蔡?hào)|閣 陳茜 方曉荷

組織蛋白酶是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的與惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)的蛋白水解酶, 能夠直接降解或激活纖溶酶原激活劑及其它酶類(lèi)而間接降解細(xì)胞外基質(zhì)成分，其活性高低可作為某些惡性腫瘤的預(yù)后指標(biāo)[1]。本課題通過(guò)分析CB與CD在人類(lèi)上皮性卵巢癌中的表達(dá)情況，探討兩者與上皮性卵巢癌惡性生物學(xué)行為的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

共收集2002年～2006年上皮性卵巢癌患者32例（漿液性囊腺癌20例，黏液性囊腺癌12例）作為研究對(duì)象，年齡21～72歲，術(shù)前均無(wú)化療、放療、免疫治療史及毒物、放射線(xiàn)、煙酒等危險(xiǎn)因素接觸史，無(wú)傳染性肝炎、自身免疫性疾病史等其它合并癥。選擇同期接受手術(shù)治療的良性卵巢上皮性腫瘤9例（漿液性囊腺瘤5例，黏液性囊腺瘤4例）。并取同期手術(shù)中因其他良性疾病而切除的正常卵巢組織13例作為對(duì)照組，患者年齡19～73歲。

1.2 免疫組化染色方法及結(jié)果判定

表1 CB、CD表達(dá)與卵巢癌臨床病理特征間的關(guān)系

兔抗人組織蛋白酶B單克隆抗體濃縮液，工作濃度1：200，購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。兔抗人組織蛋白酶D單克隆抗體濃縮液，工作濃度1：200，購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

CB著色評(píng)估：CB陽(yáng)性表達(dá)于卵巢上皮細(xì)胞，呈彌漫分布的棕黃色顆粒定位于細(xì)胞質(zhì)或位于核周。綜合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞占總體細(xì)胞數(shù)的百分比進(jìn)行半定量分析[2]?；静恢?分,著色淡1分,著色適中2分,著色深3分；著色細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞的百分率≤5％為0分，6％～25％為1分，26％～50％為2分，≥51％為3分。將每張切片平均著色程度得分與平均著色細(xì)胞百分率得分各自相乘為其最后得分，總分≥3分者為CB陽(yáng)性表達(dá)；總分＜3分者為CB陰性表達(dá)。CD為細(xì)胞漿和細(xì)胞膜染色，陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)為：凡細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕色顆粒為陽(yáng)性，雙盲法隨機(jī)選5個(gè)高倍視野計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，陽(yáng)性細(xì)胞＞75％為（+++），評(píng)3分，＞50％為（++），評(píng)2分，＞25％為（+），評(píng)1分，＜25％為（-）分，評(píng)0分。將0分和1分判斷為陰性表達(dá)，2分和3分判斷為陽(yáng)性表達(dá)。用已知染色陽(yáng)性的乳腺癌組織切片作陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

SPSS11.5軟件分析，采用x2檢驗(yàn)和Fisher 精確檢驗(yàn)法。P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CB及CD在正常卵巢組織及上皮性卵巢癌中的表達(dá)情況CB及CD染色陽(yáng)性細(xì)胞分布于胞漿（圖1），兩者表達(dá)在卵巢癌組織中較正常卵巢組織中高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 CB、CD的表達(dá)與上皮性卵巢癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系，見(jiàn)表1。

CB、CD表達(dá)與患者年齡、病理學(xué)類(lèi)型無(wú)明顯關(guān)系（P＞0.05），在臨床分期晚、體內(nèi)有腹水或發(fā)生轉(zhuǎn)移病例中其表達(dá)增高，其間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。組織學(xué)分化程度越低，CB與CD表達(dá)增高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

圖1. CB及CD在上皮性卵巢癌中的表達(dá)A ：The expression of CB in serous cystadenocarcinom a（10×10倍）B：The expression of CD in serous cystadenocarcinoma（10×20倍）

3 討論

浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移是許多惡性腫瘤治療失敗和患者死亡的主要原因。腫瘤細(xì)胞通過(guò)組織屏障和進(jìn)入血液及淋巴管的機(jī)制并不完全清楚。已有研究表明，腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移發(fā)生在基底膜降解的基礎(chǔ)上，穿過(guò)基底膜侵犯周?chē)M織，進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)[3]。組織蛋白酶通常是指一類(lèi)裂解肽鍵的蛋白水解酶，具有廣譜的蛋白水解活性，在腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用。

CB廣泛存在于哺乳動(dòng)物的各種組織中，與多種人類(lèi)腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切[4-5]。腫瘤細(xì)胞可分泌CB，并能夠激活酶原形成活性CB，在多種人類(lèi)和動(dòng)物的腫瘤中如宮頸癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌等都發(fā)現(xiàn)CB表達(dá)水平和（或）活性高于鄰近正常組織[6-8]。另有研究證實(shí)，下調(diào)或沉默CB在惡性腫瘤細(xì)胞中的表達(dá),腫瘤細(xì)胞的侵襲能力則大大減弱[9]。CD以天冬氨酰蛋白酶原的前體形式廣泛存在于人體細(xì)胞的溶酶體內(nèi),通過(guò)水解形成有催化活性的蛋白，在乳腺癌、肝癌、大腸癌患者中研究較多,并認(rèn)為其與以上腫瘤的轉(zhuǎn)移和預(yù)后有關(guān),是較好的預(yù)后指標(biāo)[10]。

本研究結(jié)果顯示，CB和CD在正常卵巢中不表達(dá)，而在上皮性卵巢癌中呈高表達(dá)，提示CB和CD參與了上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。本研究還表明，兩者在卵巢癌組織中臨床分期越高、組織學(xué)分化程度越低其表達(dá)越強(qiáng)，在發(fā)生轉(zhuǎn)移及產(chǎn)生腹水組織中其表達(dá)程度亦增強(qiáng)，提示CB和CD參與了卵巢癌的侵襲、轉(zhuǎn)移過(guò)程。已有證據(jù)表明CB和CD可能通過(guò)降解細(xì)胞外基質(zhì)蛋白,促進(jìn)腫瘤新生血管的形成等參與了惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程[11]。CD除能直接降解ECM外,還可通過(guò)激活CB進(jìn)一步降解ECM,促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。

綜上所述，CB和CD 或許可作為上皮性卵巢癌的標(biāo)志物，幫助預(yù)測(cè)腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移情況及患者的預(yù)后。且可針對(duì)其在上皮性卵巢癌中的作用特點(diǎn)，尋找其相應(yīng)的選擇性、可逆性抑制劑用于臨床疾病的治療,也是值得人們進(jìn)一步探索的熱點(diǎn)。

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