朱 楨 曹海鵬 富學東 張素華 (唐山市協(xié)和醫(yī)院皮膚科,河北 唐山 063000)

erbB4基因是近年來新發(fā)現(xiàn)的基因,是表皮生長因子受體(EGFR)家族中的新成員。近年來發(fā)現(xiàn)在宮頸癌〔1〕、乳腺癌〔2〕中均有 erbB4的高表達。新生血管的形成為惡性腫瘤細胞的快速增殖及局部浸潤破壞提供了高效的灌注效應,為腫瘤細胞的擴散提供了基礎〔3〕。 Endoglin〔4〕是一種內(nèi)皮細胞增殖的標志物,主要表達于腫瘤組織內(nèi)增殖旺盛的新生毛細血管。研究發(fā)現(xiàn)在胃癌〔5〕等多種腫瘤中 Endoglin的表達升高。本文旨在探討 erbB4和Endoglin在皮膚鱗癌的發(fā)生及浸潤擴散中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標本 52例皮膚鱗癌標本隨機取自唐山市協(xié)和醫(yī)院2005年 ～2008年期間經(jīng)手術后病理證實的患者。其中男 29例,女 23例;17例 ≤60歲,35例 ＞60歲;年齡 34～ 94〔平均(66.98±31.26)〕歲;病程 ＜1年者 9例,≥ 1年者 43例;腫瘤直徑 ＜2 cm者 22例,≥ 2 cm者 30例;發(fā)生于曝光部位者 35例,非曝光部位者 17例。所有病例術前均未行放、化療、未應用免疫抑制劑、冷凍、激光等治療。52例鱗癌中高分化鱗癌 14例,中～低分化鱗癌 38例;11例伴有淋巴結轉移,41例無轉移。對照組選自外科手術切除的正常皮膚 10例。上述標本均為臨床資料完整的病理科存檔蠟塊。

1.1.2 試劑 濃縮型兔抗人單克隆抗體 erbB4(克隆號:bs-1085R),購自北京博奧森生物生物技術有限公司。即用型鼠抗人 Endoglin(CD105)單克隆抗體(克隆號:SN6h),購自北京中山金橋生物技術有限公司。即用型 ElivisionTMplus免疫組化檢測試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒,購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司。

1.2 免疫組化方法檢測 erbB4、Endoglin蛋白 采用 EliVision法染色。erbB 4蛋白標記呈黃色或棕黃色顆粒,定位于實質(zhì)細胞的胞漿及胞膜。每張切片觀察 5個高倍鏡視野。結果判斷標準為:細胞未著色者為(-);著色細胞≤25%為(+);25%～50%者為(?);＞50%者為(?)。Endoglin蛋白標記呈黃色或棕黃色顆粒,定位于內(nèi)皮細胞的胞漿及胞膜。先用低倍鏡(×40)掃視整個切片,尋找高血管密度區(qū),即“熱點”。再在100倍鏡下取 3個視野分別計算所有染色的微血管,取 3個測定值的平均數(shù)為該病例的微血管密度(MVD)值。在計數(shù)微血管時,任何一個染成棕褐色或棕黃色的內(nèi)皮細胞簇或微血管,作為一個血管計數(shù),只要結構不相連,其分支結構也作為一個血管計數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析,數(shù)據(jù)以±s表示,兩樣本率的比較采用四格表資料的 χ2檢驗,并行Fisher精確概率法計算;對計量資料采用 t檢驗;資料的相關性分析采用 Spearman相關分析。

2 結 果

2.1 皮膚標本中erbB4的蛋白表達情況 39例(75%)皮膚鱗癌的 erbB4蛋白呈陽性表達,陽性率為 75%;對照正常皮膚陽性表達為 1例(10%),兩組差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。與對照組相比,鱗癌組 erbB4蛋白染色強度評分無明顯變化(P=1.00)。見圖 1。

2.2 皮膚標本中 Endoglin的蛋白表達情況 52例皮膚鱗癌中,Endoglin-MVD(Endoglin標記的 MVD)為 30.56±6.41,正常對照組為 3.00±1.63,兩組之間差異有統(tǒng)計學意義(t=13.42,P＜0.001)。見圖 1。

