史慧勤，張利軍，彭 輝，何 俊，郭家彬，趙 君，彭雙清

（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院疾病預(yù)防控制所毒理學(xué)評(píng)價(jià)研究中心，北京 100071）

氯丙嗪 （chlorpromazine，CPZ），又稱(chēng)冬眠靈，屬于吩噻嗪類(lèi)藥物，具有鎮(zhèn)靜、抗精神病、鎮(zhèn)吐等作用，臨床常用于治療精神分裂癥和躁狂癥。若長(zhǎng)期大量使用，CPZ易在體內(nèi)蓄積，導(dǎo)致人體出現(xiàn)錐體外系反應(yīng)或遲發(fā)性運(yùn)動(dòng)障礙，并且癥狀在停藥后不易消失［1］。CPZ作為鎮(zhèn)靜類(lèi)治療藥物，在畜牧行業(yè)也被廣泛使用。雖然我國(guó)規(guī)定在動(dòng)物性食品中該藥物不得檢出（農(nóng)業(yè)部第235號(hào)公告），但由于不合理或非法使用，導(dǎo)致動(dòng)物性食品中氯丙嗪污染殘留的問(wèn)題時(shí)有發(fā)生。另外，CPZ通過(guò)動(dòng)物排泄物進(jìn)入土壤和水體，逐漸成為一種新型的環(huán)境污染物。因此，CPZ其對(duì)人類(lèi)健康的潛在威脅正日益引起人們的關(guān)注［2］。

斑馬魚(yú)（Danio rerio）作為一種與人類(lèi)基因同源性較高的新型模式動(dòng)物，其神經(jīng)系統(tǒng)簡(jiǎn)單但能夠支配復(fù)雜的活動(dòng)，可進(jìn)行運(yùn)動(dòng)、學(xué)習(xí)、記憶等相關(guān)評(píng)價(jià)［3］。神經(jīng)行為學(xué)研究中水體給藥和觀察，魚(yú)產(chǎn)生的應(yīng)激較小。此外，因其體型小、占用空間少，可用于高通量的神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)。近些年來(lái)，斑馬魚(yú)在神經(jīng)毒理學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用正逐漸受到重視。

本文以斑馬魚(yú)為研究對(duì)象，在檢測(cè)CPZ所致一般神經(jīng)發(fā)育毒性效應(yīng)的基礎(chǔ)上，研究該藥引起幼魚(yú)神經(jīng)行為學(xué)改變及神經(jīng)毒作用特征，為今后深入研究環(huán)境CPZ殘留的生態(tài)毒性效應(yīng)以及對(duì)人類(lèi)健康的危害提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)為利用斑馬魚(yú)模型建立高通量的神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)提供技術(shù)參考。

1 材料和方法

1.1 主要試劑及配制

鹽酸氯丙嗪（chlorpromazine hydrochloride）（＞ 99.0％），Sigma。幼魚(yú)孵化液（30％Danieau＇s液）。Danieau＇s溶液成分：58 mM NaCl、0.7 mM KCl、0.4 mM MgSO4、0.5 mM Ca（NO3）2、5 mM Hepes，調(diào)節(jié)PH值為7.2。以幼魚(yú)孵化液為溶劑配制不同濃度氯丙嗪受試液，配制過(guò)程盡量避光。吖啶橙，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，用 PBS（PH7.2）配制為5 mg/m l母液，使用時(shí)配制為2mg/L工作液。麻醉劑Tricaine，Sigma，用幼魚(yú)孵化液配制為0.4％母液，使用時(shí)稀釋為0.08％。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖和魚(yú)卵采集

實(shí)驗(yàn)AB系斑馬魚(yú)，取自北京大學(xué)生命科學(xué)研究院。斑馬魚(yú)的養(yǎng)殖和繁殖參照 Westerfield［4］方法。水溫（28±1）℃，光照周期 L：D=14：10。成魚(yú)雌雄分開(kāi)飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)前一天傍晚將親魚(yú)按比例（雌：雄=1：1）放入交配缸。次日晨取隔板使其自然交配。采集30min內(nèi)受精卵，放入盛有孵化液的容器中，置于28.5℃孵箱，受精后2h（2hp f）鏡下檢查，確定發(fā)育階段［5］并選擇正常受精卵備用。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

