張 敏 李桂珍 宋蒙蒙 張理濤

慢性蕁麻疹（chronic urticaria，CU）是皮膚科的常見病，患者幾乎每天均出現(xiàn)風(fēng)團(tuán)和瘙癢，病程超過6周。CU病因復(fù)雜，發(fā)病機(jī)制尚不明確，通常認(rèn)為IgE介導(dǎo)的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)和組胺的釋放是其發(fā)生的重要原因。血清IgE是一種親細(xì)胞性反應(yīng)素型抗體，正常人血清中含量比較少且穩(wěn)定，但在Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)中其血清IgE含量明顯增高。二胺氧化酶（di?amine oxidase，DAO）是一種催化組胺、腐胺等二胺類氧化生成醛的細(xì)胞內(nèi)酶，是組胺等多胺物質(zhì)的分解代謝酶，在哺乳動(dòng)物組胺代謝中起著重要作用。本文通過研究慢性蕁麻疹患者血清中二胺氧化酶活性的變化及其與病情程度和評(píng)分的關(guān)系，探討二胺氧化酶活性改變及血清總IgE水平在慢性蕁麻疹中的意義。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2010年4月—11月于我院皮膚變態(tài)反應(yīng)科的CU患者68例，男36例，女32例，年齡18～60歲，平均（36.82±11.94）歲，病程2個(gè)月～10年。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）病程超過6周。（2）反復(fù)起風(fēng)團(tuán)，持續(xù)時(shí)間≤24 h。（3）非異位性體質(zhì)者。（4）年齡18～60歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）有食物、藥物等明確過敏原者。（2）有肝、腎等重要器官疾患，有精神神經(jīng)病史及精神病家族史者。（3）物理性蕁麻疹和人工蕁麻疹者。（4）干預(yù)3 d內(nèi)使用抗組織胺類、類固醇激素及免疫抑制藥物者。另選同期于我院健康體檢者54例為健康對(duì)照組，男30例，女24例，年齡23～67歲，平均（39.45±9.83）歲，均無慢性過敏性疾病史、精神神經(jīng)疾病及精神病家族史。2組性別（χ2=0.602）、年齡（t=0.741）差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

1.2 二胺氧化酶的測(cè)定 參照參考文獻(xiàn)[3]，2組受試者均常規(guī)取外周靜脈血3 mL，離心收集血清500 μL，-70℃保存。血清DAO活性應(yīng)用分光光度法測(cè)定，波長(zhǎng)436 nm處分別測(cè)定在1、1.5、3 h的DAO活性。DAO標(biāo)準(zhǔn)品、辣根過氧化物酶、鄰聯(lián)茴香胺及戊二胺均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。

1.3 血清總IgE測(cè)定 采用酶聯(lián)免疫吸附法，取所需用量的反應(yīng)微孔條標(biāo)記后，加入25 μL的IgE標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控血清和待測(cè)標(biāo)本，加入100 μL磷酸鹽緩沖液，充分混勻，室溫孵育15 min，用蒸餾水1∶10稀釋洗液后，流水沖洗，加入100 μL含抗人IgE單克隆抗體與辣根過氧化酶的結(jié)合物，混勻，室溫孵育20 min，沖洗，干燥，加入含過氧化氫和色素基質(zhì)的顯色液，避光放置15 min，終止反應(yīng)30 min內(nèi)，在450 nm波長(zhǎng)讀取吸光度（OD）值。

