葛 進(jìn) 鄭喜蘭 雒 瑢 田鳳石

NO是一種重要的病理生理因子，一氧化氮合酶（NOS）是NO合成過程中的關(guān)鍵酶,分為構(gòu)成型一氧化氮合酶（cNOS）和細(xì)胞因子誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）。iNOS在靜息細(xì)胞內(nèi)不表達(dá)，當(dāng)細(xì)胞受到細(xì)胞因子或免疫微生物刺激時(shí)，iNOS將催化合成非生理濃度的大量NO，過多的NO通常伴隨有炎癥、免疫紊亂及動(dòng)脈粥樣硬化等[1]。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察替米沙坦對(duì)高脂喂養(yǎng)的OLETF大鼠血清NO和iNOS的影響，探討NO及NOS在糖尿病合并高脂血癥的動(dòng)脈粥樣硬化中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 SPF級(jí)LETO雄性大鼠12只和OLETF雄性大鼠20只，均4周齡，體質(zhì)量150～200 g，均購(gòu)自日本大冢制藥有限公司。大鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料、高脂飼料由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射科研究所提供。標(biāo)準(zhǔn)飼料配方為玉米粉34%、大麥粉30%、麩皮18%、豆粕12%、骨粉4%、酵母1%、植物油0.5%、鹽0.5%。高脂料配方為60%標(biāo)準(zhǔn)飼料，蛋黃粉10%、豬油12%、無糖全脂奶粉12%、蔗糖4%、水2%。

1.2 模型制備與分組 32只大鼠均適應(yīng)性喂養(yǎng)4周，分籠喂養(yǎng)（2～4只/籠），自由攝水，明暗周期為12 h（7：00～19：00），溫度控制在（23±2）℃，相對(duì)濕度（55±5）%。OLETF大鼠8周開始高脂喂養(yǎng)，自由獲取食物和水，22周將OLETF大鼠隨機(jī)分為2組，每組10只：高脂組（O組），繼續(xù)給予高脂喂養(yǎng)；用藥組（L組），給予高脂飼料喂養(yǎng)的同時(shí)，給予替米沙坦5 mg/（kg·d）[2]。12只LETO大鼠飼以標(biāo)準(zhǔn)飼料，為對(duì)照組（NC組）。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定3組大鼠的游離脂肪酸（FFA）、單核細(xì)胞趨化蛋白（MCP）-1、NO、NOS及iNOS。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示。多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步組間比較用LSD-t法，相關(guān)分析采用Spearman相關(guān)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組間NO、NOS、iNOS、FFA及MCP-1的比較 O組較L組NO升高（P=0.011），較NC組上升，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.075）。各組間NOS、iNOS差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。O組FFA及MCP-1明顯高于NC組，L組較O組FFA及MCP-1顯著下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 各組大鼠血清NO、NOS及iNOS等比較（±s）

表1 各組大鼠血清NO、NOS及iNOS等比較（±s）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別 n NC組（1）O組（2）L組（3）F P（1）∶（2）（1）∶（3）（2）∶（3）12 10 10 NO（μmol/L）4.85±2.35 6.42±2.00 4.04±1.26 3.883＊0.075 0.349 0.011 NOS（U/mL）15.55±11.31 16.60±14.23 18.43±8.65 0.830 iNOS（U/mL）10.80±4.53 15.86±4.96 16.65±7.04 0.405 ------FFA（mmol/L）2.53±1.59 5.31±1.84 2.85±0.68 165.266＊＊＜0.001 0.156＜0.001 MCP-1（ng/L）33.85±8.92 43.90±6.73 34.65±7.60 5.223＊0.006 0.814 0.014

2.2 NO及iNOS與MCP-1、FFA相關(guān)分析結(jié)果 NO與MCP-1、FFA均呈正相關(guān)（r分別為0.510和0.499，均P＜0.05），iNOS與MCP-1、FFA無相關(guān)性（r分別為-0.012和0.365，均P＞0.05）。

