萬東方，武 奪，武珊珊，贠克明

鹽酸地芬尼多片作為非處方類抗暈動(dòng)藥之一，應(yīng)用比較廣泛，偶有中毒和死亡發(fā)生［1－3］。有關(guān)鹽酸地芬尼多中毒的研究主要為毒物檢測(cè)方法以及中毒和自殺的個(gè)案等方面的報(bào)道［4－6］，與中毒法醫(yī)學(xué)鑒定有關(guān)的毒物動(dòng)力學(xué)研究報(bào)道較少［7］。保存血液中的分解動(dòng)力學(xué)未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用鹽酸地芬尼多染毒犬中毒模型，研究鹽酸地芬尼多在保存血液中的分解動(dòng)力學(xué)，為鹽酸地芬尼多中毒法醫(yī)學(xué)鑒定時(shí)檢材保存和血藥濃度的推斷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與分析條件

1.1.1 氣相色譜儀（Finnigan） aw34色譜條件：NPD檢測(cè)器，DB－5毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25μm），柱溫：150℃（1 min）→10℃/min→280℃（2 min）；檢測(cè)器：NPD，300℃，空氣60 k Pa，氫氣2.3 k Pa；載氣：N21.5 m L/min。

1.1.2 氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀（Finnigan DSQ） 色譜條件：DB－5毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25μm），EI源70ev，質(zhì)量范圍：50～650，柱溫：150℃（1 min）→10℃/min→280℃（2 min）；離子源溫度：200℃，傳輸線溫：250℃，載氣：He 1.5 mL/min。

1.2 試劑 鹽酸地芬尼多片（大連天宇海濱制藥有限公司，批號(hào)：050703）；鹽酸地芬尼多標(biāo)準(zhǔn)品購于公安部物證鑒定中心；其余試劑均為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 本地雜種犬4只，15 kg～20 kg，雄性，山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.4 提取與檢測(cè) 血液1 m L，加水2 m L，勻漿5 min；取全部勻漿液，加入內(nèi)標(biāo)物SKF20μg，1 m L飽和NaCO3調(diào)p H＝9～

11，5 m L乙醚萃取，振蕩15 min，離心3000 r/min×15 r/min，取上清液4 mL置于干燥離心管中。乙醚重新萃取一次。合并兩次乙醚萃取液，40℃恒溫水浴揮去乙醚。殘?jiān)?50μL乙醇定容，取1μL進(jìn)樣。保留時(shí)間結(jié)合特征離子峰（氣－質(zhì)聯(lián)用）定性，內(nèi)標(biāo)法和標(biāo)準(zhǔn)曲線法（氣相色譜）定量。

1.5 血液樣品中的分解動(dòng)力學(xué) 禁食隔夜犬4只，5 min內(nèi)胃管勻速注入鹽酸地芬尼多148 mg/kg，注入藥物2 h后處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采集心血，肝素抗凝。每只犬血分四等份分別置于20℃、4℃、NaF、－20℃環(huán)境中，于0、1 d、4 d、10 d、30 d、60 d檢測(cè)血液中鹽酸地芬尼多含量。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0軟件處理。

2 結(jié) 果

2.1 氣相色譜和氣相色譜質(zhì)譜圖（見圖1～4）

2.2 工作曲線 準(zhǔn)確吸取不同量度鹽酸地芬尼多標(biāo)準(zhǔn)品，分別加至1 mL空白血中，配制成系列標(biāo)準(zhǔn)血樣，測(cè)0.5μg/m L～32 μg/mL范圍，鹽酸地芬尼多與內(nèi)標(biāo)峰面積比對(duì)濃度，成線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r＝0.999，線性方程為Y＝0.053X＋0.049。

2.3 回收率和精密度 取空白檢材1 m L，分別加入鹽酸地芬尼多標(biāo)準(zhǔn)溶液，檢測(cè)，測(cè)得回收率高于90%（結(jié)果見表1），變異系數(shù)CV＜3%。

表1 鹽酸地芬尼多血液回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（ ±s）

表1 鹽酸地芬尼多血液回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（ ±s）

加標(biāo)濃度（μg/m L） 檢出濃度（μg/m L） 回收率（%）5 4.98±0.12 99.6±2.410 10.23±0.26 102.3±2.620 18.32±0.30 91.6±1.5