1.4 蕁麻疹分級(jí)及其活動(dòng)評(píng)分 根據(jù)Tedeschi等[1]報(bào)道方法，依據(jù)其風(fēng)團(tuán)大小對(duì)慢性蕁麻疹進(jìn)行分級(jí)。同時(shí)依據(jù)2009年EAACI等組織制定的蕁麻疹治療指南，對(duì)慢性蕁麻疹患者的風(fēng)團(tuán)和瘙癢2個(gè)主要癥狀進(jìn)行蕁麻疹活動(dòng)評(píng)分（urticaria activity score，UAS），總分值為0～6分[2]。0分為無團(tuán)，無瘙癢；一級(jí)（1分）1～10個(gè)小風(fēng)團(tuán)（輕度，直徑＜3 cm），瘙癢輕度，不煩躁；二級(jí)（2分）10～50個(gè)小風(fēng)團(tuán)或1～10個(gè)大風(fēng)團(tuán)（中度，直徑≥3 cm），瘙癢中度，尚能忍受；三級(jí)（3分）＞50個(gè)小風(fēng)團(tuán)或＞10個(gè)大風(fēng)團(tuán)，重度，瘙癢重度，不能忍受。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用重復(fù)測(cè)量資料方差分析或t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料組間比較用卡方檢驗(yàn)，采用Spearman和Pear?son相關(guān)性分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.12 組不同時(shí)點(diǎn)血清DAO活性的比較 慢性蕁麻疹組血清DAO的活性在3個(gè)不同的時(shí)點(diǎn)均低于健康對(duì)照組，且其活性在1、1.5及3 h逐漸升高。2組患者血清DAO活性時(shí)間與組間效應(yīng)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），且分組與時(shí)間有交互作用（均P＜0.01），見表1。

2.2 DAO活性與蕁麻疹分級(jí)及其活動(dòng)評(píng)分的相關(guān)性 DAO活性與慢性蕁麻疹的輕、中、重度呈正相關(guān)（rs=0.254，P＜0.05），與UAS評(píng)分無相關(guān)性（rs= 0.196，P＞0.05），見表2。

2.3 血清總IgE的測(cè)定結(jié)果 血清總IgE＜175 IU/mL水平上，慢性蕁麻疹組32例（47.06%）和健康對(duì)照組的45例（83.33%）差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=14.933，P＜0.01）。

表1 2組不同時(shí)間點(diǎn)血清二胺氧化酶活性的比較（U/mL，±s）

表1 2組不同時(shí)間點(diǎn)血清二胺氧化酶活性的比較（U/mL，±s）

F時(shí)間=69.715，F(xiàn)組間=30.679，F(xiàn)交互=43.547，均P＜0.01

組別慢性蕁麻疹組健康對(duì)照組n 68 54 1 h 3.02±2.17 3.14±1.96 1.5 h 3.36±1.94 6.30±2.34 3 h 3.37±1.70 5.54±1.82

表2 68例慢性蕁麻疹分級(jí)、活動(dòng)評(píng)分與DAO范圍

2.4 血清總IgE與蕁麻疹分級(jí) 血清總IgE＜175 IU/mL時(shí)，其與慢性蕁麻疹的輕、中、重度分級(jí)無相關(guān)性（rs=0.125，P＞0.05），血清總IgE≥175 mIU/L時(shí)，其與病情分級(jí)呈正相關(guān)（rs=0.539，P＜0.05），見表3。

表3 68例慢性蕁麻疹分級(jí)與血清總IgE水平（IU/mL，±s）

表3 68例慢性蕁麻疹分級(jí)與血清總IgE水平（IU/mL，±s）

蕁麻疹分級(jí)輕度中度重度n 15 36 17總IgE＜175 IU/mL 159.32±34.87 155.61±27.30 160.12±18.21總IgE≥175 IU/mL 199.23±23.03 230.47±30.39 302.15±29.86

2.5 血清總IgE與DAO的相關(guān)性 血清總IgE（201.63±35.09）IU/mL與DAO活性（3.46±1.84）U/ mL無相關(guān)性（r=0.183，P＞0.05）。

3 討論

有研究認(rèn)為，慢性蕁麻疹速發(fā)相反應(yīng)與組胺釋放密切相關(guān)[4]。哺乳動(dòng)物體內(nèi)組胺的分解代謝主要有2種途徑，一是可以在DAO的作用下氧化脫氨基，二是被組胺-N-甲基轉(zhuǎn)氧酶（HNMT）甲基化，而組胺的定位則決定了其分解的方式[5]。DAO亦稱組胺酶，是組胺在體內(nèi)分解代謝的主要酶，也是具有高度活性的細(xì)胞內(nèi)酶。正常狀態(tài)下其存在于哺乳動(dòng)物小腸黏膜絨毛上層，腎和胎盤組織高度表達(dá)，而在大多數(shù)組織中DAO的活性僅僅達(dá)到檢測(cè)極限[6]。近年來，有研究認(rèn)為組胺不耐受，產(chǎn)生的原因是由于組胺累積和組胺降解能力的不平衡所引起，最終導(dǎo)致組胺在體內(nèi)過量，引起腹瀉、哮喘、蕁麻疹等臨床癥狀[7]。

