楊麗莉，張 曉，張彥琴

（山西省農(nóng)業(yè)科學院旱地農(nóng)業(yè)研究中心，山西 太原 030006）

萱草（Hemerocallis hybrida）是百合科（Liliaceae）萱草屬（Hemerocallis）多年生宿根草本植物，主產(chǎn)于我國南、北方大部分地區(qū)，歐洲南部也有分布。該屬植物適應性廣，對土壤要求不嚴，花多為黃色、并可食用，在我國廣為人知。大花萱草通常稱為多倍體萱草，因其具有既觀花又觀葉的雙重價值而被廣泛用于切花、盆栽及園林綠化等，主要用途是觀賞?！皷|方不敗”是從歐美引進的多倍體品種，葉型修長似蘭草，叢生；株叢高35～45 cm?；ㄝ愦謮?，高50 cm，花朵碩大，直徑可達10 cm?；ò晖饩沓史奂t色，花心帶有金黃暈，色澤嬌艷，每葶可著花20余朵?；ㄆ?月中旬至9月中旬。其特點是:抗倒伏，復色花艷麗，花多且大，可反復開花，除了作綠化種植外，還可作切花?！皷|方不敗”萱草整株姿態(tài)優(yōu)雅，嫵媚動人，甚是惹人喜愛，是大花萱草中重要的新品種。

自然界中，大花萱草一般以分蘗的方式進行繁殖，每年分蘗3～4株，繁殖速度慢，遠不能滿足商品化生產(chǎn)的需要。植物組織培養(yǎng)技術是指對引進和培育的新品種在短期內(nèi)進行種苗的大量繁殖、用于生產(chǎn)建設的重要技術方法?？萍脊ぷ髡邔Υ蠡ㄝ娌莸慕M織培養(yǎng)研究已有部分報道[1-6]，但是不同大花萱草品種、不同外植體的培養(yǎng)方法和培養(yǎng)基配方存在較大差異，對“東方不敗”萱草的研究尚未見報道。

本試驗對大花萱草“東方不敗”組織培養(yǎng)技術中的關鍵技術參數(shù)進行了研究，旨在為實現(xiàn)組織培養(yǎng)工廠化育苗提供配套的技術服務。

1 材料和方法

1.1 材料

“東方不敗”是由北京紫鹿.艾維生種植園首次從國外引進的大花萱草品種，我們對其進行了引種和馴化栽培。供試材料來源于山西省農(nóng)科院旱地農(nóng)業(yè)研究中心大花萱草試驗田種植3 a的種苗，盛花期取花蕾作材料，以子房為外植體。

1.2 方法

1.2.1 愈傷組織誘導分化培養(yǎng) 采摘苗圃健壯母株上發(fā)育正常的花蕾，用洗滌劑清洗表面后，用流水沖洗干凈。75%酒精消毒1 min，0.1%HgCl2滅菌15～20 min，無菌水沖洗4次。在無菌條件下剝離子房，橫切成片狀接種于愈傷組織誘導培養(yǎng)基（表 1）中，暗培養(yǎng) 35 d，溫度（25±1）℃，后進行光照培養(yǎng)26 d，光照強度2000～3000 lx。統(tǒng)計愈傷組織誘導分化率。

表1 愈傷組織誘導培養(yǎng)基設置 mg/L

1.2.2 不定芽的增殖培養(yǎng) 愈傷組織分化的不定芽接種于不同增殖培養(yǎng)基（表2）上，每瓶7芽，每種培養(yǎng)基10瓶。光照培養(yǎng)26 d后，統(tǒng)計苗數(shù)，計算繁殖系數(shù)。光照強度為2000～3000 lx，溫度為（25±1）℃。

表2 不定芽繼代繁殖培養(yǎng)基設置 mg/L

1.2.3 生根培養(yǎng) 無根小苗接種在不同的生根培養(yǎng)基（表3）上進行光培養(yǎng)，每瓶接7株，每種培養(yǎng)基接種10瓶。第10天起開始觀察、記錄生根情況。第27天測量根長，統(tǒng)計生根數(shù)，計算生根率。光照強度為2000～3000 lx，溫度為（25±1）℃。生根率＝生根苗數(shù)/接種小苗數(shù)×100%。

