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        風(fēng)濕痛消丸對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎模型動(dòng)物的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究

        2011-02-08 07:59:14張?chǎng)?/span>肖金魚
        中國(guó)中醫(yī)急癥 2011年1期
        關(guān)鍵詞:灌胃低劑量阿司匹林

        張?chǎng)?肖金魚

        解放軍第251醫(yī)院(河北張家口075000)

        類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種病因不明的慢性消耗性、反復(fù)發(fā)作性,以關(guān)節(jié)癥狀為主的自身免疫性疾病,中醫(yī)學(xué)稱之為“白虎歷節(jié)”、“頑痹”。此病有病程纏綿難愈、其痛徹骨、致殘率高的特點(diǎn),風(fēng)濕痛消丸是解放軍第251醫(yī)院根據(jù)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)理,自行研制的一種純中藥非標(biāo)準(zhǔn)復(fù)方制劑,筆者采用風(fēng)濕痛消丸治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型動(dòng)物,以觀察其鎮(zhèn)痛效果。 臨床應(yīng)用效果滿意[1-2]。

        1 實(shí)驗(yàn)材料

        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 wistar大鼠,購(gòu)自北京軍事科學(xué)院動(dòng)物室,合格證號(hào):0172808。

        1.2 試劑及儀器 地塞米松磷酸鈉注射劑,四川長(zhǎng)征制藥廠,批號(hào):99060722;阿司匹林(原料藥),山東新華制藥股份有限公司,批號(hào):0406821;醋酸(36%分析純),廣州化學(xué)試劑二廠,批號(hào):2009061701;二甲苯 (分析純),廣東西隴化工廠,批號(hào):240605;甲醇 (分析純),山東省禹王實(shí)業(yè)化學(xué)總公司,批號(hào):20080915;青霉素,哈藥集團(tuán)制藥總廠,批號(hào):A091004108;鏈霉素,華北制藥股份有限公司,批號(hào):0907101。JL-F數(shù)顯式光熱測(cè)痛儀,上海嘉龍教儀廠。

        1.3 藥物制備 風(fēng)濕痛消丸由解放軍第251醫(yī)院中藥制劑室提供,處方:馬錢子(制)40g,川烏(制)30g,桂枝、羌活、獨(dú)活、川芎各 110g,麻黃 15g,木瓜 60g,烏梢蛇 25g,紅花 80g,杜仲 80g,土鱉蟲 40g,乳香 50g,黃芪 75g。 制備工藝[3]:取處方量的馬錢子(制)、川烏(制)、桂枝、麻黃、土鱉蟲、乳香、羌活、川芎、獨(dú)活、烏梢蛇粉碎成粗粉,備用。其余紅花、杜仲、木瓜、黃芪加6倍水煎煮 3次,第 1次 2h,第 2次 1.5h,第 3次 1h,過濾、合并濾液,濃縮至適量;將濃縮液和上述粗粉混勻,干燥后粉碎成過篩孔內(nèi)徑(180±7.6)μm 篩(80 目)的細(xì)粉,其余各藥材粉碎成細(xì)粉,過篩,混勻,用水泛丸,干燥,過篩,打光,即得。

        2 實(shí)驗(yàn)方法

        2.1 抗炎實(shí)驗(yàn)

        2.1.1 對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 小鼠50只,雌雄各半,隨機(jī)分為模型組、風(fēng)濕痛消丸高、中低劑量組及阿司匹林組。風(fēng)濕痛消丸高、中、低劑量組分別按 0.65、0.325、0.163g/kg灌胃給藥;阿司匹林組按0.06g/kg灌胃阿司匹林;模型組灌胃生理鹽水。各組給藥劑量均為1mL,每日2次,共7d。于第7天給藥1h后,每只小鼠右耳涂二甲苯0.05mL致炎,30min后小鼠脫頸椎處死,剪下耳殼,用直徑為9.0mm打孔器分別在左右兩耳同一部位打下圓耳片,精密稱質(zhì)量,以左右耳片質(zhì)量差作為腫脹度,計(jì)算右耳廓腫脹度及腫脹抑制率。抑制率(%)=[1-(給藥組兩耳片質(zhì)量差/模型組兩耳片質(zhì)量差)]×100%。