3 討論

NO具有免疫調(diào)節(jié)、神經(jīng)傳遞、血壓生理調(diào)控和抑制血小板凝聚等生理功能。但NO濃度持續(xù)增高會(huì)對(duì)機(jī)體造成危害[3]。大量NO與超氧陰離子反應(yīng)產(chǎn)生較高濃度的過氧亞硝酸陰離子（ONOO-），對(duì)重要蛋白進(jìn)行氮化修飾，改變信號(hào)途徑，直接和間接介導(dǎo)了NO的細(xì)胞毒性效應(yīng)[4]。此外，多重聯(lián)級(jí)信號(hào)被活化，形成炎癥級(jí)聯(lián)瀑布反應(yīng)，將信號(hào)波及范圍擴(kuò)大，推動(dòng)炎癥發(fā)展[5]，造成組織細(xì)胞功能和結(jié)構(gòu)的損傷。通常糖尿病被認(rèn)為是一種慢性炎癥，而高脂喂養(yǎng)大鼠可加重炎癥反應(yīng)。有研究顯示，在培養(yǎng)的成年小鼠心肌細(xì)胞中，由于高糖高脂引起的iNOS大量表達(dá)使NO和還原型輔酶Ⅱ（NADPH）氧化酶生成增多，從而使過氧化亞硝基產(chǎn)生增多，引起心肌細(xì)胞損傷和凋亡[6]。MCP-1是一種炎性因子，能下調(diào)成熟脂肪組織中的脂蛋白脂酶（LPL）及其他脂肪來源基因表達(dá),抑制脂肪細(xì)胞對(duì)外源性脂質(zhì)的攝入，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)脂肪分解,使FFA水平升高，同時(shí)促進(jìn)脂肪組織中炎癥反應(yīng)的發(fā)生，激活核因子（NF）-κB。本研究顯示，高脂喂養(yǎng)的OLETF大鼠NO升高,同時(shí)MCP-1及FFA明顯增高，且NO水平與MCP-1、FFA水平呈正相關(guān)，而經(jīng)替米沙坦干預(yù)后NO、MCP-1及FFA水平均下降，表明糖尿病合并高脂血癥大鼠存在著明顯的內(nèi)皮細(xì)胞功能受損和動(dòng)脈內(nèi)膜的炎癥反應(yīng)，而經(jīng)替米沙坦治療后NO顯著降低，F(xiàn)FA及MCP-1亦顯著下降，提示替米沙坦治療可顯著減輕內(nèi)皮功能損傷和動(dòng)脈內(nèi)膜的炎癥反應(yīng)，與Pan等[7]實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

替米沙坦是一種長(zhǎng)效血管緊張素Ⅱ受體阻斷劑，有研究以為其可能通過阻斷血管緊張素Ⅱ的作用而減少脂肪組織MCP-1的表達(dá)；同時(shí)替米沙坦還有激活過氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR）γ的作用[8]，PPARγ的活化使皮下脂肪細(xì)胞FFA轉(zhuǎn)化為三酰甘油，可降低血漿FFA；減輕炎癥，抑制脂肪細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子（TNF）-α，增強(qiáng)脂聯(lián)素分泌；在血管壁細(xì)胞有抗炎作用，能減輕動(dòng)脈硬化病變。亦有研究認(rèn)為替米沙坦可能通過拮抗血管緊張素Ⅱ引起的NF-κB的活化作用使iNOS生成較少而降低NO水平，從而減輕高濃度NO對(duì)機(jī)體的損害[9]。NO通過調(diào)節(jié)NF-κB水平產(chǎn)生一個(gè)自動(dòng)調(diào)整作用，低濃度NO時(shí)NF-κB水平上升，上調(diào)iNOS表達(dá)，相反，在高濃度NO時(shí)，NF-κB水平和DNA結(jié)合活性被抑制，減少iNOS轉(zhuǎn)錄[10]。本研究中各組NOS和iNOS差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義亦可能與此有關(guān)。

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