王良妥，張湘蘭，譚日標(biāo)

(陽(yáng)江市人民醫(yī)院，廣東 陽(yáng)江 529500)

T細(xì)胞亞群在再生障礙性貧血外周血的表達(dá)及臨床意義

王良妥，張湘蘭，譚日標(biāo)

(陽(yáng)江市人民醫(yī)院，廣東 陽(yáng)江 529500)

目的探討再生障礙性貧血治療前后外周血T細(xì)胞亞群、腫瘤壞死因子(TNF-α)及HLA-DR抗原的變化。方法選取2008-2010年于我院住院治療的38例再生障礙性貧血患者為觀察組，以同期門診體檢30例健康者做為對(duì)照組。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩組T淋巴細(xì)胞亞群及HLA-DR抗原，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)TNF-α。結(jié)果與對(duì)照組相比，觀察組治療前、顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；、HLA-DR及TNF-α水平顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。治療后觀察組、顯著上升、HLA-DR及TNF-α水平顯著下降，與治療前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論再障患者發(fā)病與免疫功能異常密切相關(guān)，存在T淋巴細(xì)胞亞群的失調(diào)及T淋巴細(xì)胞異常活化。

再生障礙性貧血；T細(xì)胞亞群；腫瘤壞死因子；HLA-DR

再生障礙性貧血(AA)是較為常見且嚴(yán)重的血液病之一，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜、病因未明。目前認(rèn)為：由免疫介導(dǎo)的造血功能抑制在再生障礙性貧血的發(fā)病過程中起重要作用，而T淋巴細(xì)胞是細(xì)胞免疫反應(yīng)中的主要效應(yīng)細(xì)胞[1-2]。為探討再生障礙性貧血外周血T細(xì)胞亞群、腫瘤壞死因子(TNF-α)及HLA-DR抗原的變化，我們對(duì)2008-2010年于我院住院治療的38例再生障礙性貧血患者分析如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2008年8月至2010年8月于我院住院治療的38例再生障礙性貧血患者為觀察組，年齡15～68歲，平均32歲。其中男23例，女15例；重型再生障礙性貧血(SAA)25例，慢性再生障礙性貧血(CAA)13例。患者自發(fā)病至住院時(shí)間為18 d～25個(gè)月，所有患者均符合全國(guó)再障診斷標(biāo)準(zhǔn)。選取同期門診體檢的30例健康者為對(duì)照組，年齡16～70歲，平均33歲，男18例，女12例。兩組在年齡、性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 T淋巴細(xì)胞亞群及HLA-DR檢測(cè) 取外周靜脈血4 ml，乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，取4個(gè)FACS試管，分別向其中加入組合的熒光CD3、CD4、CD8和HLA-DR抗體，再加入抗凝全血100 μL，孵育15 min后加溶血?jiǎng)?，等完全溶血后立即上流式?xì)胞儀檢測(cè)。

1.2.2 外周血TNF-α檢測(cè) 抽取外周靜脈血8 ml，EDTA抗凝后將血液離心，取上清，放置-20℃冰箱待用。按說明書采用ELISA法進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 治療方法 普通型再障給予丙酸睪丸酮或康力龍加環(huán)胞菌素治療；重型再障給予環(huán)胞素(CSA)、抗胸腺淋巴細(xì)胞球蛋白(ATG)加康力龍治療。按血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估治療效果。基本治愈、明顯緩解加明顯進(jìn)步為治療有效。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 處理數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組治療前與對(duì)照組在T細(xì)胞亞群、HLA-DR及TNF-α平比較 與對(duì)照組相比，觀察組治療前顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；、HLA-DR及TNF-α水平顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見表1。

2.2 治療前觀察組SAA與CAAT細(xì)胞亞群、HLA-DR及TNF-α水平比較 較CAA患者，SAA患者顯著降低，、HLA-DR及TNF-α水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

2.3 觀察組臨床療效及治療前、后T細(xì)胞亞群、HLA-DR及TNF-α水平比較 38例治療組患者經(jīng)治療臨床基本治愈5例，明顯緩解13例，明顯進(jìn)步8例，無(wú)效12例，總有效率為68.4%。和治療前相比，治療后觀察組、顯著上升，CD8+、HLA-DR及TNF-α水平顯著下降，與治療前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表1 兩組T細(xì)胞亞群、HLA-DR及TNF-α水平比較()

表2 SAA與CAAT細(xì)胞亞群、HLA-DR及TNF-α水平比較(±s)

表2 SAA與CAAT細(xì)胞亞群、HLA-DR及TNF-α水平比較(±s)

注：與CAA相比，*P＜0.01。

組別CAA SAA例數(shù)13 25 CD3+(%) 63.16±8.32 64.42±7.18 CD4+(%) 35.68±6.82 28.35±7.21* CD8+(%) 29.98±5.76 37.20±5.97* CD4+/CD8+ 1.35±0.72 1.09±0.36* HLA-DR(%) 12.10±3.78 18.26±4.15* TNG-α(μg/L) 0.82±0.28 1.19±0.32*