主要儀器：Noldus幼魚(yú)運(yùn)動(dòng)行為儀［Noldus Information Technology，Leesburg，VA（www.noldus.com）］；體式顯微鏡（OLYMPUS SZX16）；病理顯微鏡及成像系統(tǒng)（OLYMPUS，DP71）；電子天平（ Sartorius BT224S、LP1200S）；石蠟包埋機(jī)（Leica，EG1150H）；旋轉(zhuǎn)式顯微鏡用薄片切片機(jī)（Leica，RM2235）。

1.4 胚胎一般毒性實(shí)驗(yàn)

收集6 hp f斑馬魚(yú)胚胎置于24孔板中，12個(gè)卵/孔。將胚胎暴露于不同濃度的1m L氯丙嗪溶液中，每個(gè)濃度組設(shè)置3個(gè)平行。分別于24、48 hp f更換一半的試劑，72 hpf時(shí)全部更換為新鮮孵化液。對(duì)照組施用等量孵化液。以卵凝結(jié)和心臟停跳作為死亡終點(diǎn)，在體式顯微鏡下觀察記錄24、48、72 hpf胚胎和/或幼魚(yú)的死亡數(shù)、畸形數(shù)及幼魚(yú)孵化數(shù)，計(jì)算死亡率、畸形率和孵化率，并記錄畸形特征。

1.5 胚胎或幼魚(yú)病理學(xué)觀察

6～36 hpf暴露組胚胎經(jīng)2 mg/L吖啶橙染色1 h，方法參見(jiàn)［6］，Tricaine麻醉后在熒光顯微鏡下觀察整體胚胎凋亡細(xì)胞分布；將6～72 hpf暴露組幼魚(yú)養(yǎng)至7 dpf，取畸形幼魚(yú)麻醉后固定并制成石蠟切片，方法參見(jiàn)［7］，HE染色后顯微鏡下觀察腦部組織細(xì)胞形態(tài)變化。

1.6 幼魚(yú)機(jī)械觸動(dòng)逃避反射試驗(yàn)

選擇對(duì)幼魚(yú)生存和發(fā)育未造成明顯影響的暴露濃度，經(jīng)6～72 hpf暴露后，取3dpf幼魚(yú)置于盛有孵化液直徑為60 mm的平皿中，放在印有數(shù)個(gè)直徑為1cm圓圈的塑封紙上。輕移平皿使幼魚(yú)置于圓心位置，然后用探針輕觸幼魚(yú)尾部，記錄幼魚(yú)游動(dòng)并逃出圈外的次數(shù)。受試幼魚(yú)每濃度組10條，觸動(dòng)次數(shù)為20次/條。設(shè)正常對(duì)照。

1.7 幼魚(yú)自發(fā)運(yùn)動(dòng)觀察

選擇未對(duì)幼魚(yú)造成明顯畸形的暴露濃度，經(jīng)6～72 hpf暴露后，正常養(yǎng)至6 dpf。取外觀正常幼魚(yú)放入24孔板中，24條/濃度組。開(kāi)啟Noldus幼魚(yú)運(yùn)動(dòng)行為儀，采集 3 min幼魚(yú)自發(fā)運(yùn)動(dòng)視頻。應(yīng)用Ethovision XT軟件 （Noldus Information Technology）將運(yùn)動(dòng)軌跡可視化，導(dǎo)出移動(dòng)距離、運(yùn)動(dòng)速度等運(yùn)動(dòng)參數(shù)。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，同時(shí)設(shè)正常對(duì)照。實(shí)驗(yàn)時(shí)間：12∶00～15∶00。

1.8 幼魚(yú)對(duì)強(qiáng)光刺激的驚恐逃避反射試驗(yàn)

將2.7同批暴露的幼魚(yú)放入24孔板中，24條/濃度組?？刂芅oldus幼魚(yú)運(yùn)動(dòng)行為儀采集7 m in幼魚(yú)運(yùn)動(dòng)視頻，其中前、后3 min無(wú)光照，中間1 min （即第4 m in）突然開(kāi)啟底燈強(qiáng)光照射1 min后迅速關(guān)閉。應(yīng)用Ethovision XT軟件導(dǎo)出運(yùn)動(dòng)速度、運(yùn)動(dòng)距離等參數(shù)。實(shí)驗(yàn)設(shè)2次重復(fù)，設(shè)正常對(duì)照。實(shí)驗(yàn)時(shí)間為18∶30～20∶00。