2.4 分解動(dòng)力學(xué)研究

2.4.1 保存血液中不同時(shí)間點(diǎn)鹽酸地芬尼多的含量變化（見表2）

表2 不同時(shí)間點(diǎn)保存血液中鹽酸地芬尼多含量變化（ ±s） μg/m L

表2 不同時(shí)間點(diǎn)保存血液中鹽酸地芬尼多含量變化（ ±s） μg/m L

時(shí)段 20℃ 20℃（1%N a F）4℃ －20℃0 16.65±7.38 16.65±7.38 16.65±7.38 16.65±7.381 d 15.36±5.98 15.12±10.34 16.48±8.91 15.60±9.0010 d 15.68±7.20 15.91±9.33 16.31±8.20 13.92±7.3130 d 14.10±8.45 11.13±5.13 1） 13.52±5.54 13.53±5.7560 d 12.32±6.39 1） 10.26±5.74 1） 10.88±4.76 1） 11.40±4.51 1）120 d 12.87±1.4 1） 8.87±6.03 1） 9.12±3.96 1） 10.25±6.81 1）180 d 12.00±6.24 1） 7.58±5.31 1） 9.00±2.59 1） 10.65±8.60 1）240 d 11.34±5.12 1） 6.30±7.24 1） 8.88±4.56 1） 11.05±6.02 1）300 d 9.72±2.98 1） 5.25±4.28 1） 8.04±5.40 1） 11.01±5.92 1）與0時(shí)含量相比，1）P＜0.05

2.4.2 分解動(dòng)力學(xué)參數(shù) 采用Win Nor Lin藥代動(dòng)力學(xué)軟件處理平均藥物濃度－時(shí)間數(shù)據(jù)，其分解符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)過程。

表4 不同保存條件下血液中鹽酸地芬尼多分解動(dòng)力學(xué)參數(shù)

3 討 論

3.1 GC、GC/MS檢測(cè) 目前國內(nèi)外有關(guān)鹽酸地芬尼多的檢測(cè)方法有毛細(xì)管電泳法［4］、HLPC［5，6］法和 GC/MS法［7］。GC 和HPLC法定量較好，定性差，GC/MS定性定量均較好。本實(shí)驗(yàn)綜合比較了這些方法后首先建立了血液中鹽酸地芬尼多的GC和GC/MS分析方法。該方法在選定條件下鹽酸地芬尼多和內(nèi)標(biāo)SKF525與其他雜質(zhì)峰形分離良好，且靈敏度高，重現(xiàn)性好，同時(shí)檢材用量少、操作簡便、快速，適合于生物檢材中鹽酸地芬尼多的檢測(cè)和臨床藥物監(jiān)測(cè)。

3.2 分解動(dòng)力學(xué) 毒物分解動(dòng)力學(xué)研究毒物在尸體、檢材和自然環(huán)境中動(dòng)態(tài)變化過程或穩(wěn)定性，運(yùn)用動(dòng)力學(xué)理論和分析技術(shù)經(jīng)數(shù)學(xué)模擬來揭示此變化過程的規(guī)律性［8］。保存檢材中毒物的分解動(dòng)力學(xué)主要受保存條件的影響，包括溫度、時(shí)間、器皿類型、防腐劑、p H值及其他等。防腐劑對(duì)生物檢材中的毒物是否會(huì)產(chǎn)生影響與防腐劑的種類以及毒物的種類等有關(guān)［9－15］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，20℃、4℃、－20℃和20℃（1%NaF）保存60 d、120 d、180 d和240 d時(shí)，血液中鹽酸地芬尼多含量顯著下降為初始濃度的74.00%、65.32%、68.45%和66.85%，保存300 d時(shí)顯著下降為為初始濃度的58.39%、48.27%、66.12%和31.51%，分解半衰期分別為462.32 d、238.21 d、490.56 d和168.84 d。鹽酸地芬尼多在保存血液樣品中可分解。各保存條件下同一時(shí)間點(diǎn)鹽酸地芬尼多含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明保存溫度和抑菌劑對(duì)其影響不大。鹽酸地芬尼多中毒案件法醫(yī)學(xué)鑒定中所采血樣應(yīng)在30 d內(nèi)送檢和檢驗(yàn)。

血中平均藥物濃度－時(shí)間數(shù)據(jù)擬合結(jié)果顯示，保存全血中鹽酸地芬尼多的分解動(dòng)力學(xué)符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)過程。應(yīng)用血中鹽酸地芬尼多分解動(dòng)力學(xué)數(shù)學(xué)模型和參數(shù)，可以推測(cè)血中藥物濃度的經(jīng)時(shí)變化，推斷中毒死亡當(dāng)時(shí)或檢材采取當(dāng)時(shí)尸體或檢材中藥物含量，指導(dǎo)選擇最佳檢材存放條件，正確分析和使用毒物分析結(jié)果。

本實(shí)驗(yàn)證明，鹽酸地芬尼多在保存血液樣品中可分解，保存溫度和抑菌劑對(duì)其影響不大。因此，鹽酸地芬尼多中毒案件法醫(yī)學(xué)鑒定中所采血樣應(yīng)在30 d內(nèi)送檢和檢驗(yàn)，否則可用其分解動(dòng)力學(xué)方程和參數(shù)推斷中毒死亡當(dāng)時(shí)或檢材采集當(dāng)時(shí)的血藥濃度。

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