于振剛 王炳轍 孫開宇

Bcl-2基因，即B細(xì)胞淋巴瘤/白血病基因-2（B-cell lymphoma/leukemia-2，Bcl-2）是一種重要的凋亡調(diào)控基因，近年倍受關(guān)注，其在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展方面起重要的作用。Bax基因，即B細(xì)胞淋巴瘤/白血病基因-2相關(guān)蛋白X（Bcl-2 associated X protein，Bax）是Bcl-2家族中的促凋亡成員，Bcl-2和Bax通過阻斷凋亡信號(hào)通路中的最后共同通道而抑制細(xì)胞凋亡[1]。本實(shí)驗(yàn)通過檢測肺鱗癌中Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)及細(xì)胞凋亡，進(jìn)一步明確Bcl-2在鱗癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后方面的價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選擇我院50例鱗癌手術(shù)切除標(biāo)本，術(shù)前未行放、化療為試驗(yàn)組；選30例癌旁5cm的鏡下正常組織為對(duì)照組。試驗(yàn)組中，男性37例，女性13例，年齡為44～79歲，平均年齡為58.5歲；吸煙者43例，非吸煙者7例；按解剖類型分：中央型41例，周圍型9例；按腫瘤的最大直徑分：≤3cm者18例，＞3cm者32例；按組織分化程度分：高分化16例，中分化21例，低分化13例；按TNM分期[2]：Ⅰ期13例，Ⅱ期21例，Ⅲa期16例；按淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移分：無轉(zhuǎn)移組21例，轉(zhuǎn)移組29例。對(duì)照組中，男性23例，女性7例，年齡42～77歲，平均年齡為56.2歲。

1.2 Bcl-2、Bax的免疫組化PV-9000法檢測

陽性染色以質(zhì)膜和胞漿中出現(xiàn)明顯棕黃色或深棕黃色顆粒為準(zhǔn)。參照文獻(xiàn)[3]，據(jù)陽性細(xì)胞所占比例和陽性細(xì)胞的染色程度，對(duì)陽性細(xì)胞進(jìn)行積分。試劑盒均購自北京中山公司，PBS代替I抗作為陰性對(duì)照。

1.3 細(xì)胞凋亡檢測

陽性細(xì)胞胞核或胞核與胞漿同時(shí)為棕黃色，散在分布[4]。在400高倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)癌細(xì)胞，依據(jù)凋亡指數(shù)（Apoptosis Index，AI）=（凋亡細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)）×100％，計(jì)算出每張切片的AI。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 試驗(yàn)組中Bcl-2、Bax的表達(dá)均高于正常組織（P＜0.05），見表1。

2.2 Bcl-2、Bax在性別組、解剖類型組、不同直徑組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），Bcl-2、Bax在不同分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

2.3 試驗(yàn)組細(xì)胞凋亡指數(shù)高于正常組織（P＜0.05），見表3。

表1 Bcl-2、Bax在鱗癌組及對(duì)照組中的表達(dá)

表2 Bcl-2、Bax與鱗癌臨床病理因素的關(guān)系

表3 試驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞凋亡的比較

表4 鱗癌細(xì)胞凋亡與臨床病理因素的關(guān)系

2.4 試驗(yàn)組中AI在性別組、解剖類型組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），在不同直徑組、分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表4。

2.5 鱗癌中Bcl-2積分與AI成負(fù)相關(guān)（r=-0.73,P＜0.05）（見圖1）。

2.6 鱗癌中Bax積分與AI成正相關(guān)（r=0.78,P＜0.05）（見圖2）。

3 討論

3.1 Bcl-2基因是最早在造血系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)原癌基因，定位于人染色體18q21.3，正常組織中低表達(dá)，其發(fā)生染色體易位時(shí)細(xì)胞凋亡受抑，參與多種腫瘤的發(fā)生[4]。Bcl-2基因及其表達(dá)Bcl-2蛋白可以抑制多種組織細(xì)胞凋亡，延長細(xì)胞壽命。蛋白二聚體化是該家族成員之間功能實(shí)現(xiàn)或功能調(diào)節(jié)的重要形式。Bax與Bcl-2形成異源二聚體，抑制Bcl-2，發(fā)揮促細(xì)胞凋亡作用，Bax本身具有促細(xì)胞凋亡作用[5]。

3.2 臨床上在小細(xì)胞和非小細(xì)胞肺癌的活檢標(biāo)本中均已檢測到Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)。在鱗癌中Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)水平低于小細(xì)胞肺癌[3-4]。

