(zhǔn)確的檢驗(yàn)報(bào)告中有60%以上來自于分析前階段。對實(shí)驗(yàn)室來講，測試前標(biāo)本是否合格是實(shí)驗(yàn)室全面質(zhì)量控制的前提保證，凝血功能檢查對標(biāo)本的要求尤為嚴(yán)格。因此必須強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)室測試前的技術(shù)要求。

1標(biāo)本的采集 盡可能地保證每次采血都在同樣的條件下進(jìn)行。采血時(shí)，盡量使患者處于室溫、平靜、空腹的狀態(tài)。避免劇烈運(yùn)動后采血，因?yàn)閯×业倪\(yùn)動后Ⅷ因子活性快速上升，影響APTT的檢測結(jié)果。

1.1 最好采用真空采血管或者選擇合格的一次性塑料注射器，針頭短粗，避免或減少血小板、凝血機(jī)制和纖溶系統(tǒng)的激活。

1.2 應(yīng)選取肘部較粗且彈性較好的靜脈采血，止血帶不可束縛過緊，束臂時(shí)間一般不宜超過1min，禁止用力拍打穿刺部位。

1.3 抽血應(yīng)順利，速度要均勻。抽血速度過快易引起血細(xì)胞的損傷和凝血因子的激活，過慢血液易凝固。

1.4 采血完后應(yīng)拔掉針頭，沿管壁將血液注入試管，用力不可太猛，且要避免氣泡產(chǎn)生，與抗凝劑顛倒充分輕柔混勻，避免用力震蕩，以免發(fā)生溶血。溶血后的標(biāo)本會引起血小板活化和凝血時(shí)間縮短。

1.5 對于患者有多個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目需同時(shí)采樣時(shí)，凝血試驗(yàn)樣本應(yīng)采取第一管[1]。防止肝素、EDTA等的污染

1.6 確認(rèn)標(biāo)本量 對于采血量要求為1.8ml的采血管來講， 采血量少于 1.4ml時(shí)，PT、APTT、FIB、TT 的檢測結(jié)果均明顯降低;即使加入1.6ml的血量對檢測結(jié)果沒有顯著性影響，但對于處于臨界值的檢測結(jié)果或用于患者病情的動態(tài)觀察來說，還是值得注意的；采血量多于2.2m l，會使得FIB的檢測結(jié)果明顯增高，對于抗凝治療或血栓前狀態(tài)的評估，會造成假陽性判斷

2標(biāo)本的運(yùn)輸 應(yīng)盡快送到實(shí)驗(yàn)室檢測或直接在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。有條件的情況下最好在4℃運(yùn)輸標(biāo)本。

3標(biāo)本的處理

3.1 離心條件 溫度控制在15～20℃，離心速度3.000r/min，離心時(shí)間10min得到乏血小板血漿。

3.2 及時(shí)檢測 全血貯存在4℃～10℃不超過2h。最好在1h內(nèi)分離血漿，2h內(nèi)測定完畢。若全部試驗(yàn)不能在4h內(nèi)完成，應(yīng)放4℃冰箱保存，最多不能超過6h。如無法在此時(shí)間內(nèi)完成，應(yīng)將血漿分裝在小試管(0.5ml～1.0ml)中快速冷凍，貯存在-20℃或-70℃，冷凍過的標(biāo)本復(fù)溶后不能再次冷凍。

3.3 檢查血漿 確認(rèn)血漿有無凝塊、溶血、黃疸、脂血。標(biāo)本中出現(xiàn)凝塊，不論大小均會干擾檢測結(jié)果，應(yīng)重新采血；溶血標(biāo)本，因紅細(xì)胞的磷脂表面具有凝血活酶的活性從而改變血漿凝固時(shí)間；黃疸和脂血標(biāo)本因其色素和混濁干擾了光的散射，影響了凝固時(shí)間和纖維蛋白原的真實(shí)含量。

4抗凝劑的選擇和使用

4.1 抗凝劑的選擇 根據(jù)國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(ICSH)及國際血栓與止血委員(ICTH)推薦使用3.2%枸櫞酸鈉作為凝血象檢查的抗凝劑。