        2.1.2 對(duì)大鼠佐劑性足腫脹的影響 取大鼠50只,雌雄各半,隨機(jī)分為模型組、風(fēng)濕痛消丸高、中、低劑量組及阿司匹林組。風(fēng)濕痛消丸高、中、低劑量組分別按 0.75、0.375、0.188g/kg灌胃給藥;阿司匹林組按0.06g/kg灌胃阿司匹林;模型組灌胃生理鹽水;各組給藥劑量均為2mL。灌胃給藥1h后將弗氏完全佐劑按每只0.1mL注入大鼠右后肢足跖內(nèi),連續(xù)給藥7d,在第7天給藥后測(cè)量大鼠致炎肢的足厚度,計(jì)算腫脹抑制率。抑制率(%)=[1-(給藥后足厚度/給藥前足厚度)]×100%。

        2.2 鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)[4]

        2.2.1 熱板法鎮(zhèn)痛試驗(yàn) 取雌性小鼠100只,于55℃金屬板上觀察各鼠放在金屬板上至出現(xiàn)舔足所需時(shí)間(s)作為該鼠的痛閾值,舔足時(shí)間小于5s或大于30s或跳躍棄之不用。將合格的50只小鼠隨機(jī)分成模型組、風(fēng)濕痛消丸高、中、低劑量組、阿司匹林組,重測(cè)正常痛閾值,取兩次正常痛值平均值為其基礎(chǔ)痛閾值,分別灌胃給藥(給藥劑量同2.1.1項(xiàng)下)7d,每天2次。于第7天給藥1h后將小鼠放在55℃的恒溫金屬板上,測(cè)量其舔足時(shí)間,取兩次痛閾值的平均值,為其用藥后痛閾值分別計(jì)算各組痛閾值提高百分率。痛閾提高百分率(%)=(用藥后平均閾值-基礎(chǔ)閾值)/基礎(chǔ)閾值×100%。

        2.2.2 輻射熱照射法 取小鼠,雌雄各半,使用光熱致痛儀(紅外),將光強(qiáng)調(diào)為強(qiáng),小鼠尾放入槽內(nèi),測(cè)痛光源對(duì)準(zhǔn)距尾尖約0.5cm處測(cè)定。用輻射熱對(duì)鼠尾皮膚致痛,由輻射開始到鼠尾擺動(dòng)以逃避輻射熱的時(shí)間為甩尾的潛伏期。以連續(xù)測(cè)2次(每次間隔>5min)甩尾潛伏期的平均值為痛閾,均值在2~10s為合格。將合格的小鼠50只稱質(zhì)量標(biāo)記,分為5模型組、風(fēng)濕痛消丸高、中、低劑量組、阿司匹林組,重新測(cè)其痛閾值,作為基礎(chǔ)痛閾值。然后各組灌胃給藥(給藥劑量同2.1.1項(xiàng)下方法),每日1次,共7d。末次給藥1h后再測(cè)定痛閾值,計(jì)算痛閾提高百分率。

        2.2.3 對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 取健康小鼠50只,雌雄各半,隨機(jī)分為模型組、風(fēng)濕痛消丸高、中、低劑量組、阿司匹林組,分別灌胃給藥(給藥劑量同2.1.1項(xiàng)下方法)7d,每日2次。最后1次給藥30min后,腹腔注射0.7%醋酸溶液0.2mL/10g,觀察10min內(nèi)小鼠扭體反應(yīng)次數(shù),求得扭體反應(yīng)抑制率。抑制率(%)=[1-(給藥組扭體反應(yīng)次數(shù)/空白組扭體反應(yīng)次數(shù))]×100%。

        2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以表示,組間比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        3 結(jié) 果

        3.1 風(fēng)濕痛消丸對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 見表1。風(fēng)濕痛消丸中劑量組抑制率與模型組、低劑量組、高劑量組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與阿司匹林組比較療效相當(dāng)(P>0.05)。

        表1 風(fēng)濕痛消丸對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

        表1 風(fēng)濕痛消丸對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

        與風(fēng)濕痛消丸中劑量組比較,*P<0.05。下同。

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        3.2 風(fēng)濕痛消丸對(duì)弗氏完全佐劑致大鼠足腫脹的影響 見表2。各治療組給藥后足厚度均減小,風(fēng)濕痛消丸中劑量組與模型組、低劑量組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與高劑量組及阿司匹林組療效相當(dāng)(P>0.05)。

