馬德佳，何新發(fā)，李燕妮

（玉林市紅十字會醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西 玉林 537000）

人類皰疹病毒(EB病毒)是一種重要的感染人類的DNA病毒，它通過密切接觸而感染人類，它在全球普遍存在，90%以上的人在3～5歲就感染過EB病毒，它不僅與中國南方鼻咽癌(NPC)有關(guān)，還與淋巴瘤、胃癌、乳腺癌、系統(tǒng)性紅斑狼瘡和免疫功能降低后的淋巴增生性疾病有關(guān)[1]，而且正常人群也有一定程度的陽性率，所以多數(shù)EB病毒抗體陽性者也未必是NPC患者，且不一定發(fā)生NPC[2]。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為EB病毒可能是惡性淋巴瘤和鼻咽癌的病因[3]。NPC多見于中國南方，全球80%的NPC發(fā)生在中國南方和東南亞地區(qū)，與EB病毒感染、遺傳及環(huán)境因素關(guān)系十分密切；EB病毒的血清學(xué)特異抗體及生物學(xué)EBV-DNA的升高往往在臨床發(fā)現(xiàn)腫瘤之前，NPC的早期診斷與臨床分期對放療的療效意義重大，病期越早療效越高。目前用于NPC血清學(xué)及生物學(xué)輔助診斷與監(jiān)測的指標(biāo)較多，但大部分對早期診斷、臨床分期、療效監(jiān)測和預(yù)后判斷應(yīng)用價值不大。本研究探討和評價4種最常用的EB病毒抗體及EBV-DNA含量單獨(dú)檢測以何者為良，以及采用何種優(yōu)化組合在早期診斷、臨床分期、療效監(jiān)測、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和預(yù)后判斷中最實(shí)用、最客觀、最具代表性、最有效，以期提高EB病毒血清學(xué)及生物學(xué)在NPC中的臨床應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本 2006～2009年本院收治的168例(其中男133例，女35例，年齡25～74歲，平均45歲)未經(jīng)治療過的病理確診的NPC患者、124例其他疾病患者(其中鼻息肉40例，慢性鼻咽炎30例，頸部淋巴結(jié)炎14例，頭頸部惡性淋巴瘤40例)和174例(男151例，女23例，年齡23～70歲，平均42歲)經(jīng)全面體檢證實(shí)健康的成年人血清和血漿。

1.2 方法 ELISA法檢測EBNA1-IgA、Zta-IgA、VCA-IgA試劑均由廣東省中山生物工程有限公司神農(nóng)有限公司提供；ELISA法檢測EA-IgA試劑由北京貝爾生物工程有限公司提供；熒光定量PCR法檢測血漿EBV-DNA試劑由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供；檢測與測定的操作嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行，檢測儀器為雷杜RT-6000酶標(biāo)儀、達(dá)安PCR分析儀。

1.3 臨界值的確定 根據(jù)168例鼻咽癌患者和174例健康成年人血清或血漿在不同相對吸光度值或病毒拷貝數(shù)所計算出的靈敏度和特異性繪出兩條曲線，按照交接點(diǎn)的所在確定為臨界值，大于臨界值即為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 計數(shù)資料率的比較用χ2檢驗(yàn)，使用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的分析統(tǒng)計。

2 結(jié)果

2.1 不同人群4種最常用的EBV抗體和EBV-DNA的可疑陽性、陽性人群情況 4種最常用的EBV抗體和EBV-DNA的陽性人群鼻咽癌組分別與鼻息肉組，慢性鼻咽炎組、頸部淋巴結(jié)炎組及正常成年人對照組比較差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；但與頭頸部惡性淋巴瘤組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

2.2 4種最常用的EBV抗體和EBV-DNA的單項(xiàng)檢測的敏感度(或靈敏度)、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、陽性似然比和優(yōu)勢比 血漿EBV-DNA的敏感度為93.1%，特異度為97.6%；血清學(xué)的EBNA1-IgA的敏感度為93.0%，特異度為93.1%最高，見表2。

2.3 4種最常用的EBV抗體兩兩與EBV-DNA聯(lián)合檢測的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、陽性似然比、優(yōu)勢比 EBNA1-IgA和Zta-IgA與EBV-DNA聯(lián)合檢測的敏感度為91.33%，特異度為97.6%，陽性預(yù)測值為0.9789，陰性預(yù)測值為0.8016，陽性似然比為86.1875，優(yōu)勢比為826.0000(效果最佳)，見表3。

表1 不同人群4種最常用的EBV抗體和EBV-DNA的可疑陽性、陽性人群情況比較[例(%)]

表2 4種最常用的EBV抗體和EBV-DNA的單項(xiàng)檢測結(jié)果

表3 4種最常用的EBV抗體兩兩與EBV-DNA聯(lián)合檢測結(jié)果比較

3 討論

與EBV感染有關(guān)的疾病很多，NPC與EBV感染關(guān)系特別密切，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為EBV可能是惡性淋巴瘤和鼻咽癌的病因。

近年來，隨著診療技術(shù)的提高，NPC的診斷和治療有了很大的進(jìn)展，5年生存率大大提高，但由于早期診斷、臨床分期、療效判斷和預(yù)后預(yù)測等方面仍不夠理想，而NPC的早期診斷與臨床分期對放療的療效意義重大，病期越早，療效越高，病期越晚，療效越低。近年來的研究表明，與EBV感染相關(guān)的免疫血清學(xué)與生物學(xué)標(biāo)志產(chǎn)物作為NPC早期篩查、輔助診斷、臨床分期、療效判斷和預(yù)后預(yù)測有著獨(dú)特的優(yōu)勢。