1.9 結(jié)果統(tǒng)計(jì)和分析

應(yīng)用SPSS11.5軟件計(jì)算半數(shù)致死濃度（LC50）和半數(shù)致畸濃度（EC50）。計(jì)算致畸指數(shù) TI= LC50/EC50；將運(yùn)動(dòng)參數(shù)按濃度組匯總，進(jìn)行單因素One-Way方差分析，比較組間量-效相關(guān)性或組內(nèi)的時(shí)效關(guān)系。

2 結(jié)果與分析

2.1 氯丙嗪對(duì)斑馬魚(yú)胚胎的一般毒性作用觀察

在72 hpf內(nèi)，氯丙嗪暴露濃度＞5.0 mg/L時(shí)，可引起斑馬魚(yú)胚胎可出現(xiàn)濃度依賴(lài)性死亡；＞2.5 mg/L致畸作用和胚胎孵化遲滯具有量效關(guān)系（圖1 -3）。72 hpf幼魚(yú) LC50=9.23 mg/L；EC50=5.44 mg/L；致畸指數(shù)TI=1.69＞1，結(jié)合畸形表現(xiàn)：卵黃突出、頭部和眼部發(fā)育不良、脊索彎曲、短尾、圍心包水腫并伴有細(xì)胞沉積（圖4），提示該藥對(duì)斑馬魚(yú)胚胎組織尤其是神經(jīng)發(fā)育有潛在致畸效應(yīng)。

圖1 6hpf暴露于不同濃度氯丙嗪后斑馬魚(yú)胚胎的總死亡率（n=36）Fig.1 The cumulative mortality in zebrafish embryos at 24，28 and 72 hpf upon exposed to different CPZ concentrations（0，5.0，7.5，10.0，12.5，15.0 and 20.0 mg/L）from 6 hpf（n=36）

圖2 6hpf暴露于不同濃度氯丙嗪后斑馬魚(yú)胚胎的總畸形率（n=36）Fig.2 The cumulative malformation rate in zebrafish embryos at 24，48 and 72 hpf upon exposed to different CPZ concentrations（0，2.5，5.0，7.5，10.0，12.5 and 15.0 mg/L）from 6 hpf（n=36）

2.2 氯丙嗪對(duì)斑馬魚(yú)胚胎中樞神經(jīng)系統(tǒng)的病理學(xué)觀察

圖3 6hpf暴露于不同濃度氯丙嗪后斑馬魚(yú)胚胎的總孵化率（n=36）Fig.3 Percentage of hatching in zebrafishembryos/larvae at 48 and 72 hpf uponexposed to different CPZ concentrations（0，0.63，1.25，5.00 and 10.00 mg/L） from 6 hpf（n=36）

整體胚胎吖啶橙染色后發(fā)現(xiàn)，≥5 mg/L暴露組胚胎（36 hpf）體內(nèi)凋亡細(xì)胞主要分布于中后腦連接處、中腦、后腦、底部丘腦區(qū)、脊索及尾部，并有有一定的劑量反應(yīng)趨勢(shì)（見(jiàn)圖5）。石蠟切片病理檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，7 dpf幼魚(yú)腦發(fā)育不良、腦部體積減小、顱腔增大；腦細(xì)胞體積減小、腦細(xì)胞間隙增大（見(jiàn)圖6）。

2.3 氯丙嗪對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)神經(jīng)行為學(xué)的影響

2.3.1 氯丙嗪暴露對(duì)幼魚(yú)（3 dpf）觸動(dòng)逃避反應(yīng)能力的影響

最高暴露濃度為1 mg/L，胚胎一般毒理學(xué)檢測(cè)不引起明顯致畸（資料未附）。6～72 hpf暴露后3 dpf幼魚(yú)的觸動(dòng)逃避反射試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，≥0.125 mg/L組幼魚(yú)逃離設(shè)定范圍的次數(shù)減少，對(duì)觸動(dòng)刺激的反應(yīng)敏感性降低 （見(jiàn)圖7），結(jié)果提示氯丙嗪暴露后幼魚(yú)存在感覺(jué)運(yùn)動(dòng)障礙。

