陳 琪，李勝濤，陳志偉，

（1.重慶市長壽區(qū)人民醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科，重慶 401220；2.湖北黃石市中醫(yī)院，黃石 435100；3.成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都 610075）

內(nèi)關(guān)穴位注射香丹注射液預(yù)處理對
急性心肌缺血大鼠TNF-α、VEGF的影響

陳 琪1，李勝濤2，陳志偉3，

（1.重慶市長壽區(qū)人民醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科，重慶 401220；2.湖北黃石市中醫(yī)院，黃石 435100；3.成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都 610075）

[目的]探討內(nèi)關(guān)穴位注射香丹注射液對大鼠急性心肌缺血腫瘤壞死因子ɑ（TNF-ɑ）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的影響。[方法]SD大鼠內(nèi)關(guān)穴注射香丹注射液14 d，然后腹腔皮下注射異丙腎上腺素（ISO）造成急性心肌缺血模型，免疫組化法檢測心肌TNF-ɑ、VEGF。[結(jié)果]1）TNF-α在心肌缺血后表達(dá)增多，內(nèi)關(guān)組、曲池組及藥物組均可以降低其表達(dá)，內(nèi)關(guān)組的這一作用明顯優(yōu)于曲池組及藥物組。2）VEGF在心肌缺血后表達(dá)有所增高，藥物組和曲池組可以明顯增高其表達(dá)，與內(nèi)關(guān)組比較有統(tǒng)計學(xué)意義。[結(jié)論]內(nèi)關(guān)穴位注射香丹注射液預(yù)處理對急性心肌缺血大鼠的心肌具有保護(hù)作用，它可以降低TNF-α含量，增高VEGF的表達(dá)。

內(nèi)關(guān)；穴位注射；預(yù)處理；心肌缺血；TNF-ɑ；VEGF

從20世紀(jì)90年代起，越來越多的證據(jù)表明動脈粥樣硬化（AS）是血管壁的慢性炎癥，是對血管壁損害的反應(yīng)。各種炎癥因子在其中起著復(fù)雜的作用。冠心?。–HD）患者腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等炎癥因子的水平比對照組均顯著增高，并隨著冠脈病變加重、冠脈受累范圍的增加而逐漸升高，說明炎癥反應(yīng)可能參與了CHD的發(fā)生、發(fā)展。血管內(nèi)皮生長因子（VEFG）是一種高度特異性促血管生長因子，可直接誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖與血管化，產(chǎn)生心肌梗死區(qū)域新生血管的效應(yīng)，而CHD患者VEGF水平變化與機(jī)體缺血缺氧密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)采用大鼠急性心肌缺血模型，觀察內(nèi)關(guān)穴位注射香丹注射液對大鼠心肌缺血TNF-ɑ、VEGF的影響。

1 材料與方法

1.1 試劑 TNF-ɑ、VEGF試劑盒（購自北京中杉生物科技有限公司）、10%水合氯醛、10%福爾馬林液，異丙腎上腺素（ISO）（上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)，2 mL∶1 mg/支，批號：071201，國藥準(zhǔn)字：H31021344），香丹注射液（湖北清大康迪藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，2 mL/支，批號：20070404，國藥準(zhǔn)字：Z42020391），復(fù)方丹參滴丸（天津天士力聯(lián)合制藥股份有限公司生產(chǎn)，27mg/粒，批號：20071009。國藥準(zhǔn)字：Z10950111），生理鹽水等。

1.2 動物模型的建立及分組 SD大鼠50只，體質(zhì)量200～300 g，雌雄各半，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究中心提供。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按動物體質(zhì)量、性別隨機(jī)分為5個組，10只/組。空白組：正常飼養(yǎng)，不給予任何處理。模型組：正常飼養(yǎng)14 d，末次喂飼后24 h后皮下注射ISO 2 mg/kg造成急性心肌缺血模型[1]。藥物組：每天給予復(fù)方丹參滴丸270 mg/kg（相當(dāng)于人用量的20倍）灌胃。共14 d，末次灌胃24h后皮下注射ISO2mg/kg。曲池組：用5號注射針頭垂直刺入一側(cè)曲池穴3～4 mm，注射香丹注射液0.1 mL，第2天換另一側(cè)曲池穴位注射，1次/d，共14 d，末次注射24 h后皮下注射ISO 2 mg/kg。內(nèi)關(guān)組：用5號注射針頭垂直刺入一側(cè)內(nèi)關(guān)穴1～2 mm，注射香丹注射液0.1 mL，第2天換另一側(cè)內(nèi)關(guān)穴，1次/d，共14 d，末次注射 24 h后皮下注射 ISO（2 mg/kg）。預(yù)處理及造模過程中有部分動物死亡，最后取得38份標(biāo)本。

