祝 青,刁慶春

（1.樂山職業(yè)技術學院,四川614000；2.重慶市第一人民醫(yī)院皮膚科 400011）

外陰白色病變是指女性外陰皮膚和黏膜發(fā)生變性及色素改變的一種慢性疾病。由于該病確切病因至今未明,患者長期得不到有效的治療而成為臨床上的一個頑癥。國外統(tǒng)計其發(fā)病率為1/300～1/1000,其中2%～3%患者可能發(fā)生癌變[1]。而聚焦超聲治療是一種新興的無創(chuàng)物理治療手段,治療外陰白色病變有良好的效果,現(xiàn)已在臨床上廣泛應用[2],但有關其治療機制的探討卻較少。神經生長因子（NGF）是一種對中樞和外周神經系統(tǒng)都有營養(yǎng)活性的蛋白質[3]。P物質（SP）是一種由11個氨基酸組成的致炎神經肽[4]。本研究用SP免疫組化法觀察超聲治療前、后NGF和SP在外陰皮膚中的變化,探討NGF和SP在外陰白色病變發(fā)病機制中的可能作用及聚焦超聲治療外陰白色病變的可能機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本科進行聚焦超聲治療外陰白色病變的20例患者為治療組,每例患者治療前及治療后6個月病變部位各取皮膚1次,其中10例同時取外陰正常皮膚為對照組。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 患者取膀胱截石位,常規(guī)外陰備皮,消毒,局部浸潤麻醉后。用CZF型超聲治療儀（重慶海扶公司研制）對患者的外陰病變區(qū)域進行超聲治療,工作頻率為10MHz。治療探頭以3～5mm/s的速度進行連續(xù)直線掃描,輻照時間為15～30min,治療后24h內外陰間斷冷敷。

1.2.2 NGF和SP表達的檢測 采用SP法免疫組化試劑盒（北京中杉金橋生物技術有限公司研制）檢測NGF和SP蛋白表達情況,其中兔源性NGF多克隆抗體（武漢博士德生物工程有限公司研制）的工作濃度為1∶200,兔源性SP多克隆抗體（武漢博士德生物工程有限公司研制）的工作濃度為1∶100。

1.2.3 結果判斷 以細胞質、胞漿、胞膜或間質出現(xiàn)黃色/棕黃色顆粒和著色為NGF、SP表達陽性。采用生物醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)（重慶遠程醫(yī)療設備有限公司）對切片上的染色信號進行光密度分析,以平均光密度值代表信號表達強度。每張切片隨機選取3個視野（×100）,計算其平均值,進而計算出各組的平均光密度值均數(shù)。

2 結果

正常皮膚NGF和SP主要表達于表皮中上層,陽性染色呈淺黃色至棕黃色?；疾∑pNGF和SP表達于表皮全層,陽性染色呈棕黃色至棕褐色。陽性表達平均光密度值患病皮膚明顯高于正常皮膚,其差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。聚焦超聲治療6個月后復查,患病皮膚NGF和SP蛋白的染色與治療前相比明顯變淡,其陽性表達平均光密度值差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）,見表1,封3圖1、2。

表1 聚焦超聲治療前、后NGF和SP在表皮組織中陽性表達強度平均光密度值±s）

表1 聚焦超聲治療前、后NGF和SP在表皮組織中陽性表達強度平均光密度值±s）

★：P＜0.05,與對照組比較；▲：P＜0.05,與治療前比較。

組別 n NGF SP對照組 10 0.2359±0.0136 0.2036±0.0112治療組治療前 20 0.3647±0.0149★ 0.2544±0.0128★治療后 20 0.2370±0.0124▲ 0.2052±0.0125▲

3 討論

近年來研究發(fā)現(xiàn),NGF對神經系統(tǒng)以外的組織也具有重要的作用。SP是屬于速激肽家族。NGF和SP既參與組成神經免疫網絡,又是兩種重要的瘙癢介質[5]。已發(fā)現(xiàn)NGF和SP與多種疾病有關,如特應性皮炎、銀屑病、白癜風、蕁麻疹、扁平苔蘚、白塞病、斑禿等[6-11]。Horiuchi等[12]以患特應性皮炎（AD）的NC鼠為研究對象,皮損處的表皮神經纖維較對照組更為豐富,提示NGF與AD密切相關。SP是發(fā)現(xiàn)最早、分布最廣泛的一種神經肽,目前發(fā)現(xiàn)除中樞神經系統(tǒng)外,嗜酸性粒細胞、單核細胞和肥大細胞也能釋放SP[13]。SP能通過誘導前炎癥因子而直接或間接的增強皮膚炎性反應,這些細胞因子包括IL-1、IL-6、TNF-α和IFN-γ,它們又能在中樞神經系統(tǒng)和周圍組織中誘導NGF的合成。本實驗采用免疫組化的方法檢測到皮損中NGF和SP的表達明顯高于正常皮膚（P＜0.05）,提示NGF和SP可能通過啟動神經免疫網絡參與外陰白色病變的發(fā)病。

超聲波是一種機械波,超聲治療就是將超聲波束經體外發(fā)射透入組織內,到達預先選定的深度,沉積形成一個生物學焦域,對焦域內的組織產生治療作用,而不影響超聲波所經過的組織和鄰近組織[14-15]。聚焦超聲以其特有的物理特性和對正常組織無創(chuàng)的特點,開辟了無創(chuàng)治療的新領域[16]。本研究結果顯示NGF和SP表達超聲輻照后較輻照前明顯減弱,差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。推測其作用機制可能是超聲輻照后通過其物理和生化效應改變了局部組織微循環(huán),改善微血管和神經末梢的營養(yǎng)狀況和功能,促進神經末梢分泌的神經肽物質恢復正常,減少局部炎癥介質的釋放,而減輕局部炎性反應,使癥狀、體征得到改善。本實驗結果表明,影響NGF和SP的分泌和表達可能是聚焦超聲治療外陰白色病變的機制之一。

超聲波治療外陰白色病變高效而且安全,具有廣闊的發(fā)展前景,但其治療機制目前尚不清楚。本實驗發(fā)現(xiàn)超聲治療是有影響NGF和SP分泌、表達的作用,并對其治療機制進行了初步的研究,但其具體的作用機制還需要進一步的探索。

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