圖7 6～72 hpf CPZ暴露后3 dp f幼魚(yú)觸動(dòng)逃避次數(shù)（平均次數(shù)/20次）（n=10）注：*與正常對(duì)照相比。P＜0.05Fig.7 The mean escape times of 3 dpf larvae in 20 times tactile sensitivitie test after 6～72 hpf CPZ exposure（n=10）*vs control，P＜0.05

2.3.2 氯丙嗪暴露對(duì)幼魚(yú)（6 dpf）自發(fā)運(yùn)動(dòng)的影響

在最高暴露濃度為2.0 mg/L下，胚胎一般毒理學(xué)檢測(cè)不引起明顯致畸效應(yīng)（資料未附）。6 dp f幼魚(yú)的自發(fā)運(yùn)動(dòng)觀察及運(yùn)動(dòng)軌跡分析表明：與正常對(duì)照相比，暴露組幼魚(yú)運(yùn)動(dòng)隨劑量增加，出現(xiàn)僵直不動(dòng)、震顫或快速刻板式轉(zhuǎn)圈運(yùn)動(dòng)，并且自發(fā)觸壁游動(dòng)方式消失（見(jiàn)圖8）。運(yùn)動(dòng)參數(shù)分析發(fā)現(xiàn)，暴露幼魚(yú)自發(fā)運(yùn)動(dòng)能力受到抑制。最高濃度組（2.0 mg/ L）幼魚(yú)的運(yùn)動(dòng)速度低于正常對(duì)照；因高濃度暴露組運(yùn)動(dòng)兩級(jí)分化，為防止取平均速度掩蓋真實(shí)情況，按每10 mm/s為一個(gè)等級(jí)將速度分級(jí)，分析發(fā)現(xiàn)≥0.5 mg/L組平均運(yùn)動(dòng)等級(jí)低于對(duì)照組，這與濃度組間3 m in總移動(dòng)距離比較結(jié)果一致。

2.3.3 氯丙嗪暴露對(duì)幼魚(yú)（6dp f）驚恐逃避反射能力的影響

各濃度組在光照1 min內(nèi)運(yùn)動(dòng)速度較之前黑暗期均增快，各濃度組間加速度與對(duì)照相比未見(jiàn)明顯改變（見(jiàn)圖10）表明在安靜（或睡眠）狀態(tài)下，幼魚(yú)對(duì)突發(fā)強(qiáng)光刺激表現(xiàn)為瞬時(shí)速度加快即驚跳現(xiàn)象，暴露組幼魚(yú)的這種反應(yīng)能力與對(duì)照相比沒(méi)有顯著差異（見(jiàn)圖11）。關(guān)閉光源后，對(duì)照組幼魚(yú)在2 m in內(nèi)即恢復(fù)至給光前的水平，而高濃度組（≥1mg/L）則在1m in內(nèi)就很快降低。值得注意的是，低濃度組（0.125 mg/L和 0.25 mg/L）經(jīng)過(guò) 3 m in恢復(fù)期運(yùn)動(dòng)水平與光照期無(wú)顯著差異，速度不僅高于仍然高于光前而且還高于對(duì)照組和高濃度組（見(jiàn)表1）。此現(xiàn)象提示不同暴露濃度下，幼魚(yú)在驚恐后的恢復(fù)過(guò)程存在差異，高濃度對(duì)光刺激引起的活躍運(yùn)動(dòng)有較強(qiáng)的抑制作用，低濃度可能存在一定程度的興奮效應(yīng)因而延緩幼魚(yú)的暗適應(yīng)時(shí)程。