表3 觀察組治療前后T細(xì)胞亞群、HLA-DR及TNF-α水平比較（±s）

表3 觀察組治療前后T細(xì)胞亞群、HLA-DR及TNF-α水平比較（±s）

注：與治療前相比，*P＜0.01。

時(shí)間治療前治療后例數(shù)38 38 CD3+(%) 64.24±7.67 63.87±7.18 CD4+(%) 31.78±7.80 38.19±8.12* CD8+(%) 31.67±6.96 24.25±5.27* CD4+/CD8+ 1.21±0.37 1.64±0.47* HLA-DR(%) 16.72±3.15 10.26±3.17* TNF-α(μg/L) 0.91±0.38 0.71±0.18*

3 討論

再生障礙性貧血的發(fā)病機(jī)制目前不是很清楚，最近的研究表明再障患者的發(fā)病與T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量、比例失調(diào)、功能和表型明顯改變有關(guān)[3]。表1可見，觀察組治療前顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。T細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)中的主要效應(yīng)細(xì)胞與對(duì)于維持機(jī)體免疫狀態(tài)平衡起重要作用，二者作用相反[4-5]。輔助造血抑制造血顯著降低說明機(jī)體造血功能抑制增強(qiáng)。抑制造血的作用主要是通過細(xì)胞毒作用直接抑制骨髓造血干細(xì)胞增殖，同時(shí)它也可以通過大量分泌細(xì)胞因子間接抑制造血功能。HLA-DR存在于巨噬細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞表面，除具參與抗原提呈外，還具有激活同種異型免疫反應(yīng)作用，是T淋巴細(xì)胞活化的標(biāo)志之一[6]。TNF-α主要存在于和細(xì)胞的胞漿中，再障患者骨髓中高水平的TNF-α主要由活化的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生[7]。觀察組、HLA-DR及TNF-α水平顯著高于對(duì)照組，說明T細(xì)胞亞群及活化T細(xì)胞的變化，引起淋巴因子的分泌失衡，產(chǎn)生過量的造血抑制性淋巴因子，參與再生障礙性貧血的發(fā)病過程。再障患者骨髓造血衰竭與活化細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞有關(guān)，活化的T淋巴細(xì)胞釋放出TNF-α、IFNγ等造血負(fù)調(diào)控因子，使機(jī)體造血抑制活性明顯增強(qiáng)，導(dǎo)致骨髓造血功能衰竭。由表2可見，重型再障患者與慢性再障患者相比，CD8+顯著降低、HLA-DR及TNF-α水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，這更有力地證實(shí)了T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)在再障發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。經(jīng)免疫治療后，表3結(jié)果顯示，再障患者和治療前相比，治療后觀察組、顯著上升、HLA-DR及TNF-α水平顯著下降，與治療前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。經(jīng)免疫治療后，患者輔助T細(xì)胞功能增強(qiáng)，細(xì)胞免疫功能得到調(diào)節(jié)。免疫治療能夠顯著抑制T淋巴細(xì)胞活化，減少異常增多的、調(diào)節(jié)比例。同時(shí)通過減少TNF-α等造血負(fù)調(diào)控因子，使造血抑制作用減弱，從而使造血功能恢復(fù)。有研究證實(shí)，免疫治療對(duì)于治療重型再障有效率可達(dá)60%左右，很大程度上改善了藥物療效，特別是遠(yuǎn)期療效，提高了患者的長(zhǎng)期生存率及生存質(zhì)量[8]。

綜上所述，再障患者發(fā)病與免疫功能異常密切相關(guān)，T淋巴細(xì)胞亞群的失調(diào)及T淋巴細(xì)胞異常活化在發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。

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Expression of T-lymphocyte subsets and its clinical significance in aplastic anemia.

WANG Liang-tuo,ZHANG Xiang-lan,TAN Ri-biao.People's Hospital of Yangjiang City,Yangjiang 529500,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the changes of T-lymphocyte subsets,tumor necrosis factor(TNF-α) and HLA-DR before and after the treatment of aplastic anemia.Methods38 cases with aplastic anemia from 2008 to 2010 in our hospital were selected as the study group,while 30 healthy subjects were chosen as the control group. T-lymphocyte subsets and HLA-DR,TNF-α in the two groups were detected by Flow Cytometry(FCM)and ELISA, respectively.ResultsBefore the treatment,the serumandlevel in the study group were significantly lower than that in the control group(P＜0.01),and theHLA-DR and TNF-α level were significantly higher(P＜0.01).After the treatment,theandlevel in the study group increased and the,HLA-DR and TNF-α level decreased,with statistically significant difference compared with that before the treatment(P＜0.05). Conclusion The maladjustment of immune system is closely related to the incidence of aplastic anemia,exibiting disbalance of T-lymphocyte subsets and abnormal activation of T cells.

Aplastic anemia;T-lymphocyte subsets;Tumor necrosis factor;HLA-DR

R556.5

A

1003—6350（2011）14—093—03

王良妥（1977—），男，廣東省陽(yáng)江市人，主治醫(yī)師，本科。

2011-04-12)

·檢驗(yàn)與臨床·