表3 生根培養(yǎng)基設置 mg/L

1.2.4 馴化栽培 在溫室內(nèi)打開瓶蓋煉苗3 d后，取出小苗洗凈根部的培養(yǎng)基；再用0.1%多菌靈藥水洗根，移植在拱棚內(nèi)不同基質(zhì)的苗床上。移栽完畢后澆透水，并用0.1%的百菌清或多菌靈噴霧保苗。前1周遮蓋60%的遮陽網(wǎng)，并保持一定的溫度、濕度和光照。

2 結果與分析

2.1 子房愈傷組織的誘導分化培養(yǎng)

子房切片接種于10種不同激素配比和濃度配比的誘導分化培養(yǎng)基上，7～10 d子房切片開始膨大，15 d開始出現(xiàn)白色、松散狀愈傷組織。隨著培養(yǎng)時間的延長，白色、松散狀愈傷組織逐漸形成圓球狀、致密型、淡黃色胚性愈傷組織塊（圖 1）。在只有 6-BA 的培養(yǎng)基上（F1，F(xiàn)3，F(xiàn)5，F(xiàn)7，F(xiàn)9，F(xiàn)10），隨著 6-BA質(zhì)量濃度的升高（1～6 mg/L），這種胚性愈傷組織越致密。在6-BA和2，4-D同時存在的 F2，F(xiàn)4，F(xiàn)6，F(xiàn)8號培養(yǎng)基上的胚性愈傷組織比單純6-BA培養(yǎng)基上的量大，結構緊密，色澤更鮮亮。

將這些愈傷組織轉(zhuǎn)入原號培養(yǎng)基進行繼代光照培養(yǎng)，觀察發(fā)現(xiàn)，愈傷組織的顏色由黃色變成黃綠色，并出現(xiàn)綠色的突起，繼而分化出不定芽（圖 2）。

從10種培養(yǎng)基愈傷組織分化率的結果（表4）看，F(xiàn)1～F4號培養(yǎng)基在 6-BA1～2 mg/L 的條件下，誘導分化率較低。F5～F8培養(yǎng)基6-BA為3～4 mg/L的范圍內(nèi)，分化率提高，可達30.7%～38.2%。F9～F10號培養(yǎng)基上，隨著6-BA質(zhì)量濃度的繼續(xù)升高（5～6 mg/L），分化率有所下降。在含有 2，4-D 的培養(yǎng)基上，F(xiàn)2，F(xiàn)4，F(xiàn)6，F(xiàn)8形成的愈傷組織比單純含 6-BA 的培養(yǎng)基 F1，F(xiàn)3，F(xiàn)5，F(xiàn)7量大，而不定芽的分化率普遍有所下降。因此，子房愈傷組織誘導分化最適宜的培養(yǎng)基為MS＋6-BA4mg/L。

表4 “東方不敗”萱草子房愈傷組織的誘導分化率

2.2 芽增殖培養(yǎng)

切下芽塊接種在不同的繼代繁殖培養(yǎng)基上進行光照培養(yǎng)，7 d左右開始形成叢生芽，25 d長滿1瓶（圖3）。

從表5可以看出，不定芽在Y1，Y2，Y3和Y4號培養(yǎng)基上的繁殖率高于 Y5，Y6號培養(yǎng)基。Y1，Y2，Y3和 Y4號培養(yǎng)基的 6-BA 質(zhì)量濃度為 3 mg/L，Y5，Y6號為 2 mg/L，所以，繼代繁殖最適宜的6-BA質(zhì)量濃度為3 mg/L。在添加同等濃度的 IBA和 NAA的培養(yǎng)基 Y3和 Y1，Y4和 Y2上，含IBA的Y3和Y4號培養(yǎng)基的繁殖系數(shù)高于含NAA的培養(yǎng)基Y2和Y1，并且IBA較高質(zhì)量濃度（0.5 mg/L）的Y3培養(yǎng)基比IBA較低濃度（0.3 mg/L）的Y4培養(yǎng)基繁殖系數(shù)略高。因此，繼代繁殖適宜的培養(yǎng)基為MS＋6-BA 3 mg/L＋IBA 0.5 mg/L，繁殖系數(shù)可達6.4。