3 討論

氯丙嗪作為中樞神經(jīng)抑制劑，主要是通過(guò)阻斷腦內(nèi)多巴胺D2受體而產(chǎn)生鎮(zhèn)靜作用。該藥進(jìn)入機(jī)體后主要經(jīng)肝微粒體藥物代謝酶代謝和與葡糖醛酸結(jié)合，經(jīng)腎臟排出，t1/2為30 h［8］。CPZ進(jìn)入體內(nèi)后可分布于全身各組織，以肝、腦等組織含量較高，腦中濃度為血中的10倍。由于排出過(guò)程緩慢，容易造成機(jī)體內(nèi)藥物殘留。CPZ作為一種鎮(zhèn)靜類(lèi)獸藥，隨畜牧業(yè)發(fā)展，CPZ被濫用、亂用和非法使用的現(xiàn)象逐漸增多，直接導(dǎo)致了食品性動(dòng)物和環(huán)境中殘留污染問(wèn)題日益嚴(yán)重。有報(bào)道表明，1人食用CPZ等鎮(zhèn)靜類(lèi)藥物殘留的肉類(lèi)食品后，可出現(xiàn)意識(shí)模糊、嗜睡等癥狀［9］。因而，CPZ作為獸藥和環(huán)境污染物對(duì)人類(lèi)健康的潛在危害正日益引起人們的重視。

圖9 6～72 hp f CPZ暴露后6 dpf幼魚(yú)自發(fā)運(yùn)動(dòng)參數(shù)分析（n=72）注：A速度；B速度等級(jí)；C：3 m in移動(dòng)距離。其中速度等級(jí)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)；V（velocity）≤10 mm/s為1級(jí)； 0 mm/s＜V≤20 mm/s為2級(jí)；20 mm/s＜V≤30 mm/s為3級(jí)；以此類(lèi)推，*與正常對(duì)照相比，P＜0.05Fig.9 The 6 dpf larvae behavioral parameter analysis after 6～72 hpf CPZ exposure in the spontaneous movement（n=72）A：velocity；B：Velocity dass；C：total distance in 3 min.Standard of velocity class increasing a class at every 10 mm/s speed.*vs.controls，P＜0.05

圖10 6～72 hp f CPZ暴露后光驚恐逃避反射試驗(yàn)中6 dpf幼魚(yú)運(yùn)動(dòng)速度（n=48）Fig.10 The velocity changes of 6 dpf larvae in ligh t-evoked startle escape response test after 6～72 hpf exposure to CPZ（n=48）

圖11 6～72 hpf光驚恐逃避反射試驗(yàn)6 dpf幼魚(yú)暗-光交替時(shí)加速度（n=48）Fig.11 The accelerated speed changes of 6 dpf larvaeat dark-light transition in light-evoked startle escape response test after 6～72 hpf exposure to CPZ（n=72）

表1 光照驚恐逃避反射試驗(yàn)中6 dp f幼魚(yú)速度比較Tab.1 The velocity comparison of 6～72 hpf exposure to CPZ on 6dpf larvae tested in light-evoked startle escape response

CPZ具有高度的親脂性，易透過(guò)血腦屏障，嬰幼兒藥物代謝功能不完善，對(duì)其的毒性敏感性要高于成人。有研究表明CPZ可抑制小鼠腦細(xì)胞內(nèi) NO合成酶和羥酸酯酶的活性［10，11］，從而造成腦神經(jīng)元損傷。因此本實(shí)驗(yàn)采用模式動(dòng)物斑馬魚(yú)胚胎和早期幼魚(yú)作為研究對(duì)象，對(duì)CPZ暴露后引起的斑馬魚(yú)神經(jīng)發(fā)育毒性特征進(jìn)行研究，為探討CPZ對(duì)嬰幼兒神經(jīng)發(fā)育毒性提供線索。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，一定劑量的CPZ暴露具有對(duì)斑馬魚(yú)胚胎和幼魚(yú)的致畸效應(yīng)，并可引起胚胎神經(jīng)細(xì)胞凋亡和幼魚(yú)腦發(fā)育遲緩。在不引起明顯致畸效應(yīng)的暴露濃度下，CPZ可引起6dp f幼魚(yú)神經(jīng)行為學(xué)的改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：即使已經(jīng)脫離暴露3d，幼魚(yú)的自發(fā)運(yùn)動(dòng)能力仍可受到CPZ的影響，暴露組幼魚(yú)自發(fā)運(yùn)動(dòng)受到抑制并存在一定的量-效關(guān)系，少數(shù)幼魚(yú)還存在震顫、僵直不動(dòng)和刻板式轉(zhuǎn)圈運(yùn)動(dòng)等類(lèi)似錐體外系反應(yīng)表現(xiàn)。此外，幼魚(yú)在外界刺激發(fā)生后恢復(fù)時(shí)程也發(fā)生改變，高劑量對(duì)刺激引起的興奮呈抑制效應(yīng)，而低劑量則具有促進(jìn)作用，這與文獻(xiàn)［12］報(bào)導(dǎo)的CPZ雖引起大鼠活動(dòng)性抑制但在操作性條件反射活動(dòng)改變存在劑量反應(yīng)現(xiàn)象相一致。因此，CPZ在暴露撤除后對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)仍存在殘留效應(yīng)，