正常人群EBV的血清學(xué)與生物學(xué)標(biāo)志產(chǎn)物有一定程度的陽性率，絕大多數(shù)NPC癌細(xì)胞內(nèi)寄居了EBV，所以健康成人與NPC患者不能依靠血清或血漿中是否有EBV抗體或EBV-DNA作為鑒別依據(jù)，況且各種EBV抗體存在不同水平的靈敏度和特異度，要看EBV感染的類別和抗體、EBV-DNA水平的高低，甚至鼻咽部惡性淋巴瘤EBV抗體及EBV-DNA也有較高的陽性人群，對EBV的血清學(xué)與生物學(xué)標(biāo)志產(chǎn)物陽性率高的要有充分可靠的手段予以確認(rèn)。

EBV感染B淋巴細(xì)胞分為潛伏感染和溶解性感染兩種，潛伏感染有三型，三型感染都表達(dá)EBNA1抗原，所以選用EBNA1抗原免疫應(yīng)答產(chǎn)生的各類抗體作為EBV感染的血清學(xué)指標(biāo)最具代表意義。

EBV感染產(chǎn)生的IgG類抗體因?yàn)榘胨テ陂L，即使健康成人或EBV被徹底清除也會有較長時間較高滴度的IgG類抗體，在NPC的輔助診斷方面沒什么價值；而IgA類抗體往往水平較高，針對性或特異性較強(qiáng)，所以在臨床中建議NPC的輔助診斷應(yīng)用IgA類血清學(xué)抗體。

1976年Henle等[4]就指出，NPC患者血清中具有多種和較廣的抗EBV抗體譜。血清學(xué)的免疫抗體檢測已廣泛的應(yīng)用于NPC的診斷與篩查[5-6]，由于NPC的主要表現(xiàn)是EBV潛伏感染出現(xiàn)三個時相，首先表達(dá)即早期抗原Zta，接著表達(dá)早期抗原EA，最后淋巴細(xì)胞的核膜破裂，合成表達(dá)了衣殼抗原VCA及膜抗原MA，這一過程有部分會出現(xiàn)流產(chǎn)，不產(chǎn)生衣殼抗原及膜抗原，釋放出來的EBV合成完整的病毒顆粒后又吸附和侵入B淋巴細(xì)胞及其他細(xì)胞，在這一轉(zhuǎn)化過程中病毒基因組被擴(kuò)大。由此可見，傳統(tǒng)上選用VCA或MA抗原免疫應(yīng)答產(chǎn)生的各類抗體作為EBV感染篩查試驗(yàn)指標(biāo)有一定缺陷，而選用Zta抗原免疫應(yīng)答產(chǎn)生的各類抗體可作為EBV從潛伏期感染到溶解性感染轉(zhuǎn)折點(diǎn)的血清學(xué)指標(biāo)，優(yōu)于VCA。本研究顯示Zta的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、陽性似然比、優(yōu)勢比均高于VCA。

此外，VCA-IgA抗體和EA-IgA抗體在體內(nèi)半衰期較長，即使體內(nèi)EBV被消除，仍有較長時間存在較高滴度，不能實(shí)時反映腫瘤的消長情況。尚無證據(jù)可顯示，它們作為監(jiān)測NPC治療后轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的指標(biāo)，且與NPC分期無明顯相關(guān)[7]。血漿EBV-DNA水平對NPC的診斷、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和預(yù)后的預(yù)測均有一定意義[8]。本研究也顯示EBV-DNA的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、陽性似然比、優(yōu)勢比等臨床應(yīng)用價值指標(biāo)均為最高。

因?yàn)閷BV病原的測定操作要求高，設(shè)備及試劑昂貴等，應(yīng)用受到限制，EBV感染的免疫血清學(xué)檢測仍是目前NPC早期篩查、早期診斷最常用的手段。由于NPC主要表現(xiàn)是EBV潛伏感染伴小量溶解性感染，傳統(tǒng)VCA和EA免疫熒光法或免疫酶法(選用溶解性感染的表達(dá)抗原)顯而易見，針對性不強(qiáng)，而且難以確定兩個滴度之間更微小的數(shù)值，結(jié)果判斷上欠客觀。而新一代的EBV-IgA ELISA試劑盒選用了潛伏感染的主要表達(dá)抗原EBNA1，克服了傳統(tǒng)方法及血清學(xué)指標(biāo)的不足，血漿游離EBV-DNA更具優(yōu)勢，為NPC的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、臨床分期、療效監(jiān)測和預(yù)后判斷提供更高價值的手段。

基于NPC患者EBV血清學(xué)及生物學(xué)的特點(diǎn)以及方法學(xué)的局限性，血清學(xué)與生物學(xué)指標(biāo)的單項(xiàng)檢測在正常人群和NPC中存在不同程度的假陽性、假陰性，即不同水平的敏感度、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值，選擇最有效的單項(xiàng)或聯(lián)合檢測為臨床提供更有價值的手段尤為必要，檢測EBNA1-IgA、VCA-IgA、EA-IgA、Zta-IgA、EBV-DNA有互補(bǔ)作用[9]。本研究顯示單項(xiàng)的EBNA1-IgA和血漿EBV-DNA定量檢測價值最高，而EBNA1-IgA、Zta-IgA、EBV-DNA定量聯(lián)合檢測進(jìn)一步提高了陽性預(yù)測值、陽性似然比和優(yōu)勢比，這一組合大大地減少漏檢和誤檢，最為客觀，最具代表性且最有效。

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