        表2 風(fēng)濕痛消丸對(duì)弗氏完全佐劑致大鼠足腫脹的影響

        表2 風(fēng)濕痛消丸對(duì)弗氏完全佐劑致大鼠足腫脹的影響

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        3.3 各組熱板法試驗(yàn)鎮(zhèn)痛效果比較 見表3。各治療組給藥后小鼠舔足時(shí)間均有不同程度的延長(zhǎng),風(fēng)濕痛消丸中劑量組鎮(zhèn)痛效果與模型組、低劑量組、高劑量組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與阿司匹林組相當(dāng)(P>0.05)。

        表3 各組熱板法鎮(zhèn)痛結(jié)果比較

        表3 各組熱板法鎮(zhèn)痛結(jié)果比較

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        3.4 各組輻射、熱照射法鎮(zhèn)痛效果比較 見表4。各治療組給藥后痛閾值均有提高,風(fēng)濕痛消丸中劑量組鎮(zhèn)痛效果與模型組、低劑量組、高劑量組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與阿司匹林組相當(dāng)(P>0.05)。

        表4 各組輻射熱照射法鎮(zhèn)痛效果比較

        表4 各組輻射熱照射法鎮(zhèn)痛效果比較

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        3.5 各組醋酸扭體法鎮(zhèn)痛效果比較 見表5。風(fēng)濕痛消丸中劑量組扭體反應(yīng)抑制率與模型組、低劑量組、高劑量組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與阿司匹林組相當(dāng)(P>0.05)。

        表5 各組醋酸扭體法鎮(zhèn)痛效果比較

        表5 各組醋酸扭體法鎮(zhèn)痛效果比較

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        4 討 論

        風(fēng)濕痛消丸方中馬錢子苦寒,通絡(luò)止痛,消腫散結(jié),治療關(guān)節(jié)腫脹;制川烏辛熱,祛風(fēng)濕,散寒止痛。二藥均有大毒,寒熱并用,以毒攻毒治療全身關(guān)節(jié)腫痛變形為君藥,二藥相伍,通經(jīng)散寒,除濕,消腫活血。治療類風(fēng)濕主癥和病因,因馬錢子毒性較大故以川烏制之。輔以羌活、獨(dú)活辛、苦、溫除風(fēng)濕、止痹痛。羌活走上半身,獨(dú)活走下半身,二藥一上一下走竄全身,加之麻黃、木瓜、乳香、紅花、杜仲、沒藥、川芎、續(xù)斷等抗炎鎮(zhèn)痛,祛風(fēng)除濕的藥物,能更好的治療疾病。

        風(fēng)濕痛消丸能明顯抑制二甲苯致小鼠耳腫脹及弗氏完全佐劑致大鼠足跖腫脹炎癥反應(yīng);證明其具有明顯的抗炎作用。鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)表明風(fēng)濕痛消丸對(duì)光熱致痛儀致痛和熱板致痛有很好的鎮(zhèn)痛效果,并能明顯減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù),說明風(fēng)濕痛消丸對(duì)不同刺激引起的疼痛均有良好的鎮(zhèn)痛效果,可緩解臨床炎癥反應(yīng)引起的疼痛。但是實(shí)驗(yàn)表明,鎮(zhèn)痛效果和劑量并不呈線性關(guān)系,可能由于劑量高而毒性大所致,其具體原因有待進(jìn)一步研究。

        類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是自身免疫性疾病,發(fā)病機(jī)制與細(xì)胞因子平衡狀態(tài)密切相關(guān),抗炎鎮(zhèn)痛可緩解臨床炎癥反應(yīng)引起的疼痛,并不能有效控制病情,風(fēng)濕痛消丸的對(duì)細(xì)胞因子的調(diào)控有待進(jìn)一步研究

        [1] 王書杰,張新春,俞學(xué)忠,等.風(fēng)痛寧丸的制備與臨床應(yīng)用[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2009,29(5):416-418.

        [2] 劉順良,李冬梅.風(fēng)濕痛消丸的研制與臨床應(yīng)用[J].中國(guó)藥業(yè),2004,13(5):50-52.

        [3] 王書杰,王麗萍,趙家祥,等.風(fēng)痛寧丸的制備與療效觀察[J].制劑技術(shù),2009,18 (12):54-55.

        [4] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2006:347,366-367,369.

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