本研究表明患者的血清DAO活性在1、1.5及3 h均低于健康對(duì)照組，且2組在時(shí)間與組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明在患者體內(nèi)DAO活性與健康人存在差異，這與Lessof等[8]研究相近。考慮原因?yàn)槠浠钚暂^低，導(dǎo)致體內(nèi)的組胺不能有效地分解代謝，在體內(nèi)蓄積，從而產(chǎn)生相應(yīng)的臨床癥狀，導(dǎo)致了蕁麻疹的發(fā)生或遷延。進(jìn)一步分析表明，DAO活性與其病情的輕、中、重度存在一定的相關(guān)性，表明DAO在病情的發(fā)展階段可能起到了一定的作用。新近研究亦表明，一些藥物和食物可以影響DAO活性，進(jìn)而影響到組胺的代謝，起到加重或誘發(fā)蕁麻疹的作用[7]。本項(xiàng)研究未發(fā)現(xiàn)UAS與DAO有相關(guān)性，可能與筆者采用的是瞬間評(píng)分法有關(guān)。有研究認(rèn)為，對(duì)于UAS的測(cè)定應(yīng)該為期1周，其值相加為最后的結(jié)果[9]，而本研究由于受患者隨訪所限，沒有對(duì)其進(jìn)行加權(quán)處理，尚有待進(jìn)一步研究深化。

血清IgE作為介導(dǎo)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的主要抗體，在變態(tài)反應(yīng)疾病中起關(guān)鍵作用，患者血清IgE含量的變化與患者體內(nèi)發(fā)生蕁麻疹的嚴(yán)重程度和持續(xù)時(shí)間有關(guān)[10]。本研究結(jié)果顯示，當(dāng)血清總IgE≥175 IU/ mL時(shí)，其與慢性蕁麻疹的輕、中、重度成正相關(guān)，但血清總IgE與DAO之間未發(fā)現(xiàn)存在相關(guān)性，表明兩者雖對(duì)蕁麻疹的發(fā)生、發(fā)展起到一定的作用，但彼此間并無必然的聯(lián)系。

[1]Tedeschi A,Asero R,Lorini M,et al.Plasma levels of matrix metal?loproteinase-9 in chronic urticaria patients correlate with disease severity and C-reactive protein but not with circulating hista?mine-releasing factors[J].Clin Exp Allergy,2010,40(6):875-881.

[2]Zuberbier T,Asero R,Bindslev-Jensen C,et al.EAACI/GA(2)LEN/ EDF/WAO guideline:definition,classification and diagnosis of urti?caria[J].Allergy,2009,64(10):1417-1426.

[3]黎君友，于燕，郝軍，等.分光光度計(jì)法測(cè)定血和小腸組織二胺氧化酶活性[J].氨基酸和生物資源，1996，18(4)：28-30.

[4]Kanny G,Moneret-Vautrin DA,Schohn H,et al.Abnormalities in histamine pharmacodynamics in chronic urticaria[J].Clin Exp Aller?gy,1993,23(12):1015-1020.

[5]Kuefner MA,Schwelberger HG,Weidenhiller M,et al.Both catabol?ic pathways of histamine via histamine-N-methyltransferase and di?amine oxidase are diminished in the colonic mucosa of patients with food allergy[J].Inflamm Res,2004,53(Suppl 1):S31-S32.

[6]Klocker J,M?tzler SA,Huetz GN,et al.Expression of histamine de?grading enzymes in porcine tissues[J].Inflamm Res,2005,54(Sup?pl 1):S54-S57.

[7]Maintz L,Novak N.Histamine and histamine intolerance[J].Am J Clin Nutr,2007,85(5):1185-1196.

[8]Lessof MH,Gant V,Hinuma K,et al.Recurrent urticaria and re?duced diamine oxidase activity[J].Clin Exp Allergy,1990,20: 373-376.

[9]M?ynek A,Zalewska-Janowska A,Martus P,et al.How to assess dis?ease activity in patients with chronic urticaria[J]?Allergy,2008,63 (6):777-780.

[10]Kessel A,Helou W,Bamberger E,et al.Elevated serum total IgE--a potential marker for severe chronic urticaria[J].Int Arch Allergy Im?munol,2010,153(3):288-293.