2.3 皮膚鱗癌erbB4及Endoglin-MVD在相關臨床與病理狀況的蛋白表達 erbB4蛋白在高分化鱗癌組的陽性表達率與中 ～低分化組差異無顯著性。erbB4蛋白在伴有淋巴結轉移組的陽性表達率與無轉移組差異具有統(tǒng)計學意義。Endoglin-MVD在高和中 ～低分化組,在淋巴結轉移組及無轉移組,各組間差異均有顯著的統(tǒng)計學意義。皮膚鱗癌組 erbB4蛋白及 Endoglin-MVD的表達與年齡、性別、病程、曝光與否及腫物大小之間均無明顯相關性(P＞0.05)。見表 1。

圖1 各組 erbB 4、Endoglin蛋白表達

表1 皮膚鱗癌 erbB 4蛋白及 Endoglin-MVD在相關病理情況下的表達

2.4 erbB4與 Endoglin相關性 52例皮膚鱗癌中,erbB4蛋白表達陽性的病例中,Endoglin-MVD為 31.79±6.24,erbB4蛋白表達陰性的病例中,MVD為 26.85±5.61。兩者差異有顯著性意義(t=2.54,P=0.014)。Spearman相關分析提示二者呈正相關(r=0.362)。

3 討 論

erbB4參與了多種惡性腫瘤的發(fā)生,Zaichun等〔6〕在對非小細胞肺癌的研究中發(fā)現(xiàn),癌組織 erbB 4的陽性表達率可高達91.4%,并且與淋巴結轉移,腫瘤的 TNM分期及預后相關。Ben-Yosef等〔7〕在對一組咽喉部黏膜鱗癌的研究發(fā)現(xiàn),erbB4的蛋白表達率為 51%,對照組為28%。本研究與上述鱗癌的結果類似。細胞學的結果發(fā)現(xiàn)〔8〕:erbB4可通過 PI3K/AKT途徑促進小鼠結腸黏膜上皮細胞株(YAMC)細胞的增殖。在應用RNA干擾技術抑制erbB4在食管癌細胞系Eca-109中的表達的試驗中發(fā)現(xiàn)〔9〕,干擾后 Eca-109細胞的遷移能力降低。在腫瘤微血管形成機制的研究中發(fā)現(xiàn),PI3K對于腫瘤中的血管形成有重要作用,用 LY 294002抑制 PI3K的活性可以降低前列腺癌(PC-3)細胞誘導的血管生成〔10〕。上述研究提示 erbB4蛋白的高表達與惡性腫瘤的發(fā)生與侵襲轉移有關。

Zvrko〔11〕研究發(fā)現(xiàn) Endoglin-MVD與喉癌分級,轉移及復發(fā)相關。Ying-juan〔12〕的研究提示:大腸癌組織浸潤越深、伴有淋巴結轉移以及Dukes分期較高者,其Endoglin-MVD也越高。本文結果也提供了相應的數(shù)據(jù),提示Endoglin參與了腫瘤內(nèi)大量血管的新生。Endoglin-MVD與皮膚鱗癌的形成、分化、侵襲和淋巴結轉移有關。

Endoglin作為腫瘤新生血管的標志物已由眾多學者的研究得以證實。腫瘤在生長過程中可以通過分泌多種細胞因子促進血管的形成。Sopel等〔13〕在對乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn) erbB2與CD31標記的微血管密度顯著正相關,提示腫瘤血管的生成與EGFR家族有關。本實驗顯示,Endoglin-MVD在 erbB4陽性呈正相關。但是二者之間互相調(diào)控的具體途徑目前尚未知曉。

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7 Ben-Yosef R,Marmor S,Starr A,et al.ErbB4expression in squamous cell carcinoma of the head and neck〔J〕.Targeted Oncol,2006;1(4):181-5.

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13 Sopel M,Kasprzyk I,Berdowska I.Maspin and c-erbB-2 expression in correlation with microvessel density in invasive ductal breast cancer〔J〕.Folia Histochem Cytobiol,2005;43(2):109-16.〔2010-02-05收稿 2010-10-18修回〕