1.3 標(biāo)本采集與檢測方法 注射ISO 24 h后，用10%水合氯醛（按400 mg/kg量腹腔注射）麻醉大鼠，取出心臟，置10%甲醛溶液中固定。免疫組化法檢測TNF-α及VEGF。SP染色，在顯微鏡200倍下用圖形分析系統(tǒng)定量觀察。測量單位視野染色區(qū)域的面積，積分吸光度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組計量資料采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法。

2 結(jié)果

結(jié)果見表1、表2。

表1 各組TNF-α比較(±s)Tab.1 Comparison of TNF-α in each group(±s)

表1 各組TNF-α比較(±s)Tab.1 Comparison of TNF-α in each group(±s)

注：與空白組比較，＃＃P<0.01，＃P<0.05；與模型組比較，**P<0.01，*P<0.05；與藥物對照組比較，△P<0.05；與曲池組比較，▲▲P<0.01，▲P<0.05。

組別空白組模型組藥物組曲池組內(nèi)關(guān)組n 8 8 6 8 8面積（μm2）243 132.88±33 386.34 669 586.38±45 304.84＃＃562 090.33±53 431.40＃＃566 980.38±75 662.04＃＃370 270.25±21 241.43**△▲▲積分吸光度（PU）67 624.36±8 782.48 180 405.90±16 324.16＃＃130 445.00±27 955.23＃*156 330.50±20 338.44＃＃105 628.30±63 09.94**▲

表2 各組VEGF比較(±s)Tab.2 Comparison of VEGF in each group(±s)

表2 各組VEGF比較(±s)Tab.2 Comparison of VEGF in each group(±s)

注：與空白組比較，＃＃P<0.01，＃P<0.05；與模型組比較，**P<0.01；與藥物對照組比較，△△P<0.01；與曲池組比較，▲▲P<0.01。

組別空白組模型組藥物組曲池組內(nèi)關(guān)組n 8 8 6 8 8面積（μm2）182 810.30+32 698.37 287 777.80±80 996.40 569 483.50±60 267.23＃＃**619 204.80±54 823.55＃＃**316 218.90±18 639.69△△▲▲積分吸光度（PU）50 356.94±8 367.86 89 092.16±19 172.22＃148 815.30±13 641.23＃＃**155 843.80±12 714.25＃＃**85 198.00± 4 938.60△△▲▲

3 討論

TNF-α可通過多種機(jī)制促進(jìn)AS的發(fā)生與發(fā)展，誘導(dǎo)急性冠脈癥狀和炎癥反應(yīng)的產(chǎn)生。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)主動脈弓內(nèi)膜增厚，動脈粥樣斑塊明顯的實(shí)驗(yàn)組TNF-α較對照組明顯升高，說明TNF-α與AS的發(fā)生有密切關(guān)系。TNF-α在CHD、高血壓患者中升高，與血管疾病的發(fā)生密切相關(guān)。在穩(wěn)定性心絞痛（SA）組明顯高于正常對照組；而急性心肌梗死（AMI）組和不穩(wěn)定性心絞痛（UA）組又明顯高于正常對照組和SA組，說明血清TNF-α水平與心肌缺血的程度有關(guān)，一定意義上反映了冠脈病變的嚴(yán)重程度，是反映心肌缺血的良好指標(biāo)。正常心肌細(xì)胞產(chǎn)生極微量的TNF-α，但在CHD狀態(tài)下，心肌細(xì)胞受多種因素的刺激而產(chǎn)生TNF-α，并可通過作用于自身TNF-α受體，大量誘導(dǎo)的NO（一氧化氮）作用于心肌細(xì)胞、EC（內(nèi)皮細(xì)胞）的Fas/Fas配體(FasL)系統(tǒng)而使細(xì)胞發(fā)生凋亡。本研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α在心肌缺血后表達(dá)明顯增高，內(nèi)關(guān)組預(yù)處理后表達(dá)明顯降低。