本實(shí)驗(yàn)使用模式動(dòng)物斑馬魚(yú)作為神經(jīng)發(fā)育毒性評(píng)價(jià)對(duì)象，除因其具有應(yīng)用于毒理學(xué)研究的共同優(yōu)點(diǎn)，即實(shí)驗(yàn)對(duì)象易得、體外發(fā)育時(shí)間可控、給藥方便、透明易觀察等特點(diǎn)［13］外，作為研究神經(jīng)系統(tǒng)的脊椎動(dòng)物模型，又有其獨(dú)特優(yōu)勢(shì)［14］。首先，在發(fā)育期的前幾天，斑馬魚(yú)通體透明，在活體或完整的固定標(biāo)本中很容易觀察染料、熒光示蹤劑、抗體和基因探針的分布情況［15］。許多定性的和定量的生物學(xué)終點(diǎn)不用通過(guò)人工分離細(xì)胞或器官，在完整的斑馬魚(yú)神經(jīng)系統(tǒng)中就能進(jìn)行快速檢測(cè)。第二，斑馬魚(yú)大腦具有典型脊椎動(dòng)物腦部形態(tài)學(xué)特征［15］。從前到后，從腹面到背面均有具有明確的分區(qū)，并且形態(tài)發(fā)育遵循保守的進(jìn)化機(jī)制。斑馬魚(yú)軸突的位置與其他脊椎動(dòng)物也非常相似。第三，神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)抗體和神經(jīng)基因序列廣泛應(yīng)用［16］；利用在感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)、腦區(qū)神經(jīng)連接處表達(dá)的基因或特異性抗體，能夠?qū)⑸窠?jīng)構(gòu)造和軸突的變化可視化，從而對(duì)神經(jīng)毒性作用進(jìn)行直觀評(píng)價(jià)。第四，斑馬魚(yú)具有學(xué)習(xí)、攻擊、運(yùn)動(dòng)等一系列的復(fù)雜行為［3］，是一種比較好的行為學(xué)評(píng)價(jià)模型。對(duì)其進(jìn)行適應(yīng)性、學(xué)習(xí)、記憶等相關(guān)評(píng)價(jià)，能夠分析早期毒物的暴露對(duì)成魚(yú)的視神經(jīng)和中樞神經(jīng)的毒性作用。此外，斑馬魚(yú)的運(yùn)動(dòng)行為按照固定的順序發(fā)育，是評(píng)價(jià)藥物對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)發(fā)育毒性作用的依據(jù)。

本實(shí)驗(yàn)中0.125 mg/L CPZ暴露即可引起3 dpf幼魚(yú)對(duì)觸動(dòng)敏感性下降，參照文獻(xiàn)［17］粗略估算 CPZ對(duì)斑馬魚(yú)胚胎的暴露量約為0.7 mg/kg，接近或低于小鼠的神經(jīng)毒作用劑量（1.2 mg/kg）［12.18］，但值得注意的是，在撤除0.125～2.0 mg/L CPZ（約為0.7～11.2 mg/kg暴露量）3 d后，斑馬魚(yú)幼魚(yú)運(yùn)動(dòng)仍能表現(xiàn)類(lèi)似錐體外系反應(yīng)或遲發(fā)型運(yùn)動(dòng)障礙等表觀癥狀，并且條件反射活動(dòng)改變與大鼠實(shí)驗(yàn)相似，同時(shí)，幼魚(yú)還存在體型?。?～6 mm）、占用空間少，具有進(jìn)行運(yùn)動(dòng)行為學(xué)的高通量篩選的優(yōu)勢(shì)，因而與嚙齒動(dòng)物模型相比，應(yīng)用斑馬魚(yú)胚胎和早期幼魚(yú)作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行外源性化合物的神經(jīng)發(fā)育毒性評(píng)價(jià)更為敏感、經(jīng)濟(jì)和快捷。至于如何把斑馬魚(yú)神經(jīng)毒性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果外推到人，還存在很多未解的問(wèn)題，如斑馬魚(yú)胚胎和人類(lèi)相比對(duì)特殊化合物和普通藥物種類(lèi)的靈敏性和易感性；以水為載體的斑馬魚(yú)ADME與通過(guò)其他途徑用藥的人類(lèi)ADME之間的可比性等，都還需要我們?cè)诮窈蟮膶?shí)踐應(yīng)用中不斷積累經(jīng)驗(yàn)，逐步加以解決。

