項(xiàng) 榮,白馬肅,史嵩海,張紅燕

（1.西藏民族學(xué)院附屬醫(yī)院 內(nèi)一科,陜西 咸陽(yáng) 712082;2.陜西中醫(yī)學(xué)院,陜西 咸陽(yáng) 712083）

肝纖維化為諸多慢性肝病發(fā)展至肝硬化過(guò)程中所共有的病理組織學(xué)變化,肝纖維化的發(fā)生是由于ECM合成增多,降解減少而在肝內(nèi)過(guò)度沉積所致[1]。活化的肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell,HSC）是ECM的主要來(lái)源[2],HSC的激活是肝纖維化發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

1 對(duì)象與方法

1.1 本實(shí)驗(yàn)研究采用四氯化碳（CC14） 肝纖維化大鼠模型為研究對(duì)象,探討肝纖維化大鼠血MMP-2和PDGF-BB表達(dá)的影響,從分子水平探討其機(jī)理。CC14是誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生肝纖維化和肝硬化最廣泛使用的化學(xué)性肝毒物[3]。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及試劑 ①實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:清潔級(jí)大鼠22只,雄性,體重200 g±20 g,由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購(gòu)進(jìn)。動(dòng)物合格證號(hào):醫(yī)動(dòng)字第007-009號(hào)。②MMP-2和PDGF-BB抗體及免疫組化試劑盒:美國(guó)ADL公司生產(chǎn)。③100%CCL4分析純,西安化學(xué)試劑廠生產(chǎn),批號(hào):0501240

1.3 肝纖維化模型制備及分組 將實(shí)驗(yàn)大鼠在實(shí)驗(yàn)室喂養(yǎng)1周后開(kāi)始實(shí)驗(yàn),隨機(jī)抽取10只作為A組正常對(duì)照組,其余大鼠實(shí)驗(yàn)第一天每只動(dòng)物皮下注射40%四氯化碳植物油溶液（100%CCL4用植物油稀釋為40%）0.5m l/100 g,以后每隔3天皮下注射40%四氯化碳植物油溶液0.3ml/100 g,至第8周末從造模動(dòng)物中隨機(jī)處死2只大鼠作肝纖維化病理學(xué)檢查,如有2期以上纖維化形成,即確定肝纖維化模型復(fù)制成功。

1.4 肝纖維化血清指標(biāo)檢測(cè) MMP-2和PDGF-BB;檢測(cè)方法:酶聯(lián)免疫法。

2 結(jié)果

見(jiàn)表1。

表1 大鼠血清MMP-2、PDGF-BB檢測(cè)結(jié)果（±s±s）組別 N MMP-2（ng/ml） PDGF-BB（pg/ml）空白組 10 0.472±0.308* 293.63±2.15*模型組 8 3.910±0.287 458.76±1.72注:與模型組比較,*P＜0.01

3 討論

在肝纖維化的早期,MMP-2活化即增多,降解正常肝臟基質(zhì)內(nèi)的Ⅳ型膠原,導(dǎo)致細(xì)胞一基質(zhì)間的聯(lián)系破壞,進(jìn)一步促進(jìn)HSC的活化和增殖并向肌成纖維細(xì)胞（myofibrob last,M F）轉(zhuǎn)化,而MF已被證實(shí)在肝纖維化形成中起主要作用。較多研究認(rèn)為MMP-2在肝纖維化進(jìn)展階段升高,而在肝硬化和肝纖維化恢復(fù)期則逐漸降低,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定肝組織MMP-2含量,發(fā)現(xiàn)模型組與空白組作比較,MMP-2含量有較顯著的升高（P＜0.O1）;PDGF-BB在肝纖維化中的主要作用是使H SC增殖,促進(jìn)膠原合成和抑制膠原降解,在肝纖維化發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮十分重要的作用,PDGF-BB是目前已知的體外HSC最強(qiáng)的絲裂原[5],PDGF-BB在肝組織的表達(dá)與肝纖維化程度、炎癥活動(dòng)度及病理組織學(xué)分度呈正相關(guān)。PDGF-BB可促進(jìn)ECM沉積在肝臟,形成肝纖維化,研究中發(fā)現(xiàn),模型組與空白組作比較,PDGF-BB含量有較顯著的升高（P＜0.01）。

[1]Vizzutti F,A rena U,R an anelliRC,et al.L iver stiffnessm easu rement predicts severe ortal hypertension in patients withHCV-related cirrhosis[J].Hepatologx,2007,45（5）:1290.

[2]賈繼東,王惠吉.肝纖維化.見(jiàn)漆德芳主編肝硬化[M].第1版.北京:科學(xué)技術(shù)出版社,2000.85-112.

[3]Okazaki I,Watanabe T,Hozawa S,et al.Reversibility of hepatic fibrosis:from the first report of collagenase in the liver to the possibilityof gene therapy for recovery[J].Keio JMed,2001,50（2）:58.

[4]展玉清,李定國(guó).肝星狀細(xì)胞活化的功能改變[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)消化系統(tǒng)疾病分冊(cè),1999,19（1）:27.