表5 “東方不敗”萱草在不同激素培養(yǎng)基上的繁殖系數(shù)

2.3 再生植株的生根培養(yǎng)

將繼代培養(yǎng)的小苗轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基，觀察小苗的生根時間、根的多少和根系的發(fā)育狀況，第27天測量根長，計算平均根長和平均生根數(shù)（圖4）。從表6和觀察結果可以看出，第9天時，除G1，G2培養(yǎng)基外，其他培養(yǎng)基上試管苗均開始出現(xiàn)大量白色根狀突起，其中，G4和G6號培養(yǎng)基的苗根狀突起最多，生根較早。第14天時，所有培養(yǎng)基中的苗都已生根，且根系粗壯。第16，18，21 天時，添加 NAA的 G4，G5，G6號培養(yǎng)基上試管苗的生根數(shù)明顯多于添加IBA的G1，G2，G3號培養(yǎng)基。第27天時，測量根長發(fā)現(xiàn)，NAA和IBA質(zhì)量濃度分別在 0.2，0.4 mg/L（G4和 G5，G1和G2）時，平均根長無顯著差異。NAA的生根率顯著高于IBA的生根率。G3號培養(yǎng)基IBA質(zhì)量濃度達到0.6 mg/L時，根長顯著增加。在NAA和IBA同時存在的G6號培養(yǎng)基上，根長且粗壯。從平均生根數(shù)來看，NAA質(zhì)量濃度為0.4 mg/L時，平均生根數(shù)最高可達4.7條。由于后續(xù)過渡栽培成活率依賴于根數(shù)的多少、根長、根系粗壯度等綜合指標，所以，“東方不敗”的最佳生根培養(yǎng)基為1/2 MS+0.2 mg/L NAA+0.2 mg/L IBA+20 g/L蔗糖（或白糖）+6.5 g/L瓊脂粉。

表6 “東方不敗”在不同培養(yǎng)基、不同時間內(nèi)的生根數(shù)及根長統(tǒng)計（70株）

2.4 苗的馴化與移栽

組培苗的過渡栽培環(huán)節(jié)是實現(xiàn)快繁的最后一個重要環(huán)節(jié)，其關鍵是保持介質(zhì)的保水和透氣性、保持較低的溫度和較高的濕度。本試驗在移栽管理過程中發(fā)現(xiàn)，首先要用0.1%多菌靈藥水洗根，并在每周噴施1次0.1%的百菌清抑制雜菌；在介質(zhì)的選擇上，選用廉價的粗河沙并且配以每周1次的MS營養(yǎng)液補充；溫度控制為24～28℃，相對濕度85%～90%，逐漸增加光照的條件下，移栽成活率均可達92%。

3 討論

（1）本研究中，以子房作為外植體，取花蕾作為消毒材料，可有效降低初代接種培養(yǎng)的污染率，而且取材量大。這與王曉娟等[5]的研究結果相同。

（2）在6-BA為1～2 mg/L時，愈傷組織誘導率很低；隨6-BA質(zhì)量濃度升高到3～4 mg/L時，愈傷組織發(fā)生和生長較快，結構致密，色澤鮮黃。在光照條件下，伴隨著愈傷組織的發(fā)生和生長，分化出大量不定芽。從不同品種大花萱草的研究來看，對6-BA質(zhì)量濃度的要求存在很大差異[6-10]，所以，在研究大花萱草的組織培養(yǎng)技術時，應該有針對性地研究不同品種的激素水平和激素配比。

（3）在大花萱草“東方不敗”的研究中，我們也發(fā)現(xiàn)，初代誘導愈傷組織時，愈傷組織的形成過程是先出現(xiàn)白色松軟的愈傷組織，隨著誘導時間的延長，愈傷組織變?yōu)闇\黃色或黃色，致密顆粒狀。但是，愈傷組織在繼代分化培養(yǎng)時，不定芽的分化是伴隨著愈傷組織的生長同時進行的，不存在愈傷組織全部分化不定芽和全部生長為愈傷組織的情況，這與王曉娟等[5]的研究結果相同。不定芽的分化率和愈傷組織生長量大小之間的調(diào)節(jié)主要靠細胞分裂素的濃度進行。

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