［1］魯桂芳，滕青賢.氯丙嗪不良反應(yīng)回顧性分析［J］.中國(guó)醫(yī)院用藥評(píng)價(jià)與分析，2007，7（5）：388-390.

［2］李婷，周啟星.氯丙嗪生態(tài)毒理效應(yīng)與人體健康影響研究與展望［J］.生態(tài)學(xué)雜志，2006，25（12）：1554-1558.

［3］Guo S.Linking genes to brain，behavior and neurological diseases：what can we learn from zebrafish?［J］.Genes Brain Behav，2004，3，63-74.

［4］Westerfiled M.The zebrafish book（4th）［M］.Eugene：University of Oregon Press，2000.

［5］Kimmel C.，Ballard W.W.，Kimmel S.R.，et al.Stages of embryonic development in the zebrafish［J］.Dev.Dyn.，1995，203：253-310.

［6］Gu A.，Shi X.，Yuan C.，et al.Exposure to fenvalerate causes brain impairment during zebrafish development［J］.Toxicology Letters，2010，197：188-192.

［7］袁廣明，胡黎平，李燕，等.成年斑馬魚(yú)石蠟連續(xù)切片的制作和蘇木精-伊紅染色［J］.解剖學(xué)研究，2006，28（1）：173-75.

［8］李瑞.藥理學(xué)（第5版）［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2005，134-135.

［9］張春旺，潘心紅，馮彩群.一起由氯丙嗪引起的食物中毒的快速測(cè)定［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2001，11（1）：109-110.

［10］Lores-Arnaiz S.，D＇Amico G.，Czerniczyniec A.，et al.Brain m itochondrial nitric oxide synthase：in vitro and in vivo inhibition by chlorpromazine［J］.Arch.Biochem.Biophys.2004，430：170 -177.

［11］Radenovic L.，Kart elija G.Chlorpromazine treatment induced inhibition of intracellular biochemical activity of mousebraint issue［J］.Acta Vet.Beogr.，2000，50（5-6）：361-373.

［12］Tsay H.J.，Wang.Y.H.，Chen W.L.，et al.Treatment with sodium benzoate leads to malformation of zebrafish larvae［J］.Neurotoxicology and Teratology，2007，29：562-569.

［13］孫智慧，賈順姬，孟安明.斑馬魚(yú)：在生命科學(xué)中暢游［J］.生命科學(xué)，2006，18（5）：431-436.

［14］Parng C.，Roy N.M.，Ton C.，et al.Neurotoxicity assessment using zebrafish ［J］. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods2007，55，103-112.

［15］Patarnello T.，Bargelloni L.，Boncinelli E.，et al.Evolution of Emx genes and brain development in vertebrates［J］.Proc.Biol.Sci.1997，264，1763-1766.

［16］Tropepe V.，Sive H.L.Can zebrafish be used as a model to study the neurodevelopmental causes of autism?［J］.Genes Brain Behav.2003，2，268-281.

［17］羅質(zhì)璞，徐玉坤，王靜明.寧?kù)o劑對(duì)大鼠固定比率操作行為的影響［J］.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊，1986，10（4）：282-285.

［18］Simón V.M.，Parra A.，Mi?arro J.，et al.Predicting how equipotent doses of chlorpromazine，haloperidol，sulpiride，raclopride and clozapine reduce locomotor activity in mice［J］.Eur.Neurop sychopharmacol.，2000，10：159-164.