3.3 Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)與細(xì)胞凋亡的關(guān)系

Bcl-2、Bax蛋白在腫瘤中的表達(dá)高于正常組織，與患者性別、年齡及腫瘤原發(fā)部位無關(guān)。不同文獻(xiàn)[6-9]分歧主要集中在Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)與肺癌TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移上。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)鱗癌細(xì)胞Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)均高于正常組織，且表達(dá)于胞漿；隨著分化程度的降低、TNM分期的升高及腫瘤組織發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，Bcl-2蛋白的表達(dá)逐漸降低，而Bax蛋白表達(dá)逐漸增高。有學(xué)者[10]發(fā)現(xiàn)非小細(xì)胞肺癌中的非鱗癌促凋亡Bax蛋白表達(dá)越低提示較差的預(yù)后。

有學(xué)者[7]發(fā)現(xiàn)，鱗癌的細(xì)胞凋亡與腫瘤分化程度有關(guān)，分化越低，細(xì)胞凋亡越高，隨著肺癌TNM分期的升高及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移而增高。本試驗(yàn)應(yīng)用TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡，發(fā)現(xiàn)鱗癌的凋亡水平高于正常組織。隨著腫瘤體積的減小、分化程度的降低、TNM分期的增加及發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，細(xì)胞凋亡逐漸升高。本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，鱗癌中Bcl-2蛋白的表達(dá)與細(xì)胞凋亡呈負(fù)相關(guān)，而Bax蛋白的表達(dá)與細(xì)胞凋亡呈正相關(guān)，提示在肺鱗癌初期Bcl-2作為凋亡調(diào)控基因，抑制了細(xì)胞凋亡，Bax與進(jìn)展中癌細(xì)胞凋亡水平的升高有關(guān)。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，肺鱗癌初期細(xì)胞凋亡受抑可能參與了鱗癌的發(fā)生、發(fā)展，結(jié)果與程哲等[8-9]結(jié)果一致，但與王允等[6]結(jié)果相反，分析可能的原因如下：一方面，機(jī)體通過細(xì)胞凋亡清除癌變的細(xì)胞，隨著腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，細(xì)胞凋亡水平逐漸升高，較多的癌變細(xì)胞被清除，是機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤發(fā)生的必然反應(yīng)。另一方面，腫瘤組織的高速生長、增殖與轉(zhuǎn)移是腫瘤早期細(xì)胞凋亡受抑，從而保持惡性腫瘤無限生長、侵襲及轉(zhuǎn)移的特征。通過對(duì)Bcl-2、Bax基因及其表達(dá)蛋白與肺鱗癌關(guān)系的研究，在臨床上可以用選擇性誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡的方法，增強(qiáng)肺鱗癌對(duì)放化療及其它治療的敏感性，以更有效治療肺鱗癌。

[1]Berrieman HK,Smith L,O'Kane SL,et al.The expression of Bcl-2 family proteins differs between nonsmall cell lung carcinoma subtypes[J]. Cancer,2005,103（7）：1415-1419.

[2]萬德森.臨床腫瘤學(xué)[M].2版.北京：科學(xué)出版社,2005：284-285．

[3]劉偉,于文成,秦筱梅,等.鱗癌Bcl-2及Bax蛋白的表達(dá)及其與細(xì)胞凋亡和增殖的關(guān)系[J].青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2005,41（2）：151-153．

[4]羅洪英,胡江輝,鄭暉.Bcl-2和Bax蛋白在青年人肺癌中的表達(dá)及臨床意義[J].郴州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校學(xué)報(bào),2003,5（1）：4-6．

[5]Sawa H,Kobayashi T,Mukai K,et al.Bax over expression enhances cytochrome c release from mitochondria and sensitizes KATOⅢ gastric cancer cells to chemotherapeutic agent induced apoptosis[J].Int J Oncol,2000，16（4）：745-749.

[6]王允,周清華,黃頤,等.人肺癌中細(xì)胞增殖、凋亡水平與預(yù)后的關(guān)系[J].腫瘤防治研究,2001,28（5）：339-341．

[7]Wang DF,Zeng CG,Lin YB,et al.Expression and clinical significance of apoptosis-related oncogenes in stage Ⅰ-Ⅱnon-small cell lung cancer[J]. Chinese Journal of Cancer,2006,25（3）,：359-362.

[8]程哲,王靜,張慶亮,等.Bax,Bcl-2在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)相關(guān)性研究[J].中原醫(yī)刊,2006,13（9）：6-7．

[9]劉紅菊,陶曉南,白明,等.調(diào)亡抑制基因Survivin,bcl-2,bax在肺癌中表達(dá)的研究[J].中國實(shí)用內(nèi)科雜志,2007.27（10）：767-769．

[10]Jeong SH,Lee HW,Han JH,et al.Low expression of Bax predicts poor prognosis in resected non-small cell lung cancer patients with nonsquamous histology[J].Jpn J Clin Oncol,2008,38（10）：661-669.