VEGF在正常情況下人體中含量很低，心肌缺血缺氧時，VEGF及VEGF mRNA表達(dá)增加，提示缺血和缺氧是刺激VEGF表達(dá)增加的重要因素。在AMI患者中VEGF明顯增加，高于SA患者，且VEGF逐漸升高，在2周時達(dá)到最高峰，其峰值與梗死范圍相關(guān)，在1～2周內(nèi)VEGF的高水平引起側(cè)支循環(huán)形成。隨著缺氧時間延長，心肌產(chǎn)生的VEGF增加，缺血時間與VEGF產(chǎn)生量呈正比。冠狀動脈狹窄程度越重，病變累及的血管越多，血清VEGF升高越顯著。一旦冠狀動脈狹窄解除，血清VEGF水平迅速下降至正常。本研究顯示，VEGF在心肌缺血后與空白組比較有增高趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義，在藥物組、曲池組、內(nèi)關(guān)組的表達(dá)較空白組明顯增高；藥物組、曲池組較內(nèi)關(guān)組VEGF增高更為顯著。

內(nèi)關(guān)是手厥陰心包經(jīng)的絡(luò)穴，同時又是八脈交會穴之一，通于陰維脈，為歷代醫(yī)家治療心痛病癥之要穴。既往已有的臨床和實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)針刺內(nèi)關(guān)對于減輕、緩解心絞痛有確切作用。本研究顯示內(nèi)關(guān)組預(yù)處理對急性心肌缺血大鼠的心肌具有保護(hù)作用，可以降低心肌TNF-α含量，增高VEGF的表達(dá)，減輕心肌組織在急性心肌缺血中的損傷。

[1] 吳雪茹,吳啟端,匡忠生,等.瓜薤葛丹湯抗大鼠心肌缺血的作用研究[J].中藥新藥與臨床藥理,2008,19(3):203-205.

The effects of pretreatment with acupoint injection of Xiangdan injection at Neiguan(PC6)on TNF-α,
VEGF in rats with acute myocardial ischemia

CHEN Qi1,LI Sheng-tao2,CHEN Zhi-wei3
（1.People's Hospital of Chongqing Changshou District,Chongqing 401200,China;2.Huangshi Hospital of TCM in Hubei,Huangshi435100,China;3.Chengdu University of TCM,Chengdu 610075,China）

[Objective]To explore the influence on myocardial ischemia by testing TNF-ɑ and VEGF in the rats pre-injected with Xiang-Dan injection into PC6.[Methods]SD rats were

XiangDan injection into PC6 for 14 days,followed by subcutaneous isoprenaline injection at abdomen to inducing myocardial ischemia.TNF-ɑ and VEGF expression were tested with immunohistochemical assay.[Result]The content of TNF-α was decreased in PC6 group,Drug group and LI11 group.The method of pre-injection of XiangDan injection into PC6 was more effective than Drug group and LI11 group in protecting the myocardium tissue from ischemia and anoxia.The content of VEGF in model group was higher than that of normal group.The content of VEGF was also increased significantly in drug group and LI11 group.Compared with PC6 group statistical significance was obvious.[Conclusions]The method of XiangDan pre-injection into PC6 acupoint can protect the myocardium from ischemia and anoxia.It can decrease the level of TNF-α and increase the contents of VEGF.

PC6；acupoint injection；preconditioning；myocardial ischemia；TNF-ɑ；VEGF.

R285.5

A

1672-1519(2011)01-0067-03

陳 琪（1983－），女，碩士，醫(yī)師，研究方向?yàn)獒標(biāo)幗Y(jié)合防治老年性疾病的臨床及實(shí)驗(yàn)研究。

李勝濤。

2010-06-30）