4.2 抗凝比例 抗凝劑與血液的比例為1:9，由于1:9的概念是指基于當(dāng)紅細(xì)胞壓積在20%～55%范圍內(nèi)，實(shí)質(zhì)是抗凝劑與血漿的比例，而不是與全血的比例。當(dāng)紅細(xì)胞壓積＜20%或＞55%的血液標(biāo)本要適當(dāng)調(diào)整抗凝劑用量，以確?？鼓齽┰谘獫{中的絕對含量不變。公式為；抗凝劑用量(ml)=1.85×10-3×全血量(ml)×(100-患者紅細(xì)胞壓積%)[2]。

5試劑的選擇、使用和保存

5.1 試劑的選擇試劑的質(zhì)量是保證檢驗(yàn)結(jié)果可靠性的首要條件。試劑的選擇應(yīng)根據(jù)所用檢測儀器的類型和對被檢測物的敏感度。同一品牌的不同成分的試劑和試劑重復(fù)性以及對被測物的敏感性。用于PT檢測的試劑必須提供國際敏感指標(biāo)(ISI)值，理論上ISI值越接近1.0越好。

5.2 試劑使用 試劑使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作，確認(rèn)試劑批號與儀器定標(biāo)曲線等是否匹配以及試劑的有效期等。在實(shí)驗(yàn)和試劑準(zhǔn)備中應(yīng)使用蒸餾水或試劑級的去離子水，去離子水pH值應(yīng)在6.0～7.0，pH值增高會使凝固時(shí)間延長。緩沖液的pH、離子強(qiáng)度、新鮮度直接影響測定。清洗液變質(zhì)或效能減低能影響測定，一般要求清洗液用完時(shí)，應(yīng)及時(shí)更換合格的清洗液。

5.3 試劑保存 試劑應(yīng)放4℃冰箱保存，凍干試劑溶解后在4℃放置，隨時(shí)間的延長，試劑的效價(jià)會降低，從而影響PT、APTT、TT的測定結(jié)果。

6儀器的質(zhì)量保證

6.1 儀器的安裝環(huán)境 應(yīng)遠(yuǎn)離熱源、震源，相對濕度<80%，最適溫度 15～30℃，電壓 220±10V，因?yàn)檫@些因素均能影響儀器的運(yùn)行狀態(tài)或影響儀器的光學(xué)信號而影響測定。

6.2 儀器的調(diào)試與校正與儀器匹配的校正液，合理的校正點(diǎn)及校正參數(shù)，在儀器投入使用前，搬動、更換部件維修、更換不同廠家或不同批號的試劑，到校正周期，質(zhì)控漂移找不出別的原因時(shí)，及時(shí)校正儀器。這樣才能確保儀器的準(zhǔn)確性，檢測結(jié)果才能得到保證。使用新鮮混合血漿校正儀器時(shí)，其定值要直接或間接溯源至國際標(biāo)準(zhǔn)[3]。

6.3 參數(shù)的設(shè)置要準(zhǔn)確、合理 如試劑量、樣本量、孵育時(shí)間、激活時(shí)間、反應(yīng)溫度，這些都會影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。

6.4 儀器的質(zhì)量 準(zhǔn)確度：PT、APTT： 均值±15%，F(xiàn)IB：均值±25%.精密度：批內(nèi)，PT＜2%，APTT＜3%，F(xiàn)IB＜5%； 批間，PT＜3%，APTT＜3%，F(xiàn)IB＜6%； 日間，PT＜4%，APTT＜5%，F(xiàn)IB＜7%。 攜帶污染率等指標(biāo)要符合要求。

6.5 及時(shí)正確地保養(yǎng)和維護(hù)儀器 定時(shí)測試和校正儀器的性能，如溫度、波長，特別是對光源燈要定期檢查、校正，避免因光源燈光學(xué)性能衰減對測定的影響。同時(shí)要保持機(jī)械和光學(xué)部件的清潔，確保儀器良好的運(yùn)行狀態(tài)。

[1]王 瑾.影響凝血試驗(yàn)測定結(jié)果的因素分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2008,5(16):1025.

[2]徐書芹.凝血試驗(yàn)分析前質(zhì)量控制中護(hù)理因素的影響及對策[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2010,7(23):2652-2653.

[3]唐慧琴,劉忠民.凝血試驗(yàn)項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)量控制方法評價(jià)和設(shè)計(jì)[J].血栓與止血學(xué),2009,15(3):136-139.