陳玉秀 張勝

高效液相色譜法測定當歸養(yǎng)血丸中丹皮酚的含量

陳玉秀 張勝

目的建立了高效液相色譜法測定當歸養(yǎng)血丸中丹皮酚的檢測方法。方法色譜條件為C18色譜柱;柱溫為室溫;流動相:甲醇-水(70∶30);流速1 ml/min;檢測波長:274 nm。結果丹皮酚在0.0102～0.0510 mg/ml范圍內具有良好的線性關系(r=0.9999)。加樣回收率為99.12%(RSD為2.88%，n=9)。結論比種方法簡便，準確度高。

當歸養(yǎng)血丸;丹皮酚;高效液相色譜法

當歸養(yǎng)血丸是中國藥典載入品種，具有益氣養(yǎng)血調經的功效。用于氣血兩虛所致的月經不調，癥見月經提前、經血量少或量多、經期延長、肢體乏力。2010版中國藥典一部中當歸養(yǎng)血丸只有當歸與丹皮的薄層鑒別而沒有含量測定［1］。因此我們開發(fā)了丹皮酚的含量測定項目，進一步提升了該產品質量控制水平?，F(xiàn)報告如下。

1 儀器與試藥

PERKIN ELMER高效液相色譜系統(tǒng):Series 200 LC四元低壓梯度泵;Model 785A紫外檢測器;NELSON 200 Series色譜工作站;200 Series自動進樣器。丹皮酚對照品購自中國藥品生物制品檢定所，含量測定用，批號:0708-9704。當歸養(yǎng)血丸由本廠提供(批號:1008261、1008271、1008281);陰性對照樣品(按處方除去牡丹皮按制法工藝制成)。分析用甲醇為色譜純，水為三重蒸餾水，其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent C18，250×4.6 mm 5μm(Agilent公司產);柱溫:室溫;流動相:甲醇-水(70:30);流速1 ml/min;檢測波長:274 nm，進樣量10μL。在此色譜條件下，丹皮酚可達到基線分離，見圖1，2。理論板數(shù)按丹皮酚峰計算不低于3500。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱取干燥至恒重丹皮酚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含丹皮酚對照品20 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品水蜜丸，研碎，取1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 m l，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率33 KHz)45 min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.3 線性關系的考察 精密稱取丹皮酚對照品2.55 mg，置25 m l量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。精密吸取此溶液2 m l，置10m l量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得丹皮酚對照品溶液(濃度為0.0204 mg/ml)。精密吸取上述對照品溶液5、10、15、20、25 μl(相當于濃度為 0.0102、0.0204、0.0306、0.0408、0.0510 mg/ml)，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以對照品進樣量x(g)為橫座標，進樣峰面積值Y(mv.s)為縱座標，繪制標準曲線，結果Y=81732x-4853.08，r=0.9999。表明丹皮酚在 0.0102～0.0510 mg/m l范圍內具有良好的線性關系。

2.4 精密度試驗 精密吸取上述對照品溶液10μl，重復進樣6次，測定，記錄峰面積，求得相對標準偏差 RSD為0.41%，結果說明儀器的精密度較好。

2.5 重現(xiàn)性試驗 稱取樣品6份(批號:1008261)，每份1 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法操作，依法進樣測定，計算含量，求得相對標準偏差RSD為1.56%，結果表明，本法測定具有良好的重現(xiàn)性。

2.6 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液，在室溫下，分別于配制后0、2、4、6 h進行丹皮酚峰面積測定，每次進樣 10μl，測得供試品溶液于6 h內的峰面積平均值RSD為1.79%，結果表明供試品溶液在6 h內穩(wěn)定。

2.7 專屬性試驗 精密稱取缺牡丹皮的陰性對照樣品，按供試品溶液制備方法操作，依法測定，記錄色譜圖，結果見圖3。對比圖1、2、3，當歸養(yǎng)血丸供試品在與丹皮酚對照品在相同保留時間處有色譜峰，而陰性對照樣品在與丹皮酚對照品相同保留時間處無色譜峰。表明樣品中無干擾丹皮酚檢測的成分存在。方法的專屬性強。

2.8 回收率試驗 采用加樣回收法，稱取已知含量的同一批當歸養(yǎng)血丸(批號:1008261;丹皮酚含量為0.513 mg/g)0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入對照品溶液，按照供試品溶液制備方法制備。按正文方法，進樣，測定，計算，求得丹皮酚平均回收率為99.12%，RSD=2.88%，結果見表1。結果表明，本法回收率較好，方法可行。

2.9 樣品測定 精密稱取當歸養(yǎng)血丸(批號:1008261、1008271、1008281)，照供試品溶液制備方法制備，分別精密吸取供試品溶液10μl，按上述色譜條件測定，計算樣品中丹皮酚的含量。結果見表2。

圖1 丹皮酚對照品的HPLC圖譜

圖2 當歸養(yǎng)血丸樣品的HPLC圖譜

圖3 當歸養(yǎng)血丸陰性樣品的HPLC圖譜

表1 丹皮酚回收率試驗

表2 樣品含量測定(n=3)

3 討論

中國藥典當歸養(yǎng)血丸所載丹皮酚的薄層鑒別方法，我們在操作時發(fā)現(xiàn)有斑點不明顯的情況出現(xiàn)。需要通過增大點樣量或者對薄層板加熱才使顯色斑點變清晰。因此，作者是薄層鑒別檢出限較高所致。此外薄層鑒別不能定量。如果改用高效液相色譜法，則可對產品質量有較客觀的判斷，同時也解決了該標準沒有含量測定方法的缺陷。通過上述實驗結果，我們認為該方法簡便，準確，可用于當歸養(yǎng)血丸的質量控制。

［1］中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部).中國醫(yī)藥科技出版社，2010:688.

Determ ination of Paeonol in Danggui Yangxue pills by HPLC

CHEN Yu-xiu，ZHANGSheng．Pharmic Secondary School of Hunan Province，Hunan，410014，China

ObjectiveTo establish a HPLC method for determining the paeonol content in Danggui Yangxue Pills.M ethods HPLC was used to detect Paeonol in Danggui Yangxue pills with C18column.The mobile phase consisted ofmethanol-H2O(70∶30).The flow rate was 1.0 ml/min and column temperature was 25℃.The detecting wavelength was at274 nm.ResultsThemethod was linear at the range of0.0102～0.0510 mg/m l for Paeonol(r=0.9999).The average recovery ratewas99.12%，RSD=2.8%，n=9).ConclusionThe method is convenient and accurate，which can be applied to the content determination of paeonol and the quality control of Danggui Yangxue pills.

Danggui Yangxue pills;Paeonol;HPLC

410014 湖南省醫(yī)藥中等專業(yè)學校(陳玉秀);湖南湘雅制